Může COVID-19 přetrvávat v nitrooční tekutině?

Studie na zvířatech a předchozí studie na lidech

Jiné myší a kočičí modely koronaviru ukázaly oční postižení. V experimentu Robbins et al podstoupily myši intrakamerální a intravitreální injekce myšího koronaviru. Během 3 dnů pacienti s injekcemi do AC prokázali různé nálezy, jako je keratitida a přední uveitida; zatímco ti, kteří podstoupili intravitreální injekci, měli vícevrstvé retinální léze s RPE zjizvením a retinální atrofií. Onemocnění CNS a/nebo smrt se vyskytly u třetiny pacientů po intravitreálních injekcích. Virové antigeny byly izolovány z těchto myší, ale existují důkazy, že imunitní buňky a prozánětlivé faktory také přispívají k nálezům retinopatie. Tento myší model, známý jako experimentální CoV retinopatie, byl použit ke zkoumání imunitní reakce hostitele, která vede k poškození sítnice. Kočky infikované virem kočičí infekční peritonitidy, kočičím koronavirem, projevující se konjunktivitidou, pyogranulomatózní přední uveitidou, retinální vaskulitidou, choroiditidou a odchlípením sítnice. Přes 90 % koček mělo antigen detekován ve spojivce.

Viry jako VZV, HSV a CMV a paraziti jako toxoplazmóza byly izolovány z nitrooční tekutiny lidských očí pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR), přestože mají normální nebo negativní sérové ​​titry.

Zápis/náhodnost

Ti, kteří splní kritéria pro zařazení, dostanou příležitost zúčastnit se studie. Poskytnou písemný informovaný souhlas v souladu s předpisy HIPAA a schválením Vanderbilt IRB.

Studijní postupy

• Pacienti vybraní pro studii:

  celkem 80 pacientů

  20 pacientů podstupujících oční operaci, kteří jsou COVID negativní, bude zahrnuto jako kontrolní pacienti a podstoupí stejné postupy 60 pacientů podstupujících oční operaci s předchozí infekcí COVID bude stratifikováno do tří skupin podle času od stanovení diagnózy: 3, 6, 12 měsíců ~ 20 pacientů na skupina.

  • Všichni pacienti dostanou sklivec z operačního oka 0,1-0,2 ml tekutiny. Tento čerstvý vzorek bude odeslán do laboratoře pomocí jedinečného označeného štítku. To se provede po umístění trokaru
  • Na konci operace bude vak BSS zaveden do laboratoře pomocí stejného štítku.
• Informovaný souhlas bude získán během předoperační návštěvy kliniky
• Vzorky dostanou speciální barevný štítek a zkumavky budou odeslány do laboratoře Dr. Schmitz a Dr. Maris z OR

Laboratorní rozbory

Testovací protokol VUMC MIDL Lab:

• Vzorky: 100-200 ul suchých kohoutků sklivcové tekutiny bude doručeno do laboratoře VUMC MIDL a zmrazeno (-80C), dokud nebude nukleová kyselina extrahována. 1L vaky fyziologického roztoku BSS obsahující oční tekutinu budou dodány do laboratoře VUMC MIDL a alikvotně rozděleny do 3 10ml zkumavek Falcon a poté zmrazeny (-80C), dokud nebude nukleová kyselina extrahována.

Extrakce nukleových kyselin:

• Vzorky budou mít extrahovanou celkovou RNA a DNA na platformách pro automatizovanou extrakci nukleových kyselin easyMAG, EMAG nebo EZ1.

RT-PCR v reálném čase:

• RNA přítomná v extraktech nukleových kyselin bude reverzně transkribována do cDNA. Cílová cDNA bude amplifikována pomocí PCR a cílová fluorescenční emise bude měřena a detekována v reálném čase. Mezi cíle patří oblasti N1 a N2 nukleokapsidového genu SARS-CoV-2 a vnitřní kontrola pro monitorování adekvátní extrakce nukleové kyseliny a nepřítomnosti inhibitorů PCR: lidská RNáza P (RP). Z detekovaných vzorků budou zaznamenány cílové hodnoty Ct.

Sekvenování nové generace (NGS):

• Illumina: Extrakty nukleových kyselin podstoupí cílenou celogenomovou amplifikaci SARS-CoV-2 pomocí tiling PCR. Amplikony podstoupí přípravu knihovny DNA, čárové kódy a kontrolu kvality. Knihovny DNA budou naočkovány do průtokových buněk MiSeq a sekvenovány. Přečtená data budou vydána jako soubory FASTQ.
• MinION: Celkové extrakty nukleových kyselin podstoupí přípravu knihovny DNA, čárové kódy a kontrolu kvality. Knihovny DNA budou naočkovány do průtokových buněk MinION Mk1C & Flongle pro metagenomické hluboké sekvenování. Čtení a související data kvality budou vydána jako soubory FASTQ.

Rizika

Postupy studie zahrnují minimální riziko, protože se provádějí v oku, které ze zdravotních důvodů podstupuje plánovaný plánovaný operační výkon. Bezpečný a sterilní postup výrazně snižuje riziko.

Hlášení nežádoucích událostí nebo neočekávaných problémů zahrnujících riziko pro účastníky nebo ostatní

Jakékoli nežádoucí příhody budou hlášeny Vanderbilt Eye Institute a VUMC IRB podle zásad a postupu. Tyto budou předloženy do jednoho týdne od jejich výskytu.

Odvolání/přerušení studie

VUMC IRB bude informován o zrušení a přerušení studie. Předpokládáme, že studie bude trvat přibližně 1 rok.

Analýza dat:

Hodnoty Ct ze vzorků detekovaných RT-PCR budou porovnány a korelovány s klinickými daty. Sekvence SARS-CoV-2 z platforem Illumina a MinION NGS budou analyzovány na varianty a korelovány s klinickými daty. non-SARS-CoV-2 mikrobiální sekvence budou analyzovány a identifikovány na úrovni mikrobiálních druhů. „Mikrobiom“ oční tekutiny bude porovnán mezi vzorky a korelován s klinickými údaji.

Problémy se soukromím/důvěrností

Informace o pacientech budou deidentifikovány a nahrány do průzkumu REDCAP, aby byla zajištěna důvěrnost a soukromí.

Sledování a uchovávání záznamů

Doba trvání se předpokládá jeden rok. Údaje budou uchovávány po dobu šesti měsíců po uzavření studie. Toto bude následně zničeno.