Načasování spouštění ve ovariálních stimulacích

Cílem této studie je provést klinickou studii v jediném centru, aby se zjistilo, zda odložení spouštění o dva dny přinese kvalitnější embrya než pravidelné načasování spouštění při stimulaci vaječníků pomocí antagonistického protokolu při oplodnění in vitro. Což může dále zlepšit kumulativní míru porodnosti (CLBR). Výsledky této studie pomohou neplodným párům a lékařům poznat a zvolit optimální léčbu v antagonistickém protokolu.

Plánujeme jednocentrovou, otevřenou, randomizovanou kontrolovanou klinickou studii (poměr léčby 1:1). V den pravidelného načasování spouštění (tři folikuly dosáhnou 17 mm) nebo o dva dny později. 36-38 hodin po spuštění bude odběr oocytů aplikován v obou skupinách podle stejného protokolu. Poté bude obdobně implementováno IVF/ICSI a kultivace embryí se standardním protokolem v léčbě asistované reprodukce v našem centru. Informace o všech účastnících a výsledky jsou zaznamenány ve formuláři případové zprávy. Vývojový diagram se řídil kontrolním seznamem SPIRIT znázorňujícím zápis, alokaci, léčbu a sledování účastníků.

Kritéria pro zařazení:

• Věk: ≥18 a <35 let
• Počet antrálních folikulů (AFC): ≥5 a <20
• Antimullerovský hormon (AMH): ≥1,1 ng/ml a <2,5 ng/ml
• Index tělesné hmotnosti (BMI): ≥18,5 kg/m2 a <29 kg/m
• První nebo druhý cyklus ART
• Pravidelné menstruační cykly (mezi 22 a 35 dny)
• Přítomny dva vaječníky
• Plánováno pro jednodenní nebo dvoudenní transfer 3
• Neplodné páry plánovaly svůj první cyklus IVF/ICSI s fixním protokolem antagonisty.
• Získaný informovaný souhlas.

Kritéria vyloučení:

• Ženy s kontraindikací pro IVF nebo ICSI, jako je špatně kontrolovaný diabetes mellitus 1. nebo 2. typu; nediagnostikované onemocnění jater nebo dysfunkce (na základě výsledků testů jaterních enzymů v séru); onemocnění ledvin nebo abnormální funkce ledvin v séru; významná anémie; anamnéza hluboké žilní trombózy, plicní embolie nebo cerebrovaskulární příhody; nekontrolovaná hypertenze nebo známé symptomatické srdeční onemocnění; anamnéza (nebo podezření) na karcinom děložního čípku, karcinom endometria nebo karcinom prsu; a nediagnostikované vaginální krvácení.
• Předchozí anamnéza špatné ovariální odpovědi (<4 získané oocyty) s maximální dávkou ovariální stimulace (OS) (≥300 IU/den) nebo ovariálního hyperstimulačního syndromu (OHSS), bez ohledu na dávku gonadotropinu
• Známé důvody zhoršené implantace (tj. hydrosalpinx, fibroid distorzující dutinu endometria, Ashermanův syndrom, trombofilie nebo endometriální tuberkulóza)
• Opakované potraty (> 2 předchozí biochemická těhotenství nebo > 2 spontánní potraty)
• Opakované selhání implantace (>3 neúspěšné cykly s kvalitními embryi)
• Syndrom polycystických vaječníků (PCOS)
• Neléčená dysfunkce štítné žlázy
• Podávání exogenních E2, P4 nebo gonadotropinů v předchozím menstruačním cyklu
• Aktivní ženské kouření
• Pokračující těhotenství
• Ženy, které se dříve přihlásily do soudního řízení
• Ti, kteří nejsou schopni pochopit výzkumnou povahu navrhované studie
• buď partner nebo partnerka musí obdržet dárcovské spermie nebo dárkyně vajíčka.
• Mužský partner nebo partnerka musí podstoupit preimplantační genetickou diagnostiku (PGD) a preimplantační genetický screening (PGS).

Výběrová kritéria:

• Účastníci, kteří nejsou ochotni pokračovat ve zkušebních postupech nebo odvolat informovaný souhlas.
• Účastníci, u kterých se během studie jeví špatná kompliance, a výzkumníci potvrzují, že je nutné jejich studii přerušit.
• Ztráta na sledování. Nábor Neplodné páry, které přijdou do ambulance, budou v rámci rutinního vyšetření vyšetřeny vyškoleným klinickým týmem, který dobře zná příslušná kritéria. Příslušné pacientky pak osloví člen výzkumného týmu a vysvětlí jim podrobnosti studie před řízenou ovariální hyperstimulací (COH). Po těchto informacích bude párům nabídnut čas na zvážení, aby se rozhodly zúčastnit se zkoušky. Pokud pár souhlasí s účastí, domluví si schůzku k podpisu souhlasu před COH. Párům, které účast odmítnou, se dostane konvenční péče. O všech nerekrutovaných pacientech a důvodech vyloučení bude pořízen a uchován individuální záznam.

Řízená ovariální hyperstimulace Všechny pacientky dostanou fixní antagonistický protokol léčby COH, který se provádí standardními postupy v každém studijním centru. Léčba bude zahájena 2. nebo 3. den spontánního menstruačního cyklu a budou testovány základní ultrazvukové vyšetření pánve a také základní sérové ​​hormony (jako je FSH, luteinizační hormon (LH), progesteron (P) a β-hCG). pro potvrzení stavu listů. Všem účastníkům bude subkutánně podán rFSH. Počáteční dávka rFSH je 200 IU a následná dávka bude upravena podle stavu vaječníků. Pro sledování růstu folikulů bude testován transvaginální ultrazvuk v B-módu, LH v moči a sérum E2. V den 5 stimulace bude antagonista GnRH 0,25 mg denně podáván subkutánně až do spouštěcího dne (včetně spouštěcího dne). Skupina A spouště je 3 nebo více folikulů dosahujících průměru ≥17 mm, skupina B spouště je o 2 dny později než skupina A s kontinuálně Gn. Všem pacientům bude GnRH agonista 0,2 + hCG 2000 IU podán jednou injekcí v den spuštění.

Odběr a příprava oocytů Odběr oocytů je naplánován na 36 hodin (±2) po injekci hCG. Rutinní odběr oocytů se provádí pod transvaginálním ultrazvukovým vedením pomocí 17G jehly pro aspiraci oocytů s použitím intravenózní sedace. Získané komplexy cumulus oocyte (COC) budou přiděleny k podstoupení konvenčního IVF nebo ICSI. Pro obě skupiny jsou COC umístěny do kultivačního média pokrytého lehkým parafinovým olejem a inkubovány ve zvlhčeném 37℃,5% CO2 inkubátoru po odebrání oocytů okamžitě. Kromě toho jsou COC inkubovány po dobu 2-6 hodin před inseminací nebo injekcí. U skupiny B (skupina ICSI) budou oocyty před mikromanipulací obnaženy hyaluronidázou. Mikroinjektovány jsou pouze zralé oocyty Ⅱ(MⅡ) v metafázi s extrudovaným prvním polárním tělíčkem.

Hodnocení oplození a kvality embrya Hodnocení oplození se provádí asi 16-18h (1. den) po oplodnění. Oocyty jsou klasifikovány jako oplodněné, pokud jsou přítomna dvě pronuklea (2PN) a druhé polární tělísko bylo vytlačeno. Ostatní oocyty jsou klasifikovány jako abnormálně oplodněné (0PN, 1PN, 3PN). Normální míra oplodnění bude vždy vypočtena jako číslo 2PN nad počtem COC, nezávisle na jaderné zralosti, stejně jako pro IVF i pro ICSI. Po vyhodnocení v den 1 jsou zygoty ponechány v kultuře dalších 48 hodin a kvalita štěpení embrya bude pozorována 72 (den 3) hodin po odebrání oocytů. Embrya jsou hodnocena podle kvality, počtu, velikosti blastomer a množství fragmentace bez jader podle následujících kritérií: Embrya 1. stupně se skládají ze symetrických blastomer přibližně stejné velikosti a bez fragmentů bez jader. Embrya 2. stupně měla blastomery stejnoměrné nebo nestejné velikosti a měla <10 % objemu embryí vyplněných bezjadernými fragmenty. Embrya 3. stupně mají bezjaderné fragmenty, které zaujímají 10 % až 50 % objemu embryí. Embrya 4. stupně mají bezjaderné fragmenty > 50 % objemu embryí.

Přenos embrya a luteální podpora Všechny cykly jsou zmrazeny všechny cykly. Hodnocení těhotenství HCG v moči a krvi bude měřeno 14 dní po embryotransferu a pozitivní výsledky ukazují na biochemické těhotenství. Pokud je gestační váček pozorován ultrasonograficky 7 týdnů po transferu, klinická gravidita bude potvrzena. Probíhající těhotenství je definováno přítomností gestačního vaku s tepem plodu po 12 týdnech těhotenství.

Sledování U žen, u kterých nebyla v počátečním cyklu diagnostikována těhotná, budou považovány za negativní pro výsledek naší studie a následně budou léčeny dalším cyklem IVF/ICSI nebo budou na základě rozhodnutí lékaře vyhodnoceny jako nevhodné pro další ART .

Ženám, u kterých je potvrzeno probíhající těhotenství, zajistíme 3 telefonické pohovory v průběhu těhotenství přes konkrétní proškolené sestry. Ve 12., 28. a 37. týdnu gestace (pokud jde o těhotenství v prvním trimestru, těhotenství ve druhém trimestru a těhotenství ve třetím trimestru) budou shromážděny a zaznamenány informace o těhotenských komplikacích a plodu, aby bylo možné vyplnit formulář kazuistiky. (CRF) komplexně.

Účastníci budou povinni oznámit výzkumníkům čas doručení. Za 2 týdny po porodu budou vyplněny formuláře určené pro tuto návštěvu shromážděny informace o porodu (gestační věk, způsob porodu, abnormalita placenty a/nebo komplikace porodu), informace o kojenci (jako je pohlaví, porodní hmotnost, vrozená vada).

Po obdržení informovaného souhlasu by výzkumní pracovníci měli shromáždit demografické charakteristiky, zdravotní záznamy a vitální funkce od účastníků, včetně data narození, věku, výšky, hmotnosti, příjmu domácnosti a zaměstnání pro demografické charakteristiky; historie onemocnění, historie operace a osobní historie pro lékařský záznam; tělesná teplota a krevní tlak pro vitální funkce.

Základní charakteristiky doplňkového vyšetření pacienta, jako je rentgenový snímek hrudníku, elektrokardiogram (EKG), jaterní enzym, funkce ledvin, negativní stav HBV/HCV/HIV, detekce syfilis a kol.

Během postupů studie by měly být získány laboratorní testy pro potvrzení vhodných kritérií a shromážděné informace o studii, včetně sérového pohlavního hormonu (E2, LH, FSH, PRL, P, T), ultrasonografie, analýzy spermatu a těhotenského testu. Ostatní laboratorní indexy budou testovány během konvenční klinické léčby, ale nebudou zaznamenány v naší studii.

Statistické plány Výkonová analýza dvouvzorkového T-testu Číselné výsledky pro dvouvzorkový T-test Nulová hypotéza: Mean1=Mean2. Alternativní hypotéza: Mean1<Mean2 Předpokládalo se, že standardní odchylky jsou neznámé a stejné. Alokační výkon N1 N2 poměr Alfa Beta Průměr1 Průměr2 S1 S2 0,90041 354 354 1,000 0,02500 0,09959 5,2 6,2 4,1 4,1 Definice sestav Moc je pravděpodobnost zamítnutí falešné nulové hypotézy. Výkon by se měl blížit jedné.

N1 a N2 jsou počty položek vybraných z každé populace. Aby se šetřily zdroje, měly by být malé.

Alfa je pravděpodobnost zamítnutí skutečné nulové hypotézy. Mělo by to být malé.

Beta je pravděpodobnost přijetí falešné nulové hypotézy. Mělo by to být malé.

Průměr1 je průměr populací 1 a 2 podle nulové hypotézy rovnosti. Průměr2 je průměr populace 2 podle alternativní hypotézy. Průměr populace 1 se nezměnil.

S1 a S2 jsou standardní odchylky základního souboru. Představují variabilitu v populacích.

Souhrnná prohlášení Velikosti skupinového vzorku 354 a 354 dosahují 90% síly k detekci rozdílu -1,0 mezi nulovou hypotézou, že průměry obou skupin jsou 5,2 a alternativní hypotézou, že průměr skupiny 2 je 6,2 s odhadovanými standardními odchylkami skupiny 4,1 a 4.1 a s hladinou významnosti (alfa) 0,02500 za použití jednostranného dvouvýběrového t-testu. S ohledem na 15% míru předčasného ukončení studie bude zahrnuto 834 pacientů.