Celotělový metabolismus u dětí před a po léčbě nádoru CNS

Srovnáním dětí s nově diagnostikovaným nádorem CNS s dětmi ukončenými pro nádor CNS chtějí řešitelé popsat metabolickou cestu během přibližně dvouletého léčebného období, kterým tyto děti procházejí. Tyto výsledky budou také porovnány s výsledky zdravých kontrol.

Zkušební design a časový rámec:

Prospektivní, nerandomizovaná, průřezová studie.

Budou zahrnuty tři různé skupiny pacientů:

• Skupina pacientů A: Děti s nově diagnostikovaným nádorem CNS
• Skupina pacientů B: Děti ukončily léčbu pro tumor CNS
• Zdravé kontroly: Děti přijaté do nemocnice na jednotce monitoru epilepsie (EMU)

Zkouška bude probíhat celkem dva dny a bude probíhat na Klinice dětského a dorostového lékařství, Rigshospitalet a Kodaňské neuromuskulární centrum, Neurologická klinika, Rigshospitalet.

• Studijní den 1: Odhaduje se, že bude trvat přibližně 2 hodiny.
• Studijní den 2: Odhaduje se, že bude trvat přibližně 8 hodin.

Den studie 1: Děti budou naskenovány DXA a vyplní dotazníky kvality života a skóre bolesti. V některých případech bude 1. den studie proveden po 2. dni studie, v závislosti na plánu léčby rakoviny pro každého pacienta.

Den studie 2: Pro pacienty nově diagnostikovaný nádor CNS: Výzkumníci se snaží provést den studie 2 během prvního týdne po přijetí do nemocnice kvůli nově diagnostikovanému nádoru CNS. Vyšetřovatelé však uznávají, že 2. den studie bude proveden během prvního měsíce po stanovení diagnózy. Subjekty dorazí kolem 08:00 do Kodaňského neuromuskulárního centra (CNMC), Rigshospitalet.

Při příjezdu bude na pokožku dětí aplikován EMLA (krém s lokálním anestetikem), aby se minimalizovalo jakékoli nepohodlí, které může nastat během iv zavedení. Zavedou se dva periferní žilní katétry, jeden do mediální kubitální žíly pro infuzi stabilních izotopů a jeden do dorzální žíly ruky pro odběr krve. Pokud má dítě centrální žilní katétr (CVK), zavedeme pouze jeden periferní žilní katétr, do střední cubitální žíly pro infuzi stabilních izotopů.

Po 1 hodině a 45 minutách bazální infuze indikátoru se odeberou vzorky bazální krve (čas -15 a 0) pro stanovení obohacení bazálního indikátoru v ustáleném stavu a koncentrací hormonů. V čase = 0 se podává tekuté smíšené jídlo. Vzorky krve se odebírají často po dobu 6 hodin vzhledem k začátku testovacího jídla (v 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 a 360 minutách)[24], [25]. Pokud se dítě rozčílí nebo chceme z jiných důvodů přestat dříve než za 6 hodin, využijeme již získané výsledky.

Indikátory: V této studii budou výzkumníci intravenózně podávat malá množství metabolitů značených stabilními izotopy v předem připravených kontinuálních intravenózních infuzích: D8-fenylalanin, D2-tyrosin, kyselina 13C18-oleát, D2-glukóza, D5-glycerol. Tato metoda je dobře zavedená jak na CIMT, tak na CNMC a již dříve byla použita při vyšetřování několika kategorií pacientů: Novorozenci (probíhající studie), žaludeční rukávci, starší a neuromuskulární pacienti.

Stopovače jsou připravovány z nemocniční lékárny. Všechny indikátory jsou zakoupeny od Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, USA vhodné pro lidské použití. Stabilní izotopy jsou neradioaktivní a přirozeně se vyskytující v potravinách (např. v kukuřici).

Potravinová intervence: V čase = 0 (120 minut po infuzi) se podává tekuté smíšené jídlo upravené podle hmotnosti. Jídlo se skládá z: Vlastní značený D5-fenylalanin a D3-leucinem značený kaseinový protein, 13C16palmitát, 13C6-glukóza ve směsi glukózy, kaseinového proteinu a řepkového oleje rozpuštěného ve vodě v energetické hustotě 50 % CHO, 35 % tuku a 15 % bílkovin. Skutečně značený kaseinát byl vyroben infuzí [D5]-fenylalaninu a [D3]leucinu dojnici, aby se získalo obohacené mléko Foulumn, Arhus University, ze kterého byla frakce kaseinátu izolována v Arla Foods podle správné výrobní praxe (GMP) a bezpečnost zkontrolovala sklad za vhodných regulačních podmínek až do použití (Nørre Vium, Dánsko) podle dříve popsaného postupu.

Analýza vzorků krve: Vzorky budou odebírány do injekčních stříkaček obsahujících 10 μl EDTA/ml, aby se zabránilo koagulaci. Krev se okamžitě odstředí při 4oC, aby se oddělila plazma od červených krvinek. Vzorky budou zmrazeny v kódovaných zkumavkách a skladovány při -80 °C až do analýzy.

Rutinní krevní vzorky: Budou okamžitě analyzovány na Oddělení klinické biochemie Rigshospitalet:

- Vzorky krve zahrnují: Inzulin, HbA1C, Cholesterol, HDL, LDL, triglyceridy

Glukóza a laktát: budou analyzovány (ABL 700) ihned po odběru krve.

Specifické vzorky krve:

• Volné mastné kyseliny: budou analyzovány pomocí fluorometrie.
• Hormony (katecholaminy, inzulin, inkretiny a glukagon): budou analyzovány pomocí metod RIA a Elisa.
• Stabilní izotopové obohacení v krvi: bude analyzováno pomocí kapalinové chromatografie-tandemové hmotnostní spektrometrie (LC-MS/MS) a poměrové hmotnostní spektrometrie poměrových izotopů plynové chromatografie (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, CA, USA a Brémy, Německo).

Výpočty: Kvantitativní kinetika celotělových metabolitů bude vypočítána pomocí Steeleovy rovnice pro nestacionární stav přizpůsobené pro analýzu stabilních izotopů za postabsorpčních podmínek.