Voiko COVID-19 pysyä silmänsisäisessä nesteessä?

Eläintutkimukset ja aiemmat ihmistutkimukset

Muut koronaviruksen hiiri- ja kissamallit ovat osoittaneet osallistumista silmiin. Robbinsin ym. kokeessa hiirille tehtiin intrakameraaliset ja lasiaisensisäiset injektiot hiiren koronaviruksella. Kolmen päivän sisällä AC:hen injektiot saaneilla havaittiin erilaisia ​​löydöksiä, kuten keratiitti ja anteriorinen uveiitti; kun taas lasiaisensisäisen injektion saaneilla oli monikerroksisia verkkokalvovaurioita, joihin liittyi RPE-arpeutumista ja verkkokalvon surkastumista. Keskushermostosairaus ja/tai kuolema ilmeni kolmanneksella lasiaisensisäisten injektioiden aiheuttamista potilaista. Näistä hiiristä on eristetty virusantigeenejä, mutta on näyttöä immuunisoluista ja tulehdusta edistävistä tekijöistä, jotka myös vaikuttavat retinopatialöydöksiin. Tätä hiiren mallia, joka tunnetaan nimellä Experimental CoV Retinopathy, on käytetty verkkokalvovaurioon johtavan isännän immuunivasteen tutkimiseen. Kissat, jotka ovat saaneet tartunnan kissan tarttuvalla peritoniittiviruksella, kissan koronaviruksella, joka ilmenee sidekalvotulehduksella, pyogranulomatoottisella etummakalvotulehduksella, verkkokalvon vaskuliitilla, suonikalvontulehduksella ja verkkokalvon irtautumalla. Yli 90 %:lla kissoista havaittiin antigeeniä sidekalvosta.

Virukset, kuten VZV, HSV ja CMV, ja loiset, kuten toksoplasmoosi, on eristetty ihmisen silmänsisäisestä nesteestä käyttämällä polymeraasiketjureaktiota (PCR), vaikka niillä on normaalit tai negatiiviset seerumitiitterit.

Ilmoittautuminen/Satunnaistaminen

Osallistumiskriteerit täyttäville tarjotaan mahdollisuus osallistua tutkimukseen. He antavat kirjallisen tietoisen suostumuksen HIPAA-säännösten ja Vanderbiltin IRB-hyväksynnän mukaisesti.

Tutkimusmenettelyt

• Tutkimukseen valitut potilaat:

  Yhteensä 80 potilasta

  20 silmäleikkauspotilasta, jotka ovat COVID-negatiivisia, sisällytetään kontrollipotilaiksi ja joille tehdään samat toimenpiteet. 60 potilasta, joille tehdään silmäleikkaus, jolla on aikaisempi COVID-infektio, jaetaan kolmeen ryhmään diagnoosien jälkeen: 3, 6, 12 kuukautta ~ 20 potilasta per ryhmä.

  • Kaikki potilaat saavat lasiaisen kosketuksen leikkaussilmistä 0,1-0,2 ml nestettä. Tämä tuore näyte johdetaan laboratorioon käyttämällä ainutlaatuista merkittyä etikettiä. Tämä suoritetaan troakaarin asettamisen jälkeen
  • Leikkauksen lopussa BSS-pussi johdetaan laboratorioon samalla etiketillä.
• Tietoinen suostumus saadaan ennen leikkausta klinikkakäynnillä
• Näytteet saavat erikoisvärisen etiketin ja ne johdetaan tohtori Schmitzin ja Dr. Marisin laboratorioon OR:sta

Laboratorioanalyysit

VUMC MIDL Lab Testing Protocol:

• Näytteet: VUMC MIDL -laboratorioon toimitetaan 100-200 ul kuivaa lasiaista nestettä ja jäädytetään (-80 C), kunnes nukleiinihappo on uutettu. 1 litran pussit BSS-suolaliuosta, jotka sisältävät silmänestettä, toimitetaan VUMC MIDL -laboratorioon ja jaetaan kolmeen 10 ml:n haukkaputkeen ja jäädytetään (-80 C), kunnes nukleiinihappo on uutettu.

Nukleiinihappouutto:

• Näytteistä kokonais-RNA ja DNA uutetaan easyMAG-, EMAG- tai EZ1-automaattisilla nukleiinihappojen erotusalustoilla.

Reaaliaikainen RT-PCR:

• Nukleiinihappouutteissa oleva RNA käänteiskopioituu cDNA:ksi. Kohde-cDNA monistetaan PCR:llä ja kohdefluoresenssiemissio mitataan ja havaitaan reaaliajassa. Kohteita ovat SARS-CoV-2:n nukleokapsidigeenin N1- ja N2-alueet ja sisäinen kontrolli, jolla seurataan riittävää nukleiinihappojen uuttamista ja PCR-estäjien puuttumista: ihmisen RNaasi P (RP). Kohde-Ct-arvot tallennetaan havaituista näytteistä.

Seuraavan sukupolven sekvensointi (NGS):

• Illumina: Nukleiinihappouutteille tehdään kohdennettu SARS-CoV-2-koko genomin monistus tiling-PCR:llä. Amplikoneille tehdään DNA-kirjaston valmistelu, viivakoodaus ja laadunvalvonta. DNA-kirjastot siirrostetaan MiSeq-virtaussoluihin ja sekvensoidaan. Lukemat tulostetaan FASTQ-tiedostoina.
• MinION: Kokonaisnukleiinihappouutteille tehdään DNA-kirjaston valmistelu, viivakoodaus ja laadunvalvonta. DNA-kirjastot siirrostetaan MinION Mk1C & Flongle flow -soluihin metagenomista syväsekvensointia varten. Lukemat ja niihin liittyvät laatutiedot tulostetaan FASTQ-tiedostoina.

Riskit

Tutkimustoimenpiteisiin liittyy minimaalinen riski, koska ne suoritetaan silmälle, jolle tehdään lääketieteellisistä syistä valinnainen aikataulutettu leikkaus. Turvallinen ja steriili toimenpide vähentää huomattavasti riskiä.

Raportointi haittatapahtumista tai odottamattomista ongelmista, joihin liittyy riskejä osallistujille tai muille

Kaikki haittatapahtumat ilmoitetaan Vanderbilt Eye Institutelle ja VUMC IRB:lle käytäntöjen ja menettelyjen mukaisesti. Ne toimitetaan viikon kuluessa tapahtumasta.

Tutkimuksen keskeyttäminen/keskeytys

VUMC IRB:lle ilmoitetaan tutkimuksen peruuttamisesta ja keskeyttämisestä. Odotamme tutkimuksen kestävän noin vuoden.

Tietojen analysointi:

RT-PCR-havaittujen näytteiden Ct-arvoja verrataan ja korreloidaan kliinisten tietojen kanssa. Illumina- ja MinION NGS -alustojen SARS-CoV-2-sekvenssit analysoidaan varianttien varalta ja korreloidaan kliinisten tietojen kanssa. ei-SARS-CoV-2-mikrobisekvenssit analysoidaan ja tunnistetaan mikrobilajien tasolla. Silmännesteen "mikrobiomia" verrataan eri näytteissä ja korreloidaan kliinisten tietojen kanssa.

Yksityisyys/luottamuksellisuusongelmat

Potilastietojen henkilöllisyys poistetaan ja ne ladataan REDCAP-kyselyyn luottamuksellisuuden ja yksityisyyden varmistamiseksi.

Seuranta ja tietueiden säilyttäminen

Keston arvioidaan olevan yksi vuosi. Tietoja säilytetään kuusi kuukautta tutkimuksen päättymisen jälkeen. Tämä tuhotaan myöhemmin.