Estudio de validación y prueba de concepto de prueba de diagnóstico rápido del antígeno de Leishmania

La leishmaniasis visceral (LV) o kala azar es una enfermedad tropical desatendida (ETD) causada por parásitos protozoarios del complejo Leishmania donovani que se transmiten por flebótomos. Se estima que anualmente se producen entre 50.000 y 90.000 nuevos casos en todo el mundo. Se caracteriza por fiebre, pérdida de peso, agrandamiento del bazo y del hígado y anemia, y puede ser mortal en más del 95% de los casos sin tratamiento. El Cuerno de África representa el mayor número de casos de LV en todo el mundo, y las comunidades que viven en entornos remotos y con recursos limitados corren el mayor riesgo de infección. Por tanto, el diagnóstico temprano y preciso de la LV en los centros de salud es esencial. La LV es mortal si no se trata adecuadamente. Los fármacos que se utilizan actualmente para tratar la LV pueden tener efectos secundarios graves y la presentación clínica de la LV no es lo suficientemente específica como para guiar el tratamiento. Por lo tanto, las pruebas de diagnóstico rápido (PDR) altamente precisas (tanto sensibles como específicas), baratas y sencillas son cruciales para el tratamiento de los casos de LV. La detección temprana de casos seguida de un tratamiento adecuado también es fundamental para el control de la LV.

En Kenia, la leishmaniasis visceral se diagnostica mediante la PDR rK39 basándose en la detección del anticuerpo del huésped contra un antígeno de leishmania recombinante de repetición de 39 aminoácidos en casos clínicamente sospechosos. Debido a que esta prueba tiene una sensibilidad subóptima de alrededor del 85%, a menudo son necesarias otras pruebas de diagnóstico adicionales. Estas incluyen la prueba de aglutinación directa (DAT, por sus siglas en inglés) basada en la aglutinación de todo el antígeno del parásito mediante anticuerpos del huésped específicos del parásito y la detección microscópica de amastigotes en frotis teñidos de punciones de ganglios linfáticos, aspirados de médula ósea o de bazo, actualmente el estándar de oro para el diagnóstico confirmatorio.

Si bien el uso de rK39 RDT y DAT ha ido en aumento, las pruebas no pueden distinguir las infecciones activas de las pasadas, ya que se basan en la detección de anticuerpos antileishmania que están presentes tanto en infecciones activas como pasadas. Además, la DAT requiere algunas habilidades de laboratorio e incubaciones durante la noche antes de obtener los resultados y el rK39 tiene baja sensibilidad cuando se usa en África Oriental. Por lo tanto, se han realizado esfuerzos para desarrollar una prueba basada en la detección de antígenos que se base en la recolección de muestras mínimamente invasivas, como sangre u orina.

Con este fin, una colaboración entre KEMRI, DNDi, FIND y la Universidad de York en el marco del proyecto EDCTP Diagnóstico y tratamiento oral de próxima generación para la leishmaniasis visceral en África Oriental: transformando la atención al paciente a través de la innovación (VL-INNO) tiene como objetivo desarrollar un antígeno. Prueba diagnóstica basada en biomarcadores de parásitos en orina y sangre de pacientes con LV. En este proyecto, se utilizará un enfoque proteómico para identificar antígenos candidatos de Leishmania que se encuentran en la sangre y la orina de leishmaniasis visceral confirmada. La Universidad de York llevará a cabo análisis proteómicos de las muestras utilizando un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo (LCMS/MS) con cromatógrafo líquido de alta sensibilidad para explorar la diversidad de antígenos en muestras clínicas archivadas definidas (sangre, orina) de pacientes con LV antes y después del tratamiento. Según el rendimiento, la estabilidad y la inmunogenicidad de los antígenos, se producirán anticuerpos monoclonales (mAb) para el desarrollo posterior de un prototipo de prueba de diagnóstico rápido (RDT) de flujo lateral que puede detectar antígenos de leishmania en sangre y/u orina de pacientes con leishmania.

Con estas actividades iniciadas utilizando muestras previamente recolectadas de pacientes con LV en Kenia, este protocolo actual busca recolectar muestras (sangre y orina) de dos centros de tratamiento de LV, a saber, el hospital del subcondado de Chemolingot en el condado de Baringo y el subcondado de Kacheliba, West Pokot, para utilizarse en la evaluación del prototipo RDT. Analizaremos muestras de pacientes con LV recolectadas antes y al final del tratamiento, para determinar la sensibilidad de la prueba y cómo cambia la abundancia del antígeno del parásito en la orina y la sangre como consecuencia de la curación clínica. Se utilizarán muestras de controles endémicos sanos para determinar la especificidad de la prueba.