Efecto del tratamiento periodontal sobre las proteínas inflamasómicas en las enfermedades periodontales

Nuevos conocimientos sobre la primera línea de respuesta inmune a la infección y las señales de estrés a nivel celular han informado de la participación de receptores citoplásmicos similares a dominios de unión de nucleótidos que contienen complejos multiproteicos llamados inflamasomas. Los inflamasomas desempeñan un papel clave en la inmunidad innata al regular la maduración de las citoquinas proinflamatorias de la interleucina 1beta y 18. El inflamasoma depende del ensamblaje de un sensor, por ejemplo, la proteína que contiene el dominio de pirina de la familia del receptor tipo nod (NLRP), con un adaptador, una proteína tipo mota asociada a la apoptosis que contiene un dominio de reclutamiento de caspasa (ASC), que permite el reclutamiento y la activación de un sistema inflamatorio. caspasa-1. Aunque se han descrito diferentes inflamasomas, el complejo multiproteico NLRP3/ASC/caspasa-1, conocido como inflamasoma NLRP3, ha sido el más estudiado.

El tamaño de la muestra se calculó basándose en un estudio previo sobre los niveles de proteínas del complejo inflamasómico en enfermedades periodontales. Para mantener las estimaciones en un nivel óptimo de precisión, minimizar el impacto de las exclusiones y abandonos, y establecer diferencias significativas en los resultados con un nivel de confianza del 95%, alfa valor = 0,05, y 83% de potencia. Por lo tanto, la muestra del estudio incluyó un total de 45 pacientes (15 periodontalmente sanos, 15 con gingivitis, 15 con periodontitis en estadio III de grado C). El examen clínico periodontal de toda la boca incluyó la medición de la profundidad de sondaje (PPD), el nivel de inserción clínica (CAL), la presencia de sangrado al sondaje (BOP), el índice gingival (GI) y el índice de placa (PI) en 6 sitios por diente, excepto los terceros molares. La presencia y el tipo de pérdida ósea alveolar se evaluaron mediante la radiografía panorámica digital de cada participante, que se complementó con radiografías periapicales si era necesario. El estado periodontal de cada paciente fue evaluado por un único periodoncista calibrado con una sonda manual. El diagnóstico de periodontitis o salud periodontal se determinó según el Taller Mundial sobre Clasificación de Enfermedades y Condiciones Periodontales y Periimplantarias de 2017. Los individuos periodontalmente sanos (n=15) en el grupo de control no tenían sitios con PD >3 mm y CAL >2 mm y tampoco evidencia radiográfica de pérdida de hueso alveolar. El BOP fue <10% en toda la boca. El grupo sano tampoco presentaba antecedentes de periodontitis. Los pacientes con gingivitis tenían PD≤3 mm, periodonto intacto, radiografía sin destrucción del hueso alveolar y BOP>10%. El paciente en estadio III grado C tenía pérdida de inserción clínica (CAL) ≥ 5, pérdida ósea radiográfica (RBL) que se extendía hasta el tercio medio de la raíz y más allá, pérdida de ≤ 4 dientes debido a periodontitis, el porcentaje de pérdida ósea por edad es >1.

Tratamiento Los pacientes con periodontitis y gingivitis reclutados recibieron raspado de cuadrante y alisado radicular (SRP) convencional. La SRP fue realizada por el mismo médico utilizando insertos ultrasónicos y curetas periodontales manuales. Las reevaluaciones se realizaron 1 y 3 meses después de la finalización del SRP. No se realizó ninguna intervención periodontal en los controles periodontalmente sanos.

Muestreo de saliva y suero Se recogió un total de 5 ml de saliva entera no estimulada mediante el método de baba pasiva entre las 9:00 y las 10:00 am. Se recomendó a los participantes que evitaran el consumo de alimentos durante tres horas antes de la recolección de la muestra. Los participantes se sentaron erguidos y se recogió saliva durante un período de 5 minutos con instrucciones de acumular saliva en el suelo de la boca y babearla pasivamente en un vaso de vidrio esterilizado. Las muestras de saliva se centrifugaron a 5000 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente y los sobrenadantes se recogieron y almacenaron a -80°C. Se extrajeron un total de 5 ml de sangre de la fosa antecubital mediante el método de venopunción. Se aisló el suero de la sangre mediante centrifugación a 3000 rpm durante 20 minutos, seguido de su rápida transferencia a un tubo de polipropileno estéril y almacenamiento a -80°C.

Inmunoensayos de biomarcadores: muestras de suero y saliva de IL-1beta, IL-18, NLRP3, ASC y Caspasa-1 se midieron mediante ELISA utilizando kits comerciales.

Análisis estadístico Todos los análisis estadísticos se llevaron a cabo con el paquete de software estadístico estándar. Para las comparaciones intragrupo, si los datos normalmente no estaban alterados, se utilizaron la prueba de Friedman y la prueba de Dunn con la corrección de Bonferroni para analizar el cambio entre el valor inicial y 1 mes y 3 meses después del tratamiento. Para comparaciones entre grupos, la prueba U de Mann-Whitney para datos normalmente y no normalmente perturbados. Se utilizó la prueba de correlación de rangos de Spearman para detectar las correlaciones de los parámetros bioquímicos con los parámetros clínicos y entre sí en el grupo enfermo antes y después del tratamiento. Todas las pruebas se realizaron con un nivel de significancia de P <0,05.