Leishmania Antigen Rapid Diagnostic Test Proof-of-Concept og valideringsundersøgelse

Visceral leishmaniasis (VL) eller kala azar er en overset tropisk sygdom (NTD) forårsaget af protozoiske parasitter af Leishmania donovani-komplekset, der overføres af phlebotomine sandfluer. Anslået 50.000 - 90.000 nye tilfælde opstår på verdensplan årligt. Det er karakteriseret ved feber, vægttab, forstørrelse af milt og lever samt anæmi, og det kan være dødeligt i mere end 95 % af tilfældene uden behandling. Afrikas Horn tegner sig for det største antal VL-tilfælde på verdensplan, og samfund, der bor i fjerntliggende, ressourcebegrænsede omgivelser har størst risiko for infektion. Derfor er tidlig og nøjagtig diagnose af VL i sundhedsfaciliteter afgørende. VL er dødelig, hvis den ikke behandles tilstrækkeligt. De lægemidler, der i øjeblikket bruges til at behandle VL, kan have alvorlige bivirkninger, og den kliniske præsentation af VL er ikke tilstrækkelig specifik til at vejlede behandlingen. Meget nøjagtige (både følsomme og specifikke), billige og enkle hurtige diagnostiske tests (RDT'er) er derfor afgørende for sagsbehandling af VL. Tidlig påvisning af tilfælde efterfulgt af passende behandling er også central for kontrol af VL.

I Kenya diagnosticeres Visceral leishmaniasis af rK39 RDT baseret på påvisning af værtsantistof mod et 39-aminosyre-gentag rekombinant leishmanialt antigen i klinisk mistænkte tilfælde. Fordi denne test har en suboptimal følsomhed på omkring 85 %, er andre yderligere diagnostiske tests ofte nødvendige. Disse omfatter den direkte agglutinationstest (DAT) baseret på agglutination af hel parasitantigen med parasitspecifikke værtsantistoffer og mikroskopi påvisning af amastigoter i farvede udstrygninger fra lymfeknudepunkteringer, knoglemarvs- eller miltaspirater, som i øjeblikket er den gyldne standard for bekræftende diagnose.

Mens brugen af ​​rK39 RDT og DAT har været stigende, kan testene ikke skelne aktive fra tidligere infektioner, da de er baseret på påvisning af antileishmania-antistoffer, som er til stede i både aktive og tidligere infektioner. Desuden kræver DAT nogle laboratoriefærdigheder og inkubationer natten over, før resultaterne opnås, og rK39 har lav følsomhed, når det bruges i det østlige Afrika. Der har derfor været bestræbelser på at udvikle en antigendetektionsbaseret test, der er baseret på minimalt invasiv prøveindsamling såsom blod eller urin.

Til dette formål har et samarbejde mellem KEMRI, DNDi, FIND og University of York under Next generation diagnostics and oral treatment for visceral leishmaniasis in Eastern Africa: transforming patient care through innovation (VL-INNO) EDCTP-projekt, til formål at udvikle et antigen baseret diagnostisk test baseret på parasit biomarkører i urin og blod fra VL patienter. I dette projekt vil en proteomisk tilgang blive brugt til at identificere kandidat Leishmania antigener, der findes i blodet og urinen ved bekræftet visceral leishmaniasis. University of York vil udføre proteomiske analyser af prøverne ved hjælp af et meget følsomt væskekromatograf Triple Quadrupole Mass Spectrometer (LCMS/MS) for at udforske antigendiversitet i definerede arkiverede kliniske prøver (blod, urin) fra VL-patienter før og efter behandling. Baseret på udbytte, stabilitet og immunogenicitet af antigenerne, vil monoklonale antistoffer (mAb) produceres til efterfølgende udvikling af en lateral flow rapid diagnostic test (RDT) prototype, der kan påvise leishmania antigener i blod og/eller urin hos VL patienter.

Med disse aktiviteter initieret ved hjælp af prøver, der tidligere er indsamlet fra VL-patienter i Kenya, søger denne nuværende protokol at indsamle prøver (blod og urin) fra to VL-behandlingscentre, nemlig Chemolingot Sub-county hospital i Baringo County og Kacheliba Sub-county, West Pokot, til bruges i evalueringen af ​​RDT-prototypen. Vi vil analysere prøver fra VL-patienter indsamlet før og ved slutningen af ​​behandlingen, for at bestemme testens følsomhed og hvordan parasitantigenoverflod i urin og blod ændrer sig som en konsekvens af klinisk helbredelse. Prøver fra raske endemiske kontroller vil blive brugt til at bestemme testens specificitet.