Estudo de validação e prova de conceito do teste de diagnóstico rápido de antígeno de Leishmania

A leishmaniose visceral (LV) ou calazar é uma doença tropical negligenciada (DTN) causada por parasitas protozoários do complexo Leishmania donovani que são transmitidos por flebotomíneos. Estima-se que 50.000 a 90.000 novos casos ocorram anualmente em todo o mundo. É caracterizada por febre, perda de peso, aumento do baço e do fígado e anemia, e pode ser fatal em mais de 95% dos casos sem tratamento. O Corno de África é responsável pelo maior número de casos de LV em todo o mundo, e as comunidades que vivem em locais remotos e com recursos limitados correm maior risco de infecção. Portanto, o diagnóstico precoce e preciso da LV nas unidades de saúde é essencial. A LV é fatal se não for tratada adequadamente. Os medicamentos atualmente utilizados para tratar a LV podem ter efeitos colaterais graves e a apresentação clínica da LV não é suficientemente específica para orientar o tratamento. Testes de diagnóstico rápido (RDTs) altamente precisos (sensíveis e específicos), baratos e simples são, portanto, cruciais para o tratamento de casos de LV. A detecção precoce de casos seguida de tratamento adequado também é fundamental para o controle da LV.

No Quênia, a leishmaniose visceral é diagnosticada pelo RDT rK39 com base na detecção de anticorpos do hospedeiro contra um antígeno leishmanial recombinante com repetição de 39 aminoácidos em casos clinicamente suspeitos. Como este teste tem uma sensibilidade abaixo do ideal de cerca de 85%, outros testes diagnósticos adicionais são frequentemente necessários. Estes incluem o teste de aglutinação direta (DAT) baseado na aglutinação de todo o antígeno do parasita por anticorpos específicos do hospedeiro parasita e detecção microscópica de amastigotas em esfregaços corados de punções de linfonodos, medula óssea ou aspirados de baço, atualmente o padrão ouro para diagnóstico confirmatório.

Embora a utilização de RDT e DAT rK39 tenha aumentado, os testes não conseguem distinguir infecções activas de infecções passadas, uma vez que se baseiam na detecção de anticorpos anti-leishmania que estão presentes tanto em infecções activas como passadas. Além disso, o DAT requer algumas competências laboratoriais e incubações durante a noite antes de obter os resultados e o rK39 tem baixa sensibilidade quando utilizado na África Oriental. Portanto, têm havido esforços para desenvolver um teste baseado na detecção de antígenos que se baseia na coleta de amostras minimamente invasivas, como sangue ou urina.

Para este fim, uma colaboração entre KEMRI, DNDi, FIND e a Universidade de York no âmbito do projecto EDCTP Diagnóstico de próxima geração e tratamento oral para leishmaniose visceral na África Oriental: transformando o cuidado ao paciente através da inovação (VL-INNO), visa desenvolver um antígeno teste de diagnóstico baseado em biomarcadores de parasitas na urina e no sangue de pacientes com LV. Neste projeto, uma abordagem proteômica será utilizada para identificar antígenos candidatos de Leishmania encontrados no sangue e na urina de leishmaniose visceral confirmada. A Universidade de York realizará análises proteômicas das amostras usando espectrômetro de massa triplo quadrupolo com cromatógrafo líquido altamente sensível (LCMS/MS) para explorar a diversidade de antígenos em amostras clínicas arquivadas definidas (sangue, urina) de pacientes com LV antes e depois do tratamento. Com base no rendimento, estabilidade e imunogenicidade dos antígenos, anticorpos monoclonais (mAb) serão produzidos para posterior desenvolvimento de um protótipo de teste de diagnóstico rápido de fluxo lateral (RDT) que pode detectar antígenos de leishmania no sangue e/ou urina de pacientes com LV.

Com estas atividades iniciadas usando amostras previamente coletadas de pacientes com LV no Quênia, este protocolo atual busca coletar amostras (sangue e urina) de dois centros de tratamento de LV, nomeadamente o hospital do subcondado de Chemolingot no condado de Baringo e o subcondado de Kacheliba, West Pokot, para ser utilizado na avaliação do protótipo RDT. Analisaremos amostras de pacientes com LV coletadas antes e no final do tratamento, para determinar a sensibilidade do teste e como a abundância do antígeno do parasita na urina e no sangue muda como consequência da cura clínica. Amostras de controles endêmicos saudáveis ​​serão usadas para determinar a especificidade do teste.