Rychlý diagnostický test Leishmania Antigen Proof-of-of-Concept and Validation Study

Viscerální leishmanióza (VL) nebo kala azar je opomíjené tropické onemocnění (NTD) způsobené prvokovými parazity komplexu Leishmania donovani, které přenášejí písečné mušky flebotominové. Odhaduje se, že celosvětově se ročně objeví 50 000 - 90 000 nových případů. Je charakterizována horečkou, hubnutím, zvětšením sleziny a jater a anémií a bez léčby může být ve více než 95 % případů smrtelná. Africký roh představuje největší počet případů VL na celém světě a komunity žijící ve vzdálených prostředích s omezenými zdroji jsou vystaveny největšímu riziku infekce. Proto je nezbytná včasná a přesná diagnostika VL ve zdravotnických zařízeních. VL je smrtelná, pokud není adekvátně léčena. Léky, které se v současnosti používají k léčbě VL, mohou mít závažné vedlejší účinky a klinický obraz VL není dostatečně specifický pro vedení léčby. Vysoce přesné (citlivé i specifické), levné a jednoduché rychlé diagnostické testy (RDT) jsou proto klíčové pro case-management VL. Včasná detekce případu následovaná adekvátní léčbou je také zásadní pro kontrolu VL.

V Keni je viscerální leishmanióza diagnostikována pomocí rK39 RDT na základě detekce hostitelské protilátky proti rekombinantnímu leishmaniálnímu antigenu s opakováním 39 aminokyselin v klinicky suspektních případech. Protože tento test má suboptimální citlivost kolem 85 %, jsou často nutné další doplňkové diagnostické testy. Patří mezi ně přímý aglutinační test (DAT) založený na aglutinaci celého antigenu parazita protilátkami hostitele specifickými pro parazita a mikroskopická detekce amastigotů v obarvených nátěrech z punkcí lymfatických uzlin, aspirátů kostní dřeně nebo sleziny, v současnosti zlatý standard pro konfirmační diagnostiku.

Zatímco používání rK39 RDT a DAT je na vzestupu, testy nemohou odlišit aktivní a minulé infekce, protože jsou založeny na detekci protilátek proti leishmanii, které jsou přítomny jak u aktivních, tak u prodělaných infekcí. Kromě toho DAT vyžaduje určité laboratorní dovednosti a inkubace přes noc před získáním výsledků a rK39 má nízkou citlivost při použití ve východní Africe. Bylo proto vyvinuto úsilí vyvinout test založený na detekci antigenu, který je založen na minimálně invazivním odběru vzorků, jako je krev nebo moč.

Za tímto účelem se spolupráce mezi KEMRI, DNDi, FIND a University of York v rámci projektu Diagnostika a orální léčba viscerální leishmaniózy nové generace ve východní Africe: transformace péče o pacienty prostřednictvím inovací (VL-INNO) EDCTP zaměřuje na vývoj antigenu. diagnostický test založený na biomarkerech parazitů v moči a krvi od pacientů s VL. V tomto projektu bude použit proteomický přístup k identifikaci kandidátních antigenů Leishmania, které se nacházejí v krvi a moči potvrzené viscerální leishmaniózy. University of York provede proteomické analýzy vzorků pomocí vysoce citlivého hmotnostního spektrometru s trojitým kvadrupólovým hmotnostním spektrometrem s kapalinovým chromatografem (LCMS/MS), aby prozkoumala diverzitu antigenů v definovaných archivovaných klinických vzorcích (krev, moč) od pacientů s VL před a po léčbě. Na základě výtěžku, stability a imunogenicity antigenů budou produkovány monoklonální protilátky (mAb) pro následný vývoj prototypu laterálního průtokového rychlého diagnostického testu (RDT), který dokáže detekovat antigeny leishmanie v krvi a/nebo moči pacientů s VL.

S těmito aktivitami zahájenými pomocí vzorků dříve odebraných od pacientů s VL v Keni se tento současný protokol snaží odebírat vzorky (krev a moč) ze dvou léčebných center VL, konkrétně z nemocnice Chemolingot v okrese Baringo a okresu Kacheliba, West Pokot, do použít při hodnocení prototypu RDT. Budeme analyzovat vzorky od pacientů s VL odebrané před a na konci léčby, abychom určili citlivost testu a jak se mění abundance parazitního antigenu v moči a krvi v důsledku klinického vyléčení. Ke stanovení specifičnosti testu budou použity vzorky zdravých endemických kontrol.