リーシュマニア抗原迅速診断検査の概念実証および検証研究

内臓リーシュマニア症 (VL) またはカラ アザールは、フレボトミン サシバエによって伝播されるリーシュマニア ドノバニ複合体の寄生原虫によって引き起こされる顧みられない熱帯病 (NTD) です。 世界中で毎年50,000人から90,000人の新規感染者が発生していると推定されています。 発熱、体重減少、脾臓と肝臓の肥大、貧血が特徴で、治療しなければ95％以上の症例で死に至る可能性があります。 アフリカの角は世界中で VL 感染者数が最も多く、遠隔地で資源が限られた環境に住んでいるコミュニティは感染のリスクが最も高くなります。 したがって、医療施設における VL の早期かつ正確な診断は不可欠です。 VL は適切に治療されないと致命的になります。 現在、VL の治療に使用されている薬剤には重篤な副作用が生じる可能性があり、VL の臨床症状は治療の指針となるほど十分に特異的ではありません。 したがって、VL の症例管理には、高精度 (感度と特異性の両方)、安価で簡単な迅速診断検査 (RDT) が不可欠です。 早期の症例発見とそれに続く適切な治療も、VL の管理の中心となります。

ケニアでは、内臓リーシュマニア症は、臨床的に疑われる症例における39アミノ酸リピート組換えリーシュマニア抗原に対する宿主抗体の検出に基づいて、rK39 RDTによって診断されます。 この検査の感度は約 85% と最適ではないため、多くの場合、他の追加の診断検査が必要になります。 これらには、寄生虫特異的宿主抗体による寄生虫抗原全体の凝集に基づく直接凝集試験（DAT）や、現在確認診断のゴールドスタンダードであるリンパ節穿刺、骨髄または脾臓吸引液からの染色塗抹標本におけるアマスティゴートの顕微鏡検出が含まれます。

rK39 RDT および DAT の使用は増加傾向にありますが、この検査は活動性感染症と過去の感染症の両方に存在する抗タイリーシュマニア抗体の検出に基づいているため、活動性感染症と過去の感染症を区別することはできません。 さらに、DAT は結果を得る前にある程度の実験スキルと一晩のインキュベーションを必要とし、東アフリカで使用される場合、rK39 の感度は低くなります。 したがって、血液や尿などの侵襲性が最小限の検体採取に基づく抗原検出に基づく検査を開発する努力がなされてきた。

この目的を達成するために、東アフリカにおける内臓型リーシュマニア症の次世代診断と経口治療：イノベーションによる患者ケアの変革（VL-INNO）EDCTP プロジェクトの下で、KEMRI、DNDi、FIND、およびヨーク大学が共同で抗原の開発を目指しています。 VL患者の尿と血液中の寄生虫バイオマーカーに基づく診断検査。 このプロジェクトでは、プロテオミクスアプローチを使用して、内臓リーシュマニア症が確認された患者の血液と尿中に見つかるリーシュマニア抗原の候補を同定します。 ヨーク大学は、治療前後の VL 患者から採取され、保存されている定義済みの臨床サンプル (血液、尿) における抗原の多様性を調査するために、高感度液体クロマトグラフ トリプル四重極質量分析計 (LCMS/MS) を使用したサンプルのプロテオミクス分析を実施します。 抗原の収量、安定性、免疫原性に基づいて、VL 患者の血液および/または尿中のリーシュマニア抗原を検出できる側方流動迅速診断検査 (RDT) プロトタイプのその後の開発のためにモノクローナル抗体 (mAb) が生産されます。

ケニアの VL 患者から以前に収集されたサンプルを使用してこれらの活動が開始されたため、この現在のプロトコルは、2 つの VL 治療センター、すなわちバリンゴ郡のチェモリンゴット郡病院と西ポコットのカチェリバ郡病院からサンプル (血液と尿) を収集することを目的としています。 RDT プロトタイプの評価に使用されます。 私たちは、治療前と治療終了時に採取した VL 患者のサンプルを分析して、検査の感度と、臨床的治癒の結果として尿と血液中の寄生虫抗原量がどのように変化するかを判断します。 健康な風​​土病対照からのサンプルは、検査の特異性を決定するために使用されます。