Efeito do tratamento periodontal nas proteínas do inflamassoma nas doenças periodontais

Novos insights sobre a primeira linha de resposta imune à infecção e sinais de estresse em nível celular relataram a participação de receptores citoplasmáticos semelhantes a domínios de ligação a nucleotídeos contendo complexos multiproteicos denominados inflamassomas. Os inflamassomas desempenham um papel fundamental na imunidade inata, regulando a maturação das citocinas pró-inflamatórias das interleucinas 1beta e 18. O inflamassoma depende da montagem de um sensor, por exemplo, proteína contendo o domínio pirina da família do receptor do tipo nod (NLRP), com um adaptador, proteína semelhante a uma mancha associada à apoptose contendo um domínio de recrutamento de caspases (ASC), permitindo o recrutamento e a ativação de um inflamatório. caspase-1. Embora diferentes inflamassomas tenham sido descritos, o complexo multiproteico NLRP3/ASC/caspase-1, conhecido como inflamassoma NLRP3, tem sido mais intensamente estudado.

O tamanho da amostra foi calculado com base em um estudo anterior sobre os níveis de proteínas do complexo inflamassoma em doenças periodontais. Para manter as estimativas em um nível ideal de precisão, minimizar o impacto de exclusões e desistências e estabelecer diferenças significativas nos resultados com um nível de confiança de 95%, alfa valor=0,05, e poder de 83%. Portanto, a amostra do estudo incluiu um total de 45 pacientes (15 periodontalmente saudáveis, 15 com gengivite, 15 com periodontite de grau C em estágio III). O exame clínico periodontal de toda a boca incluiu medição da profundidade de sondagem (PPD), nível clínico de inserção (CAL), presença de sangramento à sondagem (BOP), índice gengival (GI) e índice de placa (PI) em 6 locais por dente, exceto os terceiros molares. A presença e o tipo de perda óssea alveolar foram avaliados na radiografia panorâmica digital de cada participante, que foi complementada com radiografias periapicais, se necessário. O estado periodontal de cada paciente foi avaliado por um único periodontista calibrado com sonda manual. O diagnóstico de periodontite ou saúde periodontal foi determinado de acordo com o Workshop Mundial de Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-Implantares de 2017. Indivíduos periodontalmente saudáveis ​​(n=15) do grupo controle não apresentavam locais com PD >3 mm e NIC >2 mm e também não apresentavam evidência radiográfica de perda óssea alveolar. O BOP foi <10% em toda a boca. O grupo saudável também não apresentou história de periodontite. Pacientes com gengivite apresentavam PD≤3 mm, periodonto intacto, sem destruição do osso alveolar radiograficamente e BOP>10%. Paciente em estágio III grau C apresentou perda de inserção clínica (CAL) ≥ 5, perda óssea radiográfica (RBL) estendendo-se até o terço médio da raiz e além, ≤ 4 perdas dentárias devido à periodontite, a porcentagem de perda óssea por idade é> 1.

Tratamento Os pacientes recrutados com periodontite e gengivite receberam raspagem quadrante convencional e alisamento radicular (SRP). A SRP foi realizada pelo mesmo médico utilizando insertos ultrassônicos e curetas periodontais manuais. As reavaliações foram realizadas 1 e 3 meses após a conclusão do SRP. Nenhuma intervenção periodontal foi realizada nos controles periodontalmente saudáveis.

Amostragem de saliva e soro Um total de 5 mL de saliva total não estimulada foi coletado pelo método de baba passiva entre 9h e 10h. Os participantes foram orientados a evitar o consumo de alimentos por três horas antes da coleta da amostra. Os participantes foram sentados eretos e a saliva foi coletada durante um período de 5 minutos com instruções para acumular saliva no assoalho da boca e babar passivamente em um copo de vidro estéril. As amostras de saliva foram centrifugadas a 5.000 rpm por 10 minutos em temperatura ambiente e os sobrenadantes foram coletados e armazenados a -80°C. Foram coletados 5 mL de sangue da fossa antecubital pelo método de punção venosa. O soro foi isolado do sangue por centrifugação a 3.000 rpm por 20 minutos, seguido de sua rápida transferência para um tubo de polipropileno estéril e armazenamento a -80°C.

Imunoensaios de Biomarcadores: Amostras séricas e salivares de IL-1beta, IL-18, NLRP3, ASC e Caspase-1 foram medidas por ELISA utilizando kits comerciais.

Análise Estatística Todas as análises estatísticas foram realizadas com o pacote de software estatístico padrão. Para as comparações intragrupos, se os dados não fossem normalmente perturbados, o teste de Friedman e o teste de Dunn com correção de Bonferroni foram utilizados para analisar a mudança entre o valor basal e 1 mês e 3 meses após o tratamento. Para comparações entre grupos, teste U de Mann-Whitney para dados normalmente e não normalmente perturbados. O teste de correlação de Spearman foi utilizado para detectar as correlações dos parâmetros bioquímicos com os parâmetros clínicos e entre si no grupo doente antes e depois do tratamento. Todos os testes foram realizados com nível de significância de P<0,05.