Srdeční biomarkery a stav železa u hemodialyzovaných pacientů

Studie populace a zdroje dat

Toto je průřezová studie s jedním centrem, která bude provedena v dialyzačním středisku Tungs' Taichung MetroHarbor Hospital (TTMHH) v pobřežní oblasti centrálního Tchaj-wanu. Bude zahrnuta kohorta 500 pacientů ve věku 20 a více let, kteří byli na HD alespoň 3 měsíce před zařazením. Lékařské diagramy těchto pacientů jsou přezkoumávány pro identifikaci způsobilosti a měly by být kompatibilní s kritérii zařazení/vyloučení a měly by být zahrnuty do naší analýzy. Výzkum byl proveden eticky v souladu s Helsinskou deklarací Světové lékařské asociace. Subjekty poskytly písemný informovaný souhlas a místní etická komise studii schválila.

Budou shromažďovány základní údaje, jako jsou demografické údaje, komorbidity, antropometrie a relevantní laboratorní údaje, klinická diagnóza srdečního selhání na základě měření srdeční echokardiografie a historie léků. Žádný z pacientů nedostával krevní transfuze nebo intravenózní terapii železem během dvou týdnů před zařazením do studie. Dopplerovská echokardiografie za použití standardizovaného vybavení a v souladu s doporučeními Americké společnosti pro echokardiografii (2009)[20]. K měření EF levé komory (LK) byla použita biplaninová metoda disků. Pacienti byli způsobilí pro studii, pokud měli funkční třídu II-IV podle New York Heart Association (NYHA); HFrEF a EF levé komory (LVEF)≤40 %. Charakteristiky pacientů, které budou z naší studie vyloučeny, byly (1) dekompenzovaná cirhóza, (2) neoplastická onemocnění, (3) neúplná data, (4) hemodialýza < 3 měsíce a aktivní infekce.

Stav železa a další laboratorní měření

Krev byla odebrána s antikoagulantem EDTA ráno po celonočním hladovění alespoň 12 hodin před dialýzou. Vzorky byly odděleny centrifugací (3000 ot./min., 10 min) a okamžitě uloženy při -80 °C pro následné testy. Glukóza, HDL lipoproteinový cholesterol s vysokou hustotou), triglyceridy a celkový cholesterol jsou měřeny standardními testy pomocí analyzátoru. Nízkohustotní lipoproteinový cholesterol (LDL) se měří standardním testem. Vysoce citlivý C-reaktivní protein (hsCRP) a jsou měřeny pomocí standardní nefelometrie. Sérový hs-cTnT byl měřen pomocí sendvičové imunoanalytické metody, nového vysoce citlivého testu s dolní mezí měřitelnosti 3 ng/l.

Nedostatek železa byl definován pomocí kritérií doporučení Kidney Disease Outcomes Quality Initiative: feritin < 100 ng/ml nebo saturace transferinu (TSAT) < 20 %, když je feritin < 800 ng/ml.[21] Sérové ​​železo bylo měřeno pomocí spektrofotometrie; sérový feritin a transferin byly měřeny pomocí imunoturbidimetrie. TSAT byl odhadnut pomocí vzorce: TSAT sérové ​​železo (μg/dl)/[sérový transferin (mg/dl) × 1,25].[22] Další měření stavu železa byla: sérový rozpustný transferinový receptor (sTfR) (měřeno pomocí enzymového imunotestu)[23-24] a feritinový index. Feritinový index byl navržen jako užitečný nástroj v diagnostice ID stavů, kde poměry > 2 naznačují ID. Feritinový index se vypočítá vydělením sTfR (vyjádřený v nmol/l nebo mg/l) log10 feritinu (měřeno v ng/ml) a je tedy zvýšen vždy, když se sTfR zvýší nebo sníží feritin.[25] Hepcidin je 25-aminokyselinový peptid, který je produkován hlavně játry, sekretován do plazmy a vylučován močí. Je hlavním regulátorem systémové homeostázy železa, který omezuje střevní absorpci železa a uvolňování železa z makrofágů [26]. Sérový hepcidin byl testován pomocí soupravy hepcidin ELISA Kit (Human Hepc25), sendvičové techniky ELISA.

Měření biomarkerů

Koncentrace GDF15 se stanoví kvantitativní technikou sendvičového enzymového imunotestu (Quantikine®; R&D Systems, Inc. Minneapolis, MN, USA). Vzorky kontroly kvality (QC) od R&D Systems, které měly celkový variační koeficient (CV) 6,3 % při nízkých koncentracích (159 ng/l), 9,7 % při středních koncentracích (436 ng/l) a 15,1 % při vysokých koncentrace (827 ng/l), byly zahrnuty do každého testu a výsledky byly akceptovány, když QC spadaly do výrobcem specifikované koncentrace specifické pro šarži. Celkový rozsah detekce GDF15 byl 308-13790 ng/l. Koncentrace Gal-3 v plazmě byla analyzována v duplikátech pomocí komerčně dostupné soupravy ELISA (Norcross, GA nebo BG Medicine, Inc., Waltham, Mass., USA). Hladiny rozpustného ST2 byly hodnoceny na výchozích vzorcích pomocí vysoce citlivého sendvičového monoklonálního imunotestu (Presage® ST2 Assay, Critical Diagnostics, New York, NY), se spodním limitem detekce 2 ng/ml, horním limitem detekce 200 ng. /ml, variační koeficient v rámci testu <2,5 % a koeficient variace mezi testy <4,6 %15. Sérový H-FABP byl měřen enzymatickým imunosorbentním testem (Hycult Biotech, Uden, Nizozemí). Koncentrace hsTnT byly měřeny elektrochemiluminiscenční imunoanalýzou za použití troponin T vysoce citlivých testů na analyzátoru Cobas (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Německo nebo Abott). Sérový NT-pro-BNP byl analyzován pomocí komerční soupravy NT-proBNP ELISA. Detekce NT-proBNP se pohybovala v rozmezí 12 ng/l až 35 000 ng/l a hsTnT se pohybovala v rozmezí 3 ng/l až 1172 ng/l. Všechny testy byly provedeny v duplikátech techniky, kteří byli zaslepeni ke všem klinickým údajům.