Kan COVID-19 fortsætte i intraokulær væske?

Dyreundersøgelser og tidligere menneskelige undersøgelser

Andre murine og kattemodeller af coronavirus har vist okulær involvering. I Robbins et al eksperiment gennemgik mus intrakamerale og intravitreale injektioner med murin coronavirus. Inden for 3 dage viste dem med injektioner i AC en række forskellige fund, såsom keratitis og anterior uveitis; hvorimod de, der gennemgik intravitreal injektion, havde flerlagede retinale læsioner med RPE-ardannelse og retinal atrofi. CNS-sygdom og/eller død forekom hos en tredjedel af dem fra intravitreale injektioner. Virale antigener er blevet isoleret fra disse mus, men der er bevis for, at immunceller og pro-inflammatoriske faktorer også bidrager til retinopati-fundene. Denne murine model, kendt som Experimental CoV Retinopathy, er blevet brugt til at undersøge værtens immunrespons, der fører til retinal skade. Katte inficeret med felin infektiøs peritonitisvirus, en katte-coronavirus, manifesteret med conjunctivitis, pyogranulomatøs anterior uveitis, retinal vaskulitis, choroiditis og nethindeløsning. Over 90 % af kattene havde antigen påvist i bindehinden.

Vira såsom VZV, HSV og CMV og parasitter som Toxoplasmose er blevet isoleret fra den intraokulære væske i menneskelige øjne ved hjælp af polymerasekædereaktion (PCR), på trods af at de har normale eller negative serumtitere.

Tilmelding/Randomisering

De, der opfylder inklusionskriterierne, vil få mulighed for at deltage i undersøgelsen. De vil give skriftligt informeret samtykke i overensstemmelse med HIPAA-reglerne og Vanderbilt IRB-godkendelse.

Studieprocedurer

• Patienter udvalgt til undersøgelse:

  80 patienter i alt

  20 patienter, der gennemgår øjenoperationer, som er COVID-negative, vil blive inkluderet som kontrolpatienter og gennemgå de samme procedurer. 60 patienter, der gennemgår øjenoperation med tidligere COVID-infektion, vil blive stratificeret i tre grupper efter tid siden diagnosticering: 3, 6, 12 måneder ~ 20 patienter pr. gruppe.

  • Alle patienter vil få et glaslegeme fra operationsøje 0,1-0,2 ml væske. Denne friske prøve sendes til laboratoriet med en unik mærket etiket. Dette vil blive udført efter trokaren er placeret
  • Ved afslutningen af ​​operationen vil BSS-posen blive slanget til laboratoriet med den samme etiket.
• Informeret samtykke vil blive indhentet under det præoperative klinikbesøg
• Prøver vil få en speciel farvet etiket og sendes til Dr. Schmitz og Dr. Maris laboratorium fra OR

Laboratorieanalyser

VUMC MIDL Lab Testing Protocol:

• Prøver: 100-200 ul tørre vandhaner af glasagtig væske vil blive leveret til VUMC MIDL-laboratoriet og frosset (-80C), indtil nukleinsyren er ekstraheret. 1L poser med BSS saltvand indeholdende øjenvæske vil blive leveret til VUMC MIDL-laboratoriet og fordelt i 3 10 ml falkerør og derefter frosset (-80C), indtil nukleinsyren er ekstraheret.

Nukleinsyreekstraktion:

• Prøver vil have totalt RNA og DNA ekstraheret på easyMAG, EMAG eller EZ1 automatiserede nukleinsyreekstraktionsplatforme.

Realtids RT-PCR:

• RNA til stede i nukleinsyreekstrakter vil blive omvendt transskriberet til cDNA. Mål-cDNA vil blive amplificeret ved PCR, og målfluorescensemission vil blive målt og detekteret i realtid. Mål inkluderer N1- og N2-regionerne af nukleocapsid-genet af SARS-CoV-2 og en intern kontrol til overvågning af tilstrækkelig nukleinsyreekstraktion og fravær af PCR-hæmmere: human RNase P (RP). Mål-Ct-værdier vil blive registreret fra detekterede prøver.

Næste generations sekvensering (NGS):

• Illumina: Nukleinsyreekstrakter vil gennemgå målrettet SARS-CoV-2 helgenom-amplifikation ved fliselægning af PCR. Amplikoner vil gennemgå DNA-biblioteksforberedelse, stregkodning og QC. DNA-biblioteker vil blive inokuleret på MiSeq flow-celler og sekventeret. Læsninger vil blive udsendt som FASTQ-filer.
• MinION: Samlede nukleinsyreekstrakter vil gennemgå DNA-biblioteksforberedelse, stregkodning og QC. DNA-biblioteker vil blive inokuleret på MinION Mk1C & Flongle flow-celler til metagenomisk dyb sekventering. Læsninger og tilhørende kvalitetsdata vil blive udlæst som FASTQ-filer.

Risici

Undersøgelsesprocedurerne indebærer minimal risiko, da de udføres i et øje, der gennemgår en valgfri planlagt operation af medicinske årsager. Den sikre og sterile procedure mindsker risikoen betydeligt.

Rapportering af uønskede hændelser eller uforudsete problemer, der involverer risiko for deltagere eller andre

Eventuelle bivirkninger vil blive rapporteret til Vanderbilt Eye Institute og VUMC IRB i henhold til politik og procedure. Disse vil blive indsendt inden for en uge efter hændelsen.

Studietilbagetrækning/ophør

VUMC IRB vil blive underrettet om undersøgelsesafbrydelse og afbrydelse. Vi forventer, at undersøgelsen varer cirka 1 år.

Dataanalyse:

Ct-værdier fra RT-PCR-detekterede prøver vil blive sammenlignet og korreleret med kliniske data. SARS-CoV-2-sekvenser fra Illumina- og MinION NGS-platforme vil blive analyseret for varianter og korreleret med kliniske data. ikke-SARS-CoV-2 mikrobielle sekvenser vil blive analyseret og identificeret til det mikrobielle artsniveau. Øjenvæskens 'mikrobiom' vil blive sammenlignet på tværs af prøver og korreleret med kliniske data.

Fortroligheds-/fortrolighedsproblemer

Patientoplysninger vil blive afidentificeret og uploadet til REDCAP-undersøgelse for at sikre fortrolighed og privatliv.

Opfølgning og journalopbevaring

Varigheden forventes at være et år. Dataene vil blive opbevaret i seks måneder efter afslutningen af ​​undersøgelsen. Dette vil blive ødelagt bagefter.