Trigger-Timing bei ovariellen Stimulationen

Das Ziel dieser Studie ist die Durchführung einer klinischen Studie an einem einzigen Zentrum, um zu untersuchen, ob eine Verzögerung von zwei Tagen nach dem Auslösen mehr qualitativ hochwertige Embryonen erhält als ein reguläres Auslösezeitpunkt bei der Ovarialstimulation durch das Antagonistenprotokoll bei der In-vitro-Fertilisation. Dies kann die kumulative Lebendgeburtenrate (CLBR) weiter verbessern. Die Ergebnisse dieser Studie werden unfruchtbaren Paaren und Ärzten helfen, die optimale Behandlung im Antagonistenprotokoll zu kennen und auszuwählen.

Wir planen eine offene, randomisierte, kontrollierte klinische Studie an einem Zentrum (Behandlungsverhältnis 1:1). Am Tag des regulären Trigger-Timing-Tags (drei Follikel erreichen 17 mm) oder zwei Tage später. 36-38 Stunden nach dem Trigger wird die Oozytenentnahme in beiden Gruppen mit demselben Protokoll durchgeführt. Dann werden IVF/ICSI und Embryokultur mit Standardprotokoll in Behandlungen der assistierten Reproduktion in unserem Zentrum in ähnlicher Weise implementiert. Informationen aller Teilnehmer und Ergebnisse werden im Fallberichtsformular festgehalten. Das Flussdiagramm folgte der SPIRIT-Checkliste, die die Anmeldung, Zuweisung, Behandlung und Nachsorge der Teilnehmer zeigt.

Einschlusskriterien:

• Alter: ≥18 und <35 Jahre alt
• Antrumfollikelzahl (AFC): ≥5 und <20
• Anti-Müller-Hormon (AMH): ≥1,1 ng/ml und <2,5 ng/ml
• Body-Mass-Index (BMI): ≥18,5 kg/m2 und <29 kg/m
• Erster oder zweiter ART-Zyklus
• Regelmäßige Menstruationszyklen (zwischen 22 und 35 Tagen)
• Zwei Eierstöcke vorhanden
• Geplant für Einzel- oder Doppeltransfer am 3. Tag
• Unfruchtbare Paare, die für ihren ersten IVF/ICSI-Zyklus mit festgelegtem Antagonistenprotokoll geplant sind.
• Einverständniserklärung eingeholt.

Ausschlusskriterien:

• Frauen mit Kontraindikation für IVF oder ICSI, wie z. B. schlecht eingestellter Typ-1- oder Typ-2-Diabetes mellitus; nicht diagnostizierte Lebererkrankung oder -funktionsstörung (basierend auf Serum-Leberenzym-Testergebnissen); Nierenerkrankung oder anormale Serumnierenfunktion; signifikante Anämie; Geschichte der tiefen Venenthrombose, Lungenembolie oder Schlaganfall; unkontrollierter Bluthochdruck oder bekannte symptomatische Herzerkrankung; Vorgeschichte (oder Verdacht auf) Zervixkarzinom, Endometriumkarzinom oder Brustkarzinom; und nicht diagnostizierte vaginale Blutungen.
• Vorgeschichte mit schlechter ovarieller Reaktion (<4 entnommene Oozyten) mit einer maximalen Dosis der ovariellen Stimulation (OS) (≥ 300 IE/Tag) oder ovariellem Hyperstimulationssyndrom (OHSS), unabhängig von der Gonadotropin-Dosis
• Bekannte Gründe für eine beeinträchtigte Implantation (z. B. Hydrosalpinx, Myome, die die Endometriumhöhle verzerren, Asherman-Syndrom, Thrombophilie oder Endometrium-Tuberkulose)
• Wiederholte Fehlgeburten (>2 vorangegangene biochemische Schwangerschaften oder >2 spontane Fehlgeburten)
• Wiederholtes Implantationsversagen (>3 fehlgeschlagene Zyklen mit Embryonen von guter Qualität)
• Polyzystisches Ovarialsyndrom (PCOS)
• Unbehandelte Schilddrüsenfunktionsstörung
• Gabe von exogenem E2, P4 oder Gonadotropinen im vorangegangenen Menstruationszyklus
• Aktives weibliches Rauchen
• Laufende Schwangerschaft
• Frauen, die sich zuvor für die Studie angemeldet haben
• Diejenigen, die den Untersuchungscharakter der vorgeschlagenen Studie nicht verstehen können
• entweder der männliche Partner oder die weibliche Partnerin muss Spendersamen oder Spendereizellen erhalten.
• Entweder der männliche oder die weibliche Partner muss sich einer genetischen Präimplantationsdiagnostik (PID) und einem genetischen Präimplantationsscreening (PGS) unterziehen.

Auszahlungskriterien:

• Teilnehmer, die nicht bereit sind, die Studienverfahren fortzusetzen oder die Einverständniserklärung zurückzuziehen.
• Teilnehmer, die während der Studie eine schlechte Compliance zeigen, und Forscher bestätigen, dass es notwendig ist, ihre Studie abzubrechen.
• Verlust durch Nachverfolgung. Rekrutierung Unfruchtbare Paare, die in die Ambulanz kommen, werden im Rahmen der routinemäßigen Beurteilung durch ein geschultes klinisches Team untersucht, das mit den Auswahlkriterien bestens vertraut ist. Geeignete Patientinnen werden dann von einem Mitglied des Forschungsteams angesprochen und die Studiendetails vor der kontrollierten ovariellen Hyperstimulation (COH) erläutert. Nach diesen Informationen wird den Paaren Bedenkzeit angeboten, um sich für eine Teilnahme an der Studie zu entscheiden. Wenn das Paar der Teilnahme zustimmt, werden sie einen Termin vereinbaren, um die Zustimmung vor COH zu unterzeichnen. Paare, die die Teilnahme ablehnen, werden konventionell betreut. Über alle nicht rekrutierten Patienten und Ausschlussgründe wird eine Einzelakte erhoben und gespeichert.

Kontrollierte ovarielle Hyperstimulation Alle Patientinnen erhalten ein festes Antagonistenprotokoll für die COH-Behandlung, das in jedem Studienzentrum nach Standardroutinen durchgeführt wird. Die Behandlung beginnt am 2. oder 3. Tag des spontanen Menstruationszyklus, und der Ausgangsultraschall des Beckens sowie grundlegende Serumhormone (wie FSH, luteinisierendes Hormon (LH), Progesteron (P) und β-hCG) werden getestet um den Folsäurestatus zu bestätigen. Allen Teilnehmern wird rFSH subkutan injiziert. Die Anfangsdosis von rFSH beträgt 200 IE und die nachfolgende Dosis wird entsprechend dem Eierstockstatus angepasst. Transvaginaler B-Mode-Ultraschall, Urin-LH und Serum-E2 werden getestet, um das Follikelwachstum zu überwachen. Am Tag 5 der Stimulation wird GnRH-Antagonist 0,25 mg täglich subkutan bis zum Triggertag verabreicht (einschließlich Triggertag). Gruppe A des Triggers ist 3 oder mehr Follikel erreichen einen Durchmesser ≥17 mm, Gruppe B des Triggers ist 2 Tage später als Gruppe A mit kontinuierlichem Gn. Bei allen Patienten wird GnRH-Agonist 0,2 + hCG 2000 IU einmal am Triggertag injiziert.

Entnahme und Vorbereitung der Eizellen Die Entnahme der Eizellen ist für 36 Stunden (±2) nach der hCG-Injektion geplant. Die routinemäßige Eizellenentnahme erfolgt unter transvaginaler Ultraschallführung über eine 17G-Oozytenaspirationsnadel unter Verwendung einer intravenösen Sedierung. Die gewonnenen Kumulus-Oozytenkomplexe (COC) werden einer konventionellen IVF oder ICSI unterzogen. Für beide Gruppen werden die COCs in ein Kulturmedium gegeben, das mit leichtem Paraffinöl bedeckt ist, und in einem befeuchteten Inkubator mit 37 °C, 5 % CO2 unmittelbar nach der Oozytenentnahme inkubiert. Außerdem werden die COCs vor der Befruchtung oder Injektion 2-6 h inkubiert. Für Gruppe B (ICSI-Gruppe) werden die Eizellen vor der Mikromanipulation durch Hyaluronidase denudiert. Nur die reifen Metaphase-Ⅱ(MⅡ)-Oozyten mit einem extrudierten ersten Polkörper werden mikroinjiziert.

Beurteilung der Befruchtung und Embryoqualität Die Beurteilung der Befruchtung erfolgt etwa 16-18 Stunden (Tag 1) nach der Befruchtung. Eizellen gelten als befruchtet, wenn zwei Vorkerne (2PN) vorhanden sind und der zweite Polkörper extrudiert wurde. Andere Eizellen werden als abnormal befruchtet klassifiziert (0PN, 1PN, 3PN). Die normale Befruchtungsrate wird immer als Zahl 2PN über der Anzahl der KOK berechnet, unabhängig von der Kernreife, sowohl bei IVF als auch bei ICSI. Nach der Bewertung an Tag 1 werden die Zygoten weitere 48 Stunden in Kultur belassen, und die Embryoqualität wird 72 (Tag 3) Stunden nach der Entnahme der Oozyten beobachtet. Die Embryonen werden gemäß der Qualität, Anzahl, Größe der Blastomere und der Menge der kernlosen Fragmentierung nach folgenden Kriterien bewertet: Embryonen des Grades 1 bestehen aus symmetrischen Blastomeren von ungefähr gleicher Größe und ohne kernlose Fragmente. Grad-2-Embryonen hatten Blastomere von gleichmäßiger oder ungleichmäßiger Größe und < 10 % des Embryovolumens waren mit kernlosen Fragmenten gefüllt. Embryonen Grad 3 haben kernlose Fragmente, die zwischen 10 % und 50 % des Volumens der Embryonen einnehmen. Embryonen Grad 4 haben kernlose Fragmente von >50 % des Volumens der Embryonen.

Embryotransfer und Lutealunterstützung Alle Zyklen werden alle Zyklen eingefroren. Bewertung der Schwangerschaft Urin und Blut-hCG werden 14 Tage nach dem Embryotransfer gemessen, und positive Ergebnisse weisen auf eine biochemische Schwangerschaft hin. Wenn der Gestationssack 7 Wochen nach dem Transfer mit Ultraschall beobachtet wird, wird eine klinische Schwangerschaft bestätigt. Eine anhaltende Schwangerschaft wird durch das Vorhandensein einer Fruchtblase mit fötalem Herzschlag nach 12 Schwangerschaftswochen definiert.

Nachsorge Frauen, bei denen im ersten Zyklus keine Schwangerschaft diagnostiziert wurde, werden in unserer Studie als negativ bewertet und anschließend mit einem weiteren IVF/ICSI-Zyklus behandelt oder als nicht geeignet für eine weitere ART bewertet, basierend auf der Entscheidung des Arztes .

Für Frauen, bei denen eine bestätigte Schwangerschaft besteht, arrangieren wir während der Schwangerschaft 3 Telefoninterviews durch speziell geschulte Krankenschwestern. In der 12., 28. und 37. Schwangerschaftswoche (in Bezug auf Schwangerschaft im ersten Trimester, Schwangerschaft im zweiten Trimester und Schwangerschaft im dritten Trimester) werden Schwangerschaftskomplikationen und Informationen zum Fötus gesammelt und aufgezeichnet, um das Fallberichtsformular auszufüllen (CRF) umfassend.

Die Teilnehmer müssen die Forscher über den Zeitpunkt der Lieferung informieren. Innerhalb von 2 Wochen nach der Entbindung werden die Entbindungsinformationen (Gestationsalter, Entbindungsmodus, Plazentaanomalie und/oder Entbindungskomplikationen), Säuglingsinformationen (wie Geschlecht, Geburtsgewicht, Geburtsfehler) gesammelt, indem Formulare ausgefüllt werden, die für diesen Besuch bestimmt sind.

Nach Einholung der Einverständniserklärung sollten die Forscher die demografischen Merkmale, die Krankenakte und die Vitalfunktionen der Teilnehmer erfassen, einschließlich Geburtsdatum, Alter, Größe, Gewicht, Haushaltseinkommen und Beruf für demografische Merkmale; Krankheitsgeschichte, Operationsgeschichte und persönliche Geschichte für Krankenakten; Körpertemperatur und Blutdruck für Vitalfunktionen.

Baseline-Merkmale der Hilfsuntersuchung des Patienten, wie z. B. Thorax-Röntgenbild, Elektrokardiogramm (EKG), Leberenzyme, Nierenfunktion, HBV/HCV/HIV-Negativstatus, Syphilis-Erkennung, et al.

Während der Studienverfahren sollten Labortests durchgeführt werden, um die geeigneten Kriterien zu bestätigen und Studieninformationen zu sammeln, einschließlich Serum-Sexualhormon (E2, LH, FSH, PRL, P, T), Ultraschall, Samenanalyse und Schwangerschaftstest. Andere Laborindizes werden während der konventionellen klinischen Behandlung getestet, aber nicht in unserer Studie erfasst.

Statistische Pläne T-Test-Leistungsanalyse bei zwei Stichproben Numerische Ergebnisse für T-Test bei zwei Stichproben Nullhypothese: Mittelwert1=Mittelwert2. Alternative Hypothese: Mean1<Mean2 Die Standardabweichungen wurden als unbekannt und gleich angenommen. Allokation Power N1 N2 Verhältnis Alpha Beta Mean1 Mean2 S1 S2 0,90041 354 354 1,000 0,02500 0,09959 5,2 6,2 4,1 4,1 Berichtsdefinitionen Power ist die Wahrscheinlichkeit, eine falsche Nullhypothese zurückzuweisen. Die Leistung sollte nahe bei eins liegen.

N1 und N2 sind die Anzahl der aus jeder Grundgesamtheit entnommenen Elemente. Um Ressourcen zu schonen, sollten sie klein sein.

Alpha ist die Wahrscheinlichkeit, eine wahre Nullhypothese abzulehnen. Es sollte klein sein.

Beta ist die Wahrscheinlichkeit, eine falsche Nullhypothese zu akzeptieren. Es sollte klein sein.

Mean1 ist der Mittelwert der Populationen 1 und 2 unter der Nullhypothese der Gleichheit. Mean2 ist der Mittelwert von Grundgesamtheit 2 unter der Alternativhypothese. Der Mittelwert der Grundgesamtheit 1 bleibt unverändert.

S1 und S2 sind die Populationsstandardabweichungen. Sie repräsentieren die Variabilität in den Populationen.

Zusammenfassende Aussagen Gruppenstichprobengrößen von 354 und 354 erreichen eine Trennschärfe von 90 %, um eine Differenz von -1,0 zwischen der Nullhypothese, dass beide Gruppenmittelwerte 5,2 betragen, und der Alternativhypothese, dass der Mittelwert von Gruppe 2 6,2 beträgt, mit geschätzten Gruppenstandardabweichungen von 4,1 und zu erkennen 4,1 und mit einem Signifikanzniveau (Alpha) von 0,02500 unter Verwendung eines einseitigen t-Tests mit zwei Stichproben. Unter Berücksichtigung einer Dropout-Rate von 15 % in der Studie werden 834 Patienten eingeschlossen.