Экспресс-диагностический тест на антиген Leishmania, исследование, подтверждающее концепцию и валидацию

Висцеральный лейшманиоз (ВЛ) или кала-азар — забытое тропическое заболевание (НТД), вызываемое простейшими паразитами комплекса Leishmania donovani, которые передаются флеботоминными москитами. По оценкам, ежегодно во всем мире происходит от 50 000 до 90 000 новых случаев. Он характеризуется лихорадкой, потерей веса, увеличением селезенки и печени, анемией и может привести к летальному исходу более чем в 95% случаев без лечения. На Африканский Рог приходится наибольшее количество случаев ВЛ во всем мире, а наибольшему риску заражения подвергаются общины, живущие в отдаленных районах с ограниченными ресурсами. Поэтому ранняя и точная диагностика ВЛ в ​​медицинских учреждениях имеет важное значение. ВЛ смертельна, если ее не лечить должным образом. Лекарства, используемые в настоящее время для лечения ВЛ, могут иметь серьезные побочные эффекты, а клиническая картина ВЛ недостаточно специфична, чтобы назначать лечение. Поэтому высокоточные (как чувствительные, так и специфичные), дешевые и простые экспресс-диагностические тесты (БДТ) имеют решающее значение для ведения случаев ВЛ. Раннее выявление случаев с последующим адекватным лечением также имеет решающее значение для контроля ВЛ.

В Кении висцеральный лейшманиоз диагностируется с помощью RDT rK39 на основе обнаружения антител хозяина к рекомбинантному лейшманиозному антигену, состоящему из 39 аминокислот, в клинически подозрительных случаях. Поскольку этот тест имеет неоптимальную чувствительность около 85%, часто необходимы другие дополнительные диагностические тесты. К ним относятся тест прямой агглютинации (DAT), основанный на агглютинации всего антигена паразита специфическими к паразиту антителами хозяина, и обнаружение амастигот под микроскопом в окрашенных мазках из пункций лимфатических узлов, аспиратов костного мозга или селезенки, которые в настоящее время являются золотым стандартом для подтверждающего диагноза.

Хотя использование RDT и DAT rK39 растет, тесты не могут отличить активную инфекцию от перенесенной, поскольку они основаны на обнаружении антител против лейшмании, которые присутствуют как при активной, так и при перенесенной инфекции. Кроме того, DAT требует некоторых лабораторных навыков и инкубации в течение ночи перед получением результатов, а rK39 имеет низкую чувствительность при использовании в Восточной Африке. Поэтому были предприняты усилия по разработке теста, основанного на обнаружении антигена, который основан на минимально инвазивном сборе образцов, таких как кровь или моча.

С этой целью сотрудничество между KEMRI, DNDi, FIND и Йоркским университетом в рамках проекта EDCTP «Диагностика следующего поколения и пероральное лечение висцерального лейшманиоза в Восточной Африке: трансформация ухода за пациентами посредством инноваций» (VL-INNO) направлено на разработку антигена. Диагностический тест на основе биомаркеров паразитов в моче и крови больных ВЛ. В этом проекте протеомный подход будет использоваться для идентификации антигенов-кандидатов Leishmania, которые обнаруживаются в крови и моче больных с подтвержденным висцеральным лейшманиозом. Университет Йорка проведет протеомный анализ образцов с использованием высокочувствительного трехквадрупольного масс-спектрометра с жидкостным хроматографом (ЖХМС/МС) для изучения разнообразия антигенов в определенных архивных клинических образцах (кровь, моча) от пациентов с ВЛ до и после лечения. На основе выхода, стабильности и иммуногенности антигенов будет производиться моноклональные антитела (mAb) для последующей разработки прототипа экспресс-диагностического теста (RDT) с латеральным потоком, который сможет обнаруживать антигены лейшмании в крови и/или моче пациентов с ВЛ.

Поскольку эти мероприятия инициированы с использованием образцов, ранее собранных у пациентов с ВЛ в ​​Кении, данный текущий протокол направлен на сбор образцов (крови и мочи) из двух центров лечения ВЛ, а именно больницы округа Чемолингот в округе Баринго и округа Качелиба, Западный Покот, для использоваться при оценке прототипа RDT. Мы проанализируем образцы пациентов с ВЛ, собранные до и в конце лечения, чтобы определить чувствительность теста и то, как изменяется содержание паразитарных антигенов в моче и крови в результате клинического излечения. Для определения специфичности теста будут использоваться образцы здоровых эндемичных контролей.