Leishmania Antigen Rapid Diagnostic Test Proof-of-Concept og valideringsstudie

Visceral leishmaniasis (VL) eller kala azar er en forsømt tropisk sykdom (NTD) forårsaket av protozoiske parasitter fra Leishmania donovani-komplekset som overføres av flebotomine sandfluer. Anslagsvis 50 000 - 90 000 nye tilfeller oppstår på verdensbasis årlig. Det er preget av feber, vekttap, forstørrelse av milt og lever, og anemi, og det kan være dødelig i mer enn 95 % av tilfellene uten behandling. Afrikas horn står for det største antallet VL-tilfeller over hele verden, og samfunn som bor i eksterne, ressursbegrensede omgivelser har størst risiko for infeksjon. Derfor er tidlig og nøyaktig diagnose av VL i helseinstitusjoner avgjørende. VL er dødelig hvis det ikke behandles tilstrekkelig. Medisinene som for tiden brukes til å behandle VL kan ha alvorlige bivirkninger, og den kliniske presentasjonen av VL er ikke tilstrekkelig spesifikk til å veilede behandlingen. Svært nøyaktige (både sensitive og spesifikke), billige og enkle raske diagnostiske tester (RDT) er derfor avgjørende for saksbehandling av VL. Tidlig saksoppdagelse etterfulgt av adekvat behandling er også sentralt for kontroll av VL.

I Kenya blir Visceral leishmaniasis diagnostisert av rK39 RDT basert på påvisning av vertsantistoff mot et 39-aminosyrerepet rekombinant leishmanialt antigen i klinisk mistenkte tilfeller. Fordi denne testen har en suboptimal sensitivitet på rundt 85 %, er det ofte nødvendig med andre tilleggsdiagnostiske tester. Disse inkluderer direkte agglutinasjonstesten (DAT) basert på agglutinering av hel parasittantigen med parasittspesifikke vertsantistoffer og mikroskopi påvisning av amastigoter i fargede utstryk fra lymfeknutepunkteringer, benmargs- eller miltaspirater som for tiden er gullstandarden for bekreftende diagnose.

Mens bruken av rK39 RDT og DAT har vært økende, kan ikke testene skille aktive fra tidligere infeksjoner da de er basert på påvisning av antileishmania-antistoffer som er tilstede i både aktive og tidligere infeksjoner. Videre krever DAT noen laboratorieferdigheter og inkubasjoner over natten før resultatene oppnås, og rK39 har lav følsomhet når den brukes i Øst-Afrika. Det har derfor vært forsøk på å utvikle en antigendeteksjonsbasert test som er basert på minimalt invasiv prøvesamling som blod eller urin.

For dette formål, et samarbeid mellom KEMRI, DNDi, FIND og University of York under neste generasjons diagnostikk og oral behandling for visceral leishmaniasis i Øst-Afrika: transforming pasientbehandling gjennom innovasjon (VL-INNO) EDCTP-prosjekt, har som mål å utvikle et antigen basert diagnostisk test basert på parasittbiomarkører i urin og blod fra VL-pasienter. I dette prosjektet vil en proteomikk-tilnærming bli brukt for å identifisere kandidat Leishmania-antigener som finnes i blod og urin ved bekreftet visceral leishmaniasis. University of York vil foreta proteomiske analyser av prøvene ved å bruke svært sensitive væskekromatograf trippelt kvadrupol massespektrometer (LCMS/MS) for å utforske antigenmangfoldet i definerte arkiverte kliniske prøver (blod, urin) fra VL-pasienter før og etter behandling. Basert på utbytte, stabilitet og immunogenisitet til antigenene, vil monoklonale antistoffer (mAb) produseres for påfølgende utvikling av en prototype for lateral flow rapid diagnostic test (RDT) som kan påvise leishmania-antigener i blod og/eller urin hos VL-pasienter.

Med disse aktivitetene startet ved å bruke prøver som tidligere er samlet inn fra VL-pasienter i Kenya, søker denne gjeldende protokollen å samle inn prøver (blod og urin) fra to VL-behandlingssentre, nemlig Chemolingot Sub-county sykehus i Baringo County og Kacheliba Sub-county, West Pokot, til brukes i evalueringen av RDT-prototypen. Vi vil analysere prøver fra VL-pasienter samlet inn før og ved slutten av behandlingen, for å bestemme testens sensitivitet og hvordan parasittantigenoverflod i urin og blod endres som en konsekvens av klinisk kur. Prøver fra friske endemiske kontroller vil bli brukt for å bestemme spesifisiteten til testen.