Leishmania Antigeen snelle diagnostische test Proof-of-Concept en validatiestudie

Viscerale leishmaniasis (VL) of kala azar is een verwaarloosde tropische ziekte (NTD) die wordt veroorzaakt door protozoaire parasieten van het Leishmania donovani-complex die worden overgedragen door phlebotomine-zandvliegen. Jaarlijks komen er wereldwijd naar schatting 50.000 – 90.000 nieuwe gevallen voor. Het wordt gekenmerkt door koorts, gewichtsverlies, vergroting van de milt en lever en bloedarmoede, en kan zonder behandeling in meer dan 95% van de gevallen fataal zijn. De Hoorn van Afrika is wereldwijd verantwoordelijk voor het grootste aantal VL-gevallen, en gemeenschappen die in afgelegen gebieden met beperkte middelen leven lopen het grootste risico op infectie. Daarom is een vroege en nauwkeurige diagnose van VL in gezondheidsinstellingen essentieel. VL is dodelijk als het niet adequaat wordt behandeld. De geneesmiddelen die momenteel worden gebruikt voor de behandeling van VL kunnen ernstige bijwerkingen hebben en de klinische presentatie van VL is niet specifiek genoeg om de behandeling te begeleiden. Zeer nauwkeurige (zowel gevoelige als specifieke), goedkope en eenvoudige snelle diagnostische tests (RDT's) zijn daarom cruciaal voor het casemanagement van VL. Vroegtijdige detectie van gevallen gevolgd door adequate behandeling is ook van cruciaal belang voor de beheersing van VL.

In Kenia wordt Viscerale leishmaniasis gediagnosticeerd door de rK39 RDT op basis van detectie van gastheerantilichaam tegen een recombinant leishmaniaal antigeen met 39 aminozuren in klinisch verdachte gevallen. Omdat deze test een suboptimale gevoeligheid heeft van circa 85%, zijn vaak aanvullende diagnostische tests nodig. Deze omvatten de directe agglutinatietest (DAT), gebaseerd op agglutinatie van volledig parasietantigeen door parasietspecifieke gastheerantilichamen en microscopische detectie van amastigoten in gekleurde uitstrijkjes van lymfeklierpuncties, beenmerg- of milt-aspiraten, momenteel de gouden standaard voor bevestigende diagnose.

Hoewel het gebruik van rK39 RDT en DAT toeneemt, kunnen de tests geen onderscheid maken tussen actieve infecties en eerdere infecties, omdat ze gebaseerd zijn op de detectie van antileishmania-antilichamen die aanwezig zijn bij zowel actieve als eerdere infecties. Bovendien vereist DAT enige laboratoriumvaardigheden en nachtelijke incubaties voordat de resultaten worden verkregen, en de rK39 heeft een lage gevoeligheid bij gebruik in Oost-Afrika. Er zijn daarom pogingen ondernomen om een ​​op antigeendetectie gebaseerde test te ontwikkelen die gebaseerd is op minimaal invasieve monsterverzameling zoals bloed of urine.

Daartoe heeft een samenwerking tussen KEMRI, DNDi, FIND en de Universiteit van York in het kader van het Next Generation Diagnostics and oral treatment for visceral leishmaniasis in Eastern Africa: transforming patient care through innovation (VL-INNO) EDCTP-project tot doel een antigeen te ontwikkelen gebaseerde diagnostische test op basis van parasietbiomarkers in urine en bloed van VL-patiënten. In dit project zal een proteomics-aanpak worden gebruikt om kandidaat-Leishmania-antigenen te identificeren die worden aangetroffen in het bloed en de urine van bevestigde viscerale leishmaniasis. De Universiteit van York zal proteomische analyses van de monsters uitvoeren met behulp van een zeer gevoelige vloeistofchromatograaf Triple Quadrupole Massaspectrometer (LCMS/MS) om de antigeendiversiteit in gedefinieerde gearchiveerde klinische monsters (bloed, urine) van VL-patiënten voor en na de behandeling te onderzoeken. Op basis van de opbrengst, stabiliteit en immunogeniciteit van de antigenen zullen monoklonale antilichamen (mAb) worden geproduceerd voor de daaropvolgende ontwikkeling van een prototype van een laterale stroom snelle diagnostische test (RDT) dat leishmania-antigenen kan detecteren in bloed en/of urine van VL-patiënten.

Nu deze activiteiten zijn gestart met behulp van monsters die eerder zijn verzameld bij VL-patiënten in Kenia, probeert dit huidige protocol monsters (bloed en urine) te verzamelen van twee VL-behandelingscentra, namelijk het Chemolingot Sub-county ziekenhuis in Baringo County en Kacheliba Sub-county, West Pokot, om worden gebruikt bij de evaluatie van het RDT-prototype. We zullen monsters van VL-patiënten analyseren die vóór en aan het einde van de behandeling zijn verzameld, om de gevoeligheid van de test te bepalen en hoe de overvloed aan parasietantigeen in urine en bloed verandert als gevolg van klinische genezing. Er zullen monsters van gezonde endemische controles worden gebruikt om de specificiteit van de test te bepalen.