Effetto del trattamento parodontale sulle proteine ​​dell'inflammasoma nelle malattie parodontali

Nuove conoscenze sulla prima linea della risposta immunitaria alle infezioni e ai segnali di stress a livello cellulare hanno segnalato la partecipazione di recettori citoplasmatici simili a domini che legano i nucleotidi contenenti complessi multiproteici chiamati inflammasomi. Gli inflammasomi svolgono un ruolo chiave nell'immunità innata regolando la maturazione delle citochine proinfiammatorie dell'interleuchina 1beta e 18. L'inflammasoma dipende dall'assemblaggio di un sensore, ad esempio la proteina contenente un dominio pirinico della famiglia dei recettori nod-like (NLRP), con un adattatore, una proteina simile a un granello associata all'apoptosi contenente un dominio di reclutamento della caspasi (ASC), che consente il reclutamento e l'attivazione di un processo infiammatorio. caspasi-1. Sebbene siano stati descritti diversi inflammasomi, il complesso multiproteico NLRP3/ASC/caspasi-1, noto come inflammasoma NLRP3, è stato studiato più intensamente.

La dimensione del campione è stata calcolata sulla base di uno studio precedente riguardante i livelli delle proteine ​​del complesso inflammasoma nelle malattie parodontali. Per mantenere le stime a un livello di precisione ottimale, ridurre al minimo l'impatto delle esclusioni e degli abbandoni e stabilire differenze significative nei risultati con un livello di confidenza del 95%, alfa valore=0,05, e 83% di potenza. Pertanto, il campione di studio comprendeva un totale di 45 pazienti (15 parodontalmente sani, 15 gengiviti, 15 parodontiti di stadio III grado C). L'esame clinico parodontale della bocca intera comprendeva la misurazione della profondità di sondaggio (PPD), del livello di attacco clinico (CAL), della presenza di sanguinamento al sondaggio (BOP), dell'indice gengivale (GI) e dell'indice di placca (PI) in 6 siti per dente, ad eccezione di i terzi molari. La presenza e il tipo di perdita ossea alveolare sono stati valutati sulla radiografia panoramica digitale di ciascun partecipante, integrata se necessario con radiografie periapicali. Lo stato parodontale di ciascun paziente è stato valutato da un singolo parodontologo calibrato con una sonda manuale. La diagnosi di parodontite o salute parodontale è stata determinata secondo il Workshop mondiale 2017 sulla classificazione delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari. Gli individui parodontalmente sani (n=15) nel gruppo di controllo non avevano siti con PD >3 mm e CAL >2 mm e inoltre nessuna evidenza radiografica di perdita di osso alveolare. Il BOP era <10% in tutta la bocca. Il gruppo sano inoltre non presentava storia di parodontite. I pazienti con gengivite avevano PD ≤ 3 mm, parodonto intatto, nessuna distruzione dell'osso alveolare radiograficamente e BOP> 10%. Il paziente di stadio III grado C presentava perdita di attacco clinico (CAL) ≥ 5, perdita ossea radiografica (RBL) estesa al terzo medio della radice e oltre, perdita di denti ≤ 4 dovuta a parodontite, la percentuale di perdita ossea per età è >1.

Trattamento I pazienti con parodontite e gengivite reclutati hanno ricevuto scaling del quadrante e pianificazione radicolare convenzionali (SRP). L'SRP è stato eseguito dallo stesso clinico utilizzando inserti ad ultrasuoni e curette parodontali manuali. Le rivalutazioni sono state eseguite a 1 e 3 mesi dopo il completamento dell'SRP. Nessun intervento parodontale è stato effettuato nei controlli parodontalmente sani.

Campionamento di saliva e siero Un totale di 5 ml di saliva intera non stimolata è stata raccolta con il metodo della bava passiva tra le 9:00 e le 10:00. Ai partecipanti è stato consigliato di evitare il consumo di cibo per tre ore prima della raccolta del campione. I partecipanti erano seduti in posizione eretta e la saliva veniva raccolta per un periodo di 5 minuti con le istruzioni di raccogliere la saliva nel pavimento della bocca e sbavarla passivamente in un bicchiere di vetro sterile. I campioni di saliva sono stati centrifugati a 5000 giri al minuto per 10 minuti a temperatura ambiente, e i surnatanti sono stati raccolti e conservati a -80°C. Un totale di 5 ml di sangue sono stati raccolti dalla fossa antecubitale mediante metodo di venipuntura. Il siero è stato isolato dal sangue mediante centrifugazione a 3000 giri al minuto per 20 minuti seguita dal suo rapido trasferimento in una provetta sterile di polipropilene e conservazione a -80°C.

Saggi immunologici sui biomarcatori: campioni di siero e saliva di IL-1beta, IL-18, NLRP3, ASC e Caspase-1 sono stati misurati mediante ELISA utilizzando kit commerciali.

Analisi statistica Tutte le analisi statistiche sono state effettuate con il pacchetto software statistico standard. Per i confronti intragruppo, se i dati non erano normalmente disturbati, sono stati utilizzati il ​​test di Friedman e il test di Dunn con la correzione di Bonferroni per analizzare la variazione tra il basale e 1 mese e 3 mesi dopo il trattamento. Per i confronti tra gruppi, test U di Mann-Whitney per dati normalmente e non normalmente disturbati. Il test di correlazione dei ranghi di Spearman è stato utilizzato per rilevare le correlazioni dei parametri biochimici con i parametri clinici e tra loro nel gruppo malato prima e dopo il trattamento. Tutti i test sono stati eseguiti con un livello di significatività P <0,05.