Vliv parodontální léčby na zánětlivé proteiny u onemocnění parodontu

Nové poznatky o první linii imunitní odpovědi na infekci a stresové signály na buněčné úrovni uvádějí účast cytoplazmatických nukleotidových vazebných doménových receptorů obsahujících multiproteinové komplexy nazývané inflammasomy. Inflammasomy hrají klíčovou roli ve vrozené imunitě tím, že regulují zrání prozánětlivých cytokinů interleukinu 1beta a 18. Inflammasom závisí na sestavení senzoru, například proteinu obsahujícího pyrinovou doménu rodiny nod-like receptorů (NLRP), s adaptérem, s apoptózou asociovaným speck-like proteinem obsahujícím kaspázovou náborovou doménu (ASC), umožňující nábor a aktivaci zánětlivého kaspáza-1. Ačkoli byly popsány různé záněty, nejintenzivněji byl studován multiproteinový komplex NLRP3/ASC/kaspáza-1, známý jako zánět NLRP3.

Velikost vzorku byla vypočtena na základě předchozí studie týkající se hladin proteinů zánětlivého komplexu u periodontálních onemocnění. Chcete-li udržet odhady na optimální úrovni přesnosti, minimalizovat dopad vyloučení a výpadků a stanovit významné rozdíly ve výsledcích na úrovni spolehlivosti 95 %, alfa hodnota=0,05, a 83% výkon. Proto zkoumaný vzorek zahrnoval celkem 45 pacientů (15 periodontálně zdravých, 15 gingivitida, 15 s Paradentóza stupně III stupně C). Klinické parodontologické vyšetření celých úst zahrnovalo měření hloubky sondování (PPD), úrovně klinického připojení (CAL), přítomnosti krvácení při sondování (BOP), gingiválního indexu (GI) a indexu plaku (PI) na 6 místech na zub, kromě třetí stoličky. Přítomnost a typ alveolární kostní ztráty byly hodnoceny na digitálním panoramatickém rentgenovém snímku u každého účastníka, který byl v případě potřeby doplněn o periapikální rentgenové snímky. Parodontální stav každého pacienta byl hodnocen jedním kalibrovaným parodontologem s manuální sondou. Diagnóza parodontitidy neboli zdraví parodontu byla stanovena podle Světového workshopu o klasifikaci parodontálních a periimplantátových onemocnění a stavů v roce 2017. Periodontálně zdraví jedinci (n=15) v kontrolní skupině neměli žádná místa s PD >3 mm a CAL >2 mm a také žádný rentgenový důkaz ztráty alveolární kosti. BOP byl < 10 % v celých ústech. Zdravá skupina také nevykazovala žádnou anamnézu parodontitidy. Pacienti s gingivitidou měli PD≤3 mm, intaktní parodont, rentgenologicky žádnou destrukci alveolární kosti a BOP > 10 %. Pacient ve stadiu III stupně C měl klinickou ztrátu úponu (CAL)≥ 5, radiografický úbytek kostní hmoty (RBL) zasahující do střední třetiny kořene a dále, ≤ 4 ztrátu zubu v důsledku parodontitidy, procento úbytku kostní hmoty podle věku je >1.

Léčba Přijatí pacienti s parodontitidou a gingivitidou dostávali konvenční kvadrantové škálování a kořenové plánování (SRP). SRP byla provedena stejným lékařem pomocí ultrazvukových vložek a manuálních parodontálních kyret. Přehodnocení byla provedena 1 a 3 měsíce po dokončení SRP. U periodontálně zdravých kontrol nebyla provedena žádná periodontální intervence.

Odběr vzorků slin a séra Celkem 5 ml nestimulovaných celých slin bylo odebráno metodou pasivního slintání mezi 9:00 a 10:00. Účastníkům bylo doporučeno vyhýbat se konzumaci jídla po dobu tří hodin před odběrem vzorků. Účastníci se posadili vzpřímeně a sliny byly odebírány po dobu 5 minut s instrukcemi, aby se sliny shromáždily na dně úst a pasivně je slintaly do sterilní skleněné kádinky. Vzorky slin byly odstřeďovány při 5000 otáčkách za minutu po dobu 10 minut při teplotě místnosti a supernatanty byly shromážděny a skladovány při -80 °C. Z antekubitální jamky bylo odebráno celkem 5 ml krve metodou venepunkce. Sérum bylo izolováno z krve centrifugací při 3000 otáčkách za minutu po dobu 20 minut s následným rychlým přenesením do sterilní polypropylenové zkumavky a skladováním při -80 °C.

Biomarkerové imunoanalýzy: Vzorky séra a slin IL-lbeta, IL-18, NLRP3, ASC a kaspázy-1 byly měřeny pomocí ELISA za použití komerčních souprav.

Statistická analýza Všechny statistické analýzy byly provedeny pomocí standardního statistického softwarového balíku. Pro srovnání v rámci skupiny, pokud data nebyla normálně narušena, byly použity Friedmanův test a Dunnův test s Bonferroniho korekcí k analýze změny mezi výchozí hodnotou a 1 měsíc a 3 měsíce po léčbě. Pro srovnání mezi skupinami Mann-Whitney U test pro normálně a nenormálně narušená data. Ke zjištění korelací biochemických parametrů s klinickými parametry a mezi sebou navzájem ve skupině nemocných před a po léčbě byl použit Spearmanův test korelace pořadí. Všechny testy byly provedeny na hladině významnosti P <0,05.