利什曼原虫抗原快速诊断测试概念验证和验证研究

内脏利什曼病 (VL) 或黑热病是一种被忽视的热带病 (NTD)，由杜氏利什曼原虫复合体的原生动物寄生虫引起，通过白蛉传播。 据估计，全球每年发生 50,000 - 90,000 例新病例。 它的特点是发烧、体重减轻、脾脏和肝脏肿大以及贫血，如果不治疗，95%以上的病例可能会致命。 非洲之角是全球 VL 病例数量最多的地区，生活在资源有限的偏远地区的社区感染风险最大。 因此，在卫生机构中早期、准确地诊断 VL 至关重要。 如果治疗不充分，VL 是致命的。 目前用于治疗 VL 的药物可能有严重的副作用，并且 VL 的临床表现不足以指导治疗。 因此，高度准确（敏感且特异）、廉价且简单的快速诊断测试 (RDT) 对于 VL 病例管理至关重要。 及早发现病例并进行适当治疗也是控制 VL 的核心。

在肯尼亚，内脏利什曼病是通过 rK39 RDT 诊断的，其依据是在临床疑似病例中检测到 39 个氨基酸重复重组利什曼原虫抗原的宿主抗体。 由于该测试的敏感性约为 85%，因此通常需要其他额外的诊断测试。 其中包括基于寄生虫特异性宿主抗体对整个寄生虫抗原的凝集的直接凝集试验（DAT），以及对淋巴结穿刺、骨髓或脾抽吸物染色涂片中的无鞭毛体进行显微镜检测，目前这是确诊的金标准。

虽然 rK39 RDT 和 DAT 的使用不断增加，但这些测试无法区分活动性感染和既往感染，因为它们基于检测活动性感染和既往感染中都存在的抗利什曼抗体。 此外，DAT 在获得结果之前需要一些实验室技能和过夜孵育，并且 rK39 在东非使用时灵敏度较低。 因此，人们努力开发一种基于抗原检测的测试，该测试基于微创样本采集，例如血液或尿液。

为此，KEMRI、DNDi、FIND 和约克大学在东非内脏利什曼病的下一代诊断和口服治疗：通过创新改变患者护理 (VL-INNO) EDCTP 项目下进行合作，旨在开发一种抗原基于 VL 患者尿液和血液中寄生虫生物标志物的诊断测试。 在该项目中，蛋白质组学方法将用于鉴定在已确诊的内脏利什曼病的血液和尿液中发现的候选利什曼原虫抗原。 约克大学将使用高灵敏度液相色谱三重四极杆质谱仪 (LCMS/MS) 对样本进行蛋白质组学分析，以探索 VL 患者治疗前后确定的存档临床样本（血液、尿液）中的抗原多样性。 根据抗原的产量、稳定性和免疫原性，将生产单克隆抗体 (mAb)，用于后续开发侧流快速诊断测试 (RDT) 原型，该原型可以检测 VL 患者血液和/或尿液中的利什曼原虫抗原。

这些活动使用之前从肯尼亚 VL 患者收集的样本开始，目前的方案旨在从两个 VL 治疗中心（即巴林戈县 Chemolingot 县医院和西波科特 Kacheliba 县医院）收集样本（血液和尿液），以用于 RDT 原型的评估。 我们将分析治疗前和治疗结束时收集的 VL 患者样本，以确定测试的敏感性以及临床治愈后尿液和血液中寄生虫抗原丰度的变化。 来自健康流行病对照的样本将用于确定测试的特异性。