新型コロナウイルス感染症 (COVID-19) は眼内液中に残留する可能性がありますか?

動物研究とこれまでの人体研究

他のコロナウイルスのマウスやネコのモデルでは、眼への関与が示されています。 ロビンスらの実験では、マウスの前房内および硝子体内にネズミコロナウイルスが注射された。 3日以内に、ACに注射した患者には、角膜炎や前ブドウ膜炎などのさまざまな所見が示されました。一方、硝子体内注射を受けた患者は、RPE瘢痕化と網膜萎縮を伴う多層の網膜病変を抱えていました。 硝子体内注射によるもののうち 3 分の 1 で CNS 疾患および/または死亡が発生しました。 これらのマウスからはウイルス抗原が分離されていますが、免疫細胞や炎症促進因子も網膜症の所見に寄与しているという証拠があります。 実験的CoV網膜症として知られるこのマウスモデルは、網膜損傷を引き起こす宿主の免疫応答を調べるために使用されています。 猫コロナウイルスの一種である猫伝染性腹膜炎ウイルスに感染した猫は、結膜炎、化膿肉芽腫性前ブドウ膜炎、網膜血管炎、脈絡膜炎、網膜剥離を引き起こします。 90％以上の猫で結膜から抗原が検出されました。

VZV、HSV、CMV などのウイルスやトキソプラズマ症などの寄生虫は、血清力価が正常または陰性であるにもかかわらず、ポリメラーゼ連鎖反応 (PCR) を使用して人間の眼球内液から分離されています。

登録/ランダム化

参加基準を満たす者には研究に参加する機会が与えられます。 彼らは、HIPAA 規制およびヴァンダービルト治験審査委員会の承認に従って、書面によるインフォームドコンセントを提供します。

研究手順

• 研究のために選択された患者:

  合計患者数 80 名

  新型コロナウイルス陰性で眼科手術を受ける患者20人は対照患者として含まれ、同じ処置を受ける 過去に新型コロナウイルス感染症に感染し眼科手術を受ける患者60人は、診断からの時間ごとに3つのグループに層別される：3、6、12か月～各患者20人グループ。

  • すべての患者は手術眼0.1～0.2から硝子体穿刺を受けます。 mlの液体。 この新鮮なサンプルは、独自のマーク付きラベルを使用してチューブで研究室に送られます。 これはトロカールを配置した後に実行されます
  • 手術の終わりに、BSS バッグは同じラベルを使用して検査室にチューブで送られます。
• 術前の来院時にインフォームドコンセントが得られます
• サンプルには特別な色のラベルが付けられ、手術室からシュミッツ博士とマリス博士の研究室にチューブで送られます。

臨床検査分析

VUMC MIDL ラボ テスト プロトコル:

• 検体: 硝子体液の 100 ～ 200 μl の乾燥タップが VUMC MIDL 研究室に配送され、核酸が抽出されるまで冷凍 (-80℃) されます。 眼液を含む BSS 生理食塩水の 1L バッグが VUMC MIDL 研究室に配送され、3 本の 10ml ファルコン チューブに等分され、核酸が抽出されるまで冷凍 (-80℃) されます。

核酸抽出：

• 検体は、easyMAG、EMAG、または EZ1 自動核酸抽出プラットフォームで抽出されたトータル RNA および DNA を持ちます。

リアルタイム RT-PCR:

• 核酸抽出物中に存在する RNA は cDNA に逆転写されます。 ターゲット cDNA は PCR によって増幅され、ターゲットの蛍光発光がリアルタイムで測定および検出されます。 ターゲットには、SARS-CoV-2 のヌクレオカプシド遺伝子の N1 および N2 領域、および適切な核酸抽出と PCR 阻害剤の不在を監視するための内部対照であるヒト RNase P (RP) が含まれます。 検出されたサンプルからターゲット Ct 値が記録されます。

次世代シーケンス (NGS):

• イルミナ: 核酸抽出物は、タイリング PCR による標的 SARS-CoV-2 全ゲノム増幅を受けます。 アンプリコンは、DNA ライブラリーの調製、バーコーディング、および QC を受けます。 DNA ライブラリーは MiSeq フローセルに接種され、配列が決定されます。 読み取りは FASTQ ファイルとして出力されます。
• MinION: 総核酸抽出物は、DNA ライブラリーの調製、バーコーディング、および QC を受けます。 DNA ライブラリーは、メタゲノムディープシーケンシングのために MinION Mk1C および Flongle フローセルに接種されます。 読み取りおよび関連する品質データは、FASTQ ファイルとして出力されます。

リスク

研究手順は、医学的理由により待機的に予定された手術手順を受けている眼で行われるため、リスクは最小限です。 安全で無菌的な手順により、リスクが大幅に軽減されます。

参加者または他者に対するリスクを伴う有害事象または予期せぬ問題の報告

有害事象が発生した場合は、ポリシーおよび手順に従ってヴァンダービルト眼科研究所および VUMC IRB に報告されます。 発生後1週間以内に提出いたします。

研究の中止/中止

VUMC IRB には研究の中止と中止が通知されます。 研究は約 1 年間続くと予想されます。

データ分析：

RT-PCR で検出されたサンプルの Ct 値は比較され、臨床データと関連付けられます。 イルミナおよび MinION NGS プラットフォームからの SARS-CoV-2 配列は、変異について分析され、臨床データと関連付けられます。 SARS-CoV-2 以外の微生物の配列が分析され、微生物種レベルで特定されます。 眼液の「マイクロバイオーム」はサンプル間で比較され、臨床データと関連付けられます。

プライバシー/機密保持の問題

機密性とプライバシーを確​​保するために、患者情報は匿名化されて REDCAP 調査にアップロードされます。

フォローアップと記録の保持

期間は1年間を予定している。 データは研究終了後 6 か月間保存されます。 これは後で破壊されます。