Étude de preuve de concept et de validation du test de diagnostic rapide de l'antigène Leishmania

La leishmaniose viscérale (LV) ou kala azar est une maladie tropicale négligée (MTN) causée par des parasites protozoaires du complexe Leishmania donovani transmis par des phlébotomes. On estime que 50 000 à 90 000 nouveaux cas surviennent chaque année dans le monde. Elle se caractérise par de la fièvre, une perte de poids, une hypertrophie de la rate et du foie et une anémie, et elle peut être mortelle dans plus de 95 % des cas sans traitement. La Corne de l’Afrique compte le plus grand nombre de cas de LV dans le monde, et les communautés vivant dans des zones reculées et aux ressources limitées sont les plus exposées au risque d’infection. Par conséquent, un diagnostic précoce et précis de la CV dans les établissements de santé est essentiel. La LV est mortelle si elle n’est pas correctement traitée. Les médicaments actuellement utilisés pour traiter la LV peuvent avoir des effets secondaires graves et la présentation clinique de la LV n'est pas suffisamment spécifique pour orienter le traitement. Des tests de diagnostic rapide (TDR) très précis (à la fois sensibles et spécifiques), peu coûteux et simples sont donc cruciaux pour la prise en charge des cas de LV. La détection précoce des cas, suivie d'un traitement adéquat, est également essentielle au contrôle de la LV.

Au Kenya, la leishmaniose viscérale est diagnostiquée par le RDT rK39 sur la base de la détection d'anticorps de l'hôte contre un antigène leishmanial recombinant à répétition de 39 acides aminés dans les cas cliniquement suspectés. Ce test ayant une sensibilité sous-optimale d’environ 85 %, d’autres tests de diagnostic supplémentaires sont souvent nécessaires. Ceux-ci incluent le test d'agglutination directe (DAT) basé sur l'agglutination de l'antigène parasitaire entier par des anticorps spécifiques de l'hôte et la détection microscopique des amastigotes dans des frottis colorés provenant de ponctions de ganglions lymphatiques, d'aspirations de moelle osseuse ou de rate, actuellement la référence en matière de diagnostic de confirmation.

Bien que l'utilisation du rK39 RDT et du DAT soit en augmentation, les tests ne peuvent pas distinguer les infections actives des infections passées car ils sont basés sur la détection des anticorps antileishmanie présents dans les infections actives et passées. De plus, le DAT nécessite certaines compétences en laboratoire et des incubations d'une nuit avant d'obtenir les résultats et le rK39 a une faible sensibilité lorsqu'il est utilisé en Afrique de l'Est. Des efforts ont donc été déployés pour développer un test basé sur la détection d'antigènes basé sur un prélèvement d'échantillons mini-invasif tel que du sang ou de l'urine.

À cette fin, une collaboration entre KEMRI, DNDi, FIND et l'Université de York dans le cadre du projet EDCTP Next Generation Diagnostics and Oral Treatment for Visceral Leishmaniosis in Eastern Africa: Transforming Patient Care Through Innovation (VL-INNO) vise à développer un antigène test de diagnostic basé sur des biomarqueurs parasitaires dans l'urine et le sang de patients atteints de LV. Dans ce projet, une approche protéomique sera utilisée pour identifier les antigènes candidats de Leishmania présents dans le sang et l'urine des leishmanioses viscérales confirmées. L'Université de York entreprendra des analyses protéomiques des échantillons à l'aide d'un spectromètre de masse triple quadripôle (LCMS/MS) à chromatographe liquide hautement sensible pour explorer la diversité des antigènes dans des échantillons cliniques archivés définis (sang, urine) provenant de patients atteints de LV avant et après le traitement. Sur la base du rendement, de la stabilité et de l'immunogénicité des antigènes, des anticorps monoclonaux (AcM) seront produits pour le développement ultérieur d'un prototype de test de diagnostic rapide (TDR) à flux latéral capable de détecter les antigènes de leishmanie dans le sang et/ou l'urine des patients atteints de LV.

Avec ces activités initiées à partir d'échantillons préalablement collectés auprès de patients atteints de LV au Kenya, ce protocole actuel vise à collecter des échantillons (sang et urine) de deux centres de traitement de la LV, à savoir l'hôpital du sous-comté de Chemolingot dans le comté de Baringo et le sous-comté de Kacheliba, West Pokot, pour être utilisé dans l’évaluation du prototype RDT. Nous analyserons des échantillons de patients VL collectés avant et à la fin du traitement, pour déterminer la sensibilité du test et comment l'abondance de l'antigène parasitaire dans l'urine et le sang change en conséquence de la guérison clinique. Des échantillons provenant de contrôles endémiques sains seront utilisés pour déterminer la spécificité du test.