Leishmania-antigeenin nopean diagnostisen testin käsitteen todistaminen ja validointitutkimus

Viskeraalinen leishmaniaasi (VL) tai kala azar on laiminlyöty trooppinen sairaus (NTD), jonka aiheuttavat Leishmania donovani -kompleksin alkueläinloiset, joita levittävät flebotomiinihiekkapärpäset. Maailmassa todetaan vuosittain arviolta 50 000 - 90 000 uutta tapausta. Sille on tyypillistä kuume, painonpudotus, pernan ja maksan suureneminen sekä anemia, ja se voi johtaa kuolemaan yli 95 prosentissa tapauksista ilman hoitoa. Afrikan sarven alueella esiintyy eniten VL-tapauksia maailmanlaajuisesti, ja syrjäisissä, resurssirajoitteisissa ympäristöissä asuvat yhteisöt ovat suurimmassa tartuntariskissä. Siksi VL:n varhainen ja tarkka diagnoosi terveyslaitoksissa on välttämätöntä. VL on kohtalokas, jos sitä ei hoideta riittävästi. Tällä hetkellä VL:n hoitoon käytettävillä lääkkeillä voi olla vakavia sivuvaikutuksia, eikä VL:n kliininen esitys ole riittävän spesifinen ohjaamaan hoitoa. Erittäin tarkat (sekä herkät että spesifiset), halvat ja yksinkertaiset pikadiagnostiset testit (RDT) ovat siksi ratkaisevan tärkeitä VL:n tapausten hallinnassa. Tapauksen varhainen havaitseminen ja sen jälkeen riittävä hoito on myös keskeistä VL:n hallinnassa.

Keniassa viskeraalisen leishmaniaasin diagnosoi rK39 RDT, joka perustuu 39 aminohapon toistuvan rekombinanttileishmaniaalisen antigeenin vasta-aineen havaitsemiseen kliinisesti epäillyissä tapauksissa. Koska tämän testin optimaalinen herkkyys on noin 85%, muut diagnostiset lisätestit ovat usein tarpeen. Näitä ovat suora agglutinaatiotesti (DAT), joka perustuu koko loisen antigeenin agglutinaatioon loisspesifisten isäntävasta-aineiden avulla, ja amastigoottien mikroskooppinen havaitseminen imusolmukkeiden puhkaisuista, luuytimestä tai pernan aspiraatiosta saatujen värjäytyneiden sivelysolujen avulla, joka on tällä hetkellä kultainen standardi varmistusdiagnoosissa.

Vaikka rK39 RDT:n ja DAT:n käyttö on lisääntynyt, testit eivät voi erottaa aktiivisia infektioita aiemmista infektioista, koska ne perustuvat sekä aktiivisissa että aiemmissa infektioissa esiintyvien antileishmania-vasta-aineiden havaitsemiseen. Lisäksi DAT vaatii joitain laboratoriotaitoja ja yön yli tapahtuvia inkubaatioita ennen tulosten saamista, ja rK39:llä on alhainen herkkyys, kun sitä käytetään Itä-Afrikassa. Siksi on pyritty kehittämään antigeenin havaitsemiseen perustuva testi, joka perustuu minimaalisesti invasiiviseen näytteiden, kuten veren tai virtsan, keräämiseen.

Tätä tarkoitusta varten KEMRI:n, DNDin, FIND:n ja Yorkin yliopiston yhteistyöllä Itä-Afrikan viskeraalisen leishmaniaasin seuraavan sukupolven diagnostiikassa ja suun hoidossa: potilashoidon muuttaminen innovaation kautta (VL-INNO) EDCTP-projektissa tavoitteena on kehittää antigeeni. perustuva diagnostinen testi, joka perustuu VL-potilaiden virtsassa ja veressä oleviin loisten biomarkkereihin. Tässä projektissa proteomiikkalähestymistapaa käytetään tunnistamaan kandidaattileishmania-antigeenejä, joita löytyy vahvistetun viskeraalisen leishmaniaasin verestä ja virtsasta. Yorkin yliopisto suorittaa näytteiden proteomiset analyysit käyttämällä erittäin herkkää nestekromatograafia kolminkertaisen kvadrupolin massaspektrometriä (LCMS/MS) tutkiakseen antigeenien monimuotoisuutta määritellyissä arkistoiduissa kliinisissä näytteissä (veri, virtsa) VL-potilaista ennen ja jälkeen hoidon. Antigeenien saannon, stabiilisuuden ja immunogeenisyyden perusteella tuotetaan monoklonaalisia vasta-aineita (mAb) myöhempää lateraalivirtauksen nopean diagnostisen testin (RDT) prototyypin kehittämiseksi, joka pystyy havaitsemaan leishmania-antigeeneja VL-potilaiden verestä ja/tai virtsasta.

Kun nämä toimet aloitettiin käyttämällä näytteitä, jotka on kerätty aiemmin Kenian VL-potilailta, tämän nykyisen protokollan tarkoituksena on kerätä näytteitä (veri ja virtsa) kahdesta VL-hoitokeskuksesta, nimittäin Chemolingotin osavaltion sairaalasta Baringon piirikunnasta ja Kacheliban osavaltiosta West Pokotista. käyttää RDT-prototyypin arvioinnissa. Analysoimme VL-potilailta ennen hoitoa ja sen jälkeen kerättyjä näytteitä selvittääksemme testin herkkyyden ja kuinka loisten antigeenin runsaus virtsassa ja veressä muuttuu kliinisen paranemisen seurauksena. Testin spesifisyyden määrittämiseen käytetään näytteitä terveistä endeemisistä kontrolleista.