Kan COVID-19 vedvare i intraokulær væske?

Dyrestudier og tidligere menneskelige studier

Andre murine og kattemodeller av koronavirus har vist okulær involvering. I Robbins et al-eksperiment gjennomgikk mus intrakamerale og intravitreale injeksjoner med murint koronavirus. I løpet av 3 dager viste de med injeksjoner i AC en rekke funn som keratitt og fremre uveitt; mens de som gjennomgikk intravitreal injeksjon hadde flerlags retinale lesjoner med RPE-arrdannelse og retinal atrofi. CNS-sykdom og/eller død forekom hos en tredjedel av dem fra intravitreale injeksjoner. Virale antigener har blitt isolert fra disse musene, men det er bevis på at immunceller og pro-inflammatoriske faktorer også bidrar til retinopatifunnene. Denne murine modellen, kjent som Experimental CoV Retinopathy, har blitt brukt til å undersøke vertens immunrespons som fører til retinal skade. Katter infisert med felint infeksiøst peritonittvirus, et felint koronavirus, manifestert med konjunktivitt, pyogranulomatøs fremre uveitt, retinal vaskulitt, choroiditt og netthinneløsning. Over 90 % av kattene hadde antigen påvist i konjunktiva.

Virus som VZV, HSV og CMV og parasitter som Toxoplasmosis har blitt isolert fra den intraokulære væsken i menneskelige øyne ved bruk av polymerasekjedereaksjon (PCR), til tross for at de har normale eller negative serumtitere.

Påmelding/Randomisering

De som oppfyller inklusjonskriteriene vil få mulighet til å delta i studien. De vil gi skriftlig informert samtykke i samsvar med HIPAA-regelverket og Vanderbilt IRB-godkjenning.

Studieprosedyrer

• Pasienter valgt ut for studien:

  Totalt 80 pasienter

  20 pasienter som gjennomgår øyekirurgi som er COVID-negative vil inkluderes som kontrollpasienter og gjennomgå samme prosedyrer 60 pasienter som gjennomgår øyekirurgi med tidligere COVID-infeksjon vil bli stratifisert i tre grupper etter tid siden diagnose: 3, 6, 12 måneder ~ 20 pasienter pr. gruppe.

  • Alle pasienter vil få et glasslegeme fra operasjonsøye 0,1-0,2 ml væske. Denne ferske prøven sendes til laboratoriet med en unik merket etikett. Dette vil bli utført etter at trokaren er plassert
  • På slutten av operasjonen vil BSS-posen føres til laboratoriet med samme etikett.
• Informert samtykke vil bli innhentet under preoperativ klinikkbesøk
• Prøver vil få en spesialfarget etikett og sendes til Dr Schmitz og Dr. Maris lab fra OR

Laboratorieanalyser

VUMC MIDL Lab Testing Protocol:

• Prøver: 100-200 ul tørre kraner med glassaktig væske vil bli levert til VUMC MIDL-laboratoriet og frosset (-80C) til nukleinsyren er ekstrahert. 1L poser med BSS-saltvann som inneholder øyevæske vil bli levert til VUMC MIDL-laboratoriet og alikvotert i 3 10 ml falkrør og deretter frosset (-80C) til nukleinsyren er ekstrahert.

Nukleinsyreekstraksjon:

• Prøver vil ha totalt RNA og DNA ekstrahert på de automatiserte nukleinsyreekstraksjonsplattformene easyMAG, EMAG eller EZ1.

Sanntids RT-PCR:

• RNA tilstede i nukleinsyreekstrakter vil bli revers transkribert til cDNA. Mål-cDNA vil bli amplifisert ved PCR og målfluorescensemisjon vil bli målt og detektert i sanntid. Mål inkluderer N1- og N2-regionene til nukleokapsid-genet til SARS-CoV-2, og en intern kontroll for å overvåke for tilstrekkelig nukleinsyreekstraksjon og fravær av PCR-hemmere: human RNase P (RP). Mål-Ct-verdier vil bli registrert fra detekterte prøver.

Neste generasjons sekvensering (NGS):

• Illumina: Nukleinsyreekstrakter vil gjennomgå målrettet SARS-CoV-2-helgenomamplifisering ved å fliselegge PCR. Amplikoner vil gjennomgå klargjøring av DNA-bibliotek, strekkoding og QC. DNA-biblioteker vil bli inokulert på MiSeq flow-celler og sekvensert. Les vil bli sendt ut som FASTQ-filer.
• MinION: Totale nukleinsyreekstrakter vil gjennomgå DNA-bibliotek forberedelse, strekkoding og QC. DNA-biblioteker vil bli inokulert på MinION Mk1C & Flongle flow-celler for metagenomisk dypsekvensering. Les og tilhørende kvalitetsdata vil bli sendt ut som FASTQ-filer.

Risikoer

Studieprosedyrene innebærer minimal risiko ettersom de utføres i et øye som av medisinske årsaker gjennomgår et valgfritt planlagt operativt inngrep. Den sikre og sterile prosedyren reduserer risikoen betraktelig.

Rapportering av uønskede hendelser eller uforutsette problemer som involverer risiko for deltakere eller andre

Eventuelle uønskede hendelser vil bli rapportert til Vanderbilt Eye Institute og VUMC IRB i henhold til retningslinjer og prosedyre. Disse sendes inn innen en uke etter at de har skjedd.

Studieuttak/avbrudd

VUMC IRB vil bli varslet om studieavbrudd og seponering. Vi regner med at studien vil vare i ca 1 år.

Dataanalyse:

Ct-verdier fra RT-PCR-detekterte prøver vil bli sammenlignet og korrelert med kliniske data. SARS-CoV-2-sekvenser fra Illumina- og MinION NGS-plattformene vil bli analysert for varianter og korrelert med kliniske data. ikke-SARS-CoV-2 mikrobielle sekvenser vil bli analysert og identifisert til mikrobielt artsnivå. Øyevæskens 'mikrobiomet' vil bli sammenlignet på tvers av prøver og korrelert med kliniske data.

Personvern/konfidensialitetsproblemer

Pasientinformasjon vil bli avidentifisert og lastet opp til REDCAP-undersøkelsen for å sikre konfidensialitet og personvern.

Oppfølging og journaloppbevaring

Varigheten forventes å være ett år. Dataene vil bli oppbevart i seks måneder etter avslutning av studien. Dette vil bli ødelagt etterpå.