Metabolismo de corpo inteiro em crianças antes e depois do tratamento de tumor do SNC

Comparando crianças com tumor do SNC recém-diagnosticado com crianças que terminaram o tratamento para tumor do SNC, os investigadores desejam descrever a via metabólica durante o período de tratamento de aproximadamente dois anos pelo qual essas crianças passam. Esses resultados também serão comparados com resultados de controles saudáveis.

Projeto e prazo do teste:

Estudo prospectivo, não randomizado e transversal.

Haverá três grupos diferentes de pacientes incluídos:

• Grupo de pacientes A: Crianças com tumor do SNC recém-diagnosticado
• Grupo de pacientes B: Crianças terminaram o tratamento para tumor do SNC
• Controles saudáveis: Crianças internadas na unidade de monitoramento de epilepsia (UEM)

O ensaio será realizado durante um total de dois dias e será realizado no Departamento de Pediatria e Medicina do Adolescente, Rigshospitalet e no Centro Neuromuscular de Copenhague, Departamento de Neurologia, Rigshospitalet.

• Dia de estudo 1: Estima-se que dure aproximadamente 2 horas.
• Dia de estudo 2: Estima-se que dure aproximadamente 8 horas.

Dia de estudo 1: As crianças serão examinadas por DXA e preencherão questionários de qualidade de vida e pontuações de dor. Em alguns casos, o dia de estudo 1 será realizado após o dia de estudo 2, dependendo do plano de tratamento do câncer para cada paciente.

Dia de estudo 2: Para os pacientes recém-diagnosticados com tumor do SNC: Os investigadores se esforçam para realizar o dia 2 do estudo na primeira semana de internação hospitalar devido ao tumor do SNC recém-diagnosticado. No entanto, os investigadores aceitam que o dia 2 do estudo seja conduzido no primeiro mês após o diagnóstico. Os sujeitos chegarão por volta das 08h00, no Copenhagen Neuromuscular Center (CNMC), Rigshospitalet.

Na chegada, EMLA (creme anestésico local) será aplicado na pele das crianças para minimizar qualquer desconforto que possa ocorrer durante a inserção intravenosa. Dois cateteres venosos periféricos são inseridos, um na veia cubital medial para infusão de isótopos estáveis ​​e outro na veia dorsal da mão para coleta de sangue. Caso a criança possua cateter venoso central (CVK), inseriremos apenas um cateter venoso periférico, na veia cubital medial para infusão dos isótopos estáveis.

Após 1 hora e 45 minutos de infusão do traçador basal, são colhidas amostras de sangue basal (tempo -15 e 0) para a determinação dos enriquecimentos basais do traçador no estado estacionário e das concentrações hormonais. No tempo = 0, é fornecida uma refeição líquida mista. Amostras de sangue são coletadas frequentemente durante 6 horas em relação ao início da refeição de teste (aos 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 e 360 ​​minutos)[24], [25]. Se a criança ficar chateada ou por outros motivos quisermos parar antes das 6 horas, utilizaremos os resultados já obtidos.

Os traçadores: Neste estudo, os investigadores infundirão por via intravenosa pequenas quantidades de metabólitos marcados com isótopos estáveis ​​​​em infusões intravenosas contínuas preparadas de: D8-fenilalanina, D2-tirosina, ácido 13C18-oleato, D2-glicose, D5-glicerol. Este método está bem estabelecido tanto no CIMT quanto no CNMC e já foi usado na investigação de diversas categorias de pacientes: neonatos (estudo em andamento), manga gástrica, idosos e pacientes neuromusculares.

Os traçadores são preparados na farmácia hospitalar. Todos os traçadores são adquiridos da Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, EUA, adequados para uso humano. Os isótopos estáveis ​​não são radioativos e ocorrem naturalmente nos alimentos (por exemplo, no milho).

Intervenção alimentar: No tempo = 0 (120 minutos após a infusão), é administrada uma refeição líquida mista ajustada pelo peso. A refeição consiste em: proteína de caseína marcada intrinsecamente com D5-fenilalanina e D3-leucina, 13C16palmitato, 13C6-glicose em uma mistura de glicose, proteína de caseína e óleo de colza dissolvido em água em uma densidade energética de 50% CHO, 35% de gordura e 15% de proteína. Caseinato intrinsecamente marcado foi produzido através de uma infusão de [D5]-fenilalanina e [D3]leucina em uma vaca em lactação para obter leite enriquecido Foulumn, Arhus University, do qual a fração de caseinato foi isolada na Arla Foods de acordo com Boas Práticas de Fabricação (GMP) e a segurança foi verificada em uma loja sob condições regulatórias apropriadas até o uso (Nørre Vium, Dinamarca) seguindo um procedimento descrito anteriormente.

Análises de amostras de sangue:As amostras serão coletadas em seringas contendo 10μL de EDTA/mL para evitar coagulação. O sangue é imediatamente centrifugado a 4oC para separar o plasma dos glóbulos vermelhos. As amostras serão congeladas em tubos codificados e armazenadas a -80C até a análise.

Amostras de sangue de rotina: Serão analisadas imediatamente no Departamento de Bioquímica Clínica, Rigshospitalet:

- As amostras de sangue incluem: insulina, HbA1C, colesterol, HDL, LDL, triglicerídeos

Glicose e lactato: serão analisados ​​(ABL 700) imediatamente após a coleta do sangue.

Amostras de sangue específicas:

• Ácidos graxos livres: serão analisados ​​por fluorometria.
• Hormônios (catecolaminas, insulina, incretinas e glucagon): serão analisados ​​pelos métodos RIA e Elisa respectivamente.
• Enriquecimentos de isótopos estáveis ​​​​no sangue: serão analisados ​​​​usando cromatografia líquida-espectrometria de massa em tandem (LC-MS / MS) e espectrometria de massa de razão isotópica de combustão por cromatografia gasosa (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, CA, EUA e Bremen, Alemanha).

Cálculos: A cinética quantitativa do metabólito de corpo inteiro será calculada usando a equação de Steele para estado não estacionário adaptada para análise de isótopos estáveis ​​sob condições pós-absortivas.