Metabolizm całego ciała u dzieci przed i po leczeniu guza OUN

Porównując dzieci z nowo zdiagnozowanym guzem OUN z dziećmi, które zakończyły leczenie z powodu nowotworu OUN, badacze chcą opisać ścieżkę metaboliczną podczas około dwuletniego okresu leczenia tych dzieci. Wyniki te zostaną również porównane z wynikami zdrowych kontroli.

Projekt wersji próbnej i ramy czasowe:

Prospektywne, nierandomizowane badanie przekrojowe.

Uwzględnione zostaną trzy różne grupy pacjentów:

• Grupa pacjentów A: Dzieci z nowo rozpoznanym guzem OUN
• Grupa pacjentów B: Dzieci zakończyły leczenie z powodu guza OUN
• Zdrowa kontrola: Dzieci przyjęte do szpitala na oddziale monitorowania padaczki (EMU)

Badanie będzie prowadzone łącznie przez dwa dni i będzie odbywać się na Oddziale Pediatrii i Medycyny Młodzieży w Rigshospitalet oraz w Kopenhaskim Centrum Neuromięśniowym na Wydziale Neurologii w Rigshospitalet.

• Dzień badania 1: Szacuje się, że trwa około 2 godzin.
• Dzień badania 2: Szacuje się, że trwa około 8 godzin.

Dzień badania 1: Dzieci zostaną poddane skanowi DXA i wypełnią kwestionariusze dotyczące jakości życia oraz oceny bólu. W niektórych przypadkach pierwszy dzień badania zostanie przeprowadzony po drugim dniu badania, w zależności od planu leczenia raka dla każdego pacjenta.

Dzień 2 badania: Dla pacjentów z nowo zdiagnozowanym guzem OUN: Badacze starają się przeprowadzić dzień 2 badania w ciągu pierwszego tygodnia od przyjęcia do szpitala z powodu nowo zdiagnozowanego guza OUN. Jednakże badacze zgadzają się, że drugi dzień badania zostanie przeprowadzony w ciągu pierwszego miesiąca od postawienia diagnozy. Badani przybędą około godziny 08:00 do Kopenhaskiego Centrum Neuromięśniowego (CNMC), Rigshospitalet.

Po przybyciu na miejsce na skórę dzieci zostanie nałożony krem ​​EMLA (miejscowy środek znieczulający), aby zminimalizować dyskomfort, który może wystąpić podczas wprowadzania dożylnego. Wprowadza się dwa cewniki do żył obwodowych, jeden do żyły łokciowej przyśrodkowej w celu wlewu stabilnych izotopów i jeden do żyły grzbietowej dłoni w celu pobrania krwi. Jeśli dziecko ma cewnik do żyły centralnej (CVK), wprowadzimy tylko jeden cewnik do żyły obwodowej do żyły łokciowej przyśrodkowej w celu wlewu stabilnych izotopów.

Po 1 godzinie i 45 minutach wlewu podstawowego znacznika pobiera się podstawowe próbki krwi (czas -15 i 0) w celu określenia podstawowego wzbogacenia znacznika w stanie stacjonarnym i stężeń hormonów. W czasie = 0 dostarczany jest płynny posiłek mieszany. Próbki krwi pobiera się często przez 6 godzin w stosunku do rozpoczęcia posiłku testowego (po 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 i 360 minutach) [24], [25]. Jeśli dziecko się zdenerwuje lub z innych powodów będziemy chcieli przerwać wcześniej niż po 6 godzinach, wykorzystamy już uzyskane wyniki.

Znaczniki: W tym badaniu badacze będą wstrzykiwać dożylnie małe ilości metabolitów znakowanych stabilnymi izotopami w przygotowanych ciągłych wlewach dożylnych: D8-fenyloalaniny, D2-tyrozyny, kwasu 13C18-oleinianu, D2-glukozy, D5-gliceryny. Metoda ta ma ugruntowaną pozycję zarówno w CIMT, jak i CNMC i była już wcześniej stosowana w badaniu kilku kategorii pacjentów: noworodki (badanie w toku), rękaw żołądkowy, pacjenci w podeszłym wieku i pacjenci z chorobami nerwowo-mięśniowymi.

Znaczniki przygotowywane są w aptece szpitalnej. Wszystkie znaczniki zakupiono w Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, USA, odpowiednie do stosowania u ludzi. Stabilne izotopy są nieradioaktywne i naturalnie występują w żywności (np. w kukurydzy).

Interwencja pokarmowa: W czasie = 0 (120 minut po infuzji) podaje się płynny posiłek mieszany dostosowany do masy. Posiłek składa się z: Wewnętrznie znakowanego białka kazeiny znakowanego D5-fenyloalaniną i D3-leucyną, palmitynianu 13C16, glukozy 13C6 w mieszance glukozy, białka kazeiny i oleju rzepakowego rozpuszczonego w wodzie o gęstości energetycznej 50% CHO, 35% tłuszczu i 15% białka. Wewnętrznie znakowany kazeinian został wyprodukowany poprzez wlew [D5]-fenyloalaniny i [D3]leucyny do krowy w okresie laktacji w celu uzyskania wzbogaconego mleka Foulumn na Uniwersytecie Arhus, z którego frakcję kazeinianu wyizolowano w Arla Foods zgodnie z dobrą praktyką produkcyjną (GMP). i bezpieczeństwo sprawdzono w magazynie zgodnie z odpowiednimi przepisami do czasu użycia (Nørre Vium, Dania) zgodnie z wcześniej opisaną procedurą.

Analizy próbek krwi: Próbki będą zbierane do strzykawek zawierających 10 µl EDTA/ml, aby zapobiec krzepnięciu. Krew jest natychmiast odwirowywana w temperaturze 4oC w celu oddzielenia osocza od czerwonych krwinek. Próbki zostaną zamrożone w kodowanych probówkach i przechowywane w temperaturze -80°C do czasu analizy.

Rutynowe próbki krwi: Zostaną natychmiast poddane analizie w Departamencie Biochemii Klinicznej w Rigshospitalet:

- Próbki krwi zawierają: insulinę, HbA1C, cholesterol, HDL, LDL, trójglicerydy

Glukoza i mleczan: zostaną zbadane (ABL 700) natychmiast po pobraniu krwi.

Konkretne próbki krwi:

• Wolne kwasy tłuszczowe: będą analizowane za pomocą fluorometrii.
• Hormony (katecholaminy, insulina, inkretyny i glukagon): będą analizowane odpowiednio metodami RIA i Elisa.
• Wzbogacenie stabilnymi izotopami we krwi: będzie analizowane przy użyciu chromatografii cieczowej z tandemową spektrometrią mas (LC-MS/MS) i chromatografii gazowej ze spektrometrią mas ze stosunkiem izotopów ze spalaniem (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, Kalifornia, USA i Brema, Niemcy).

Obliczenia: Kinetyka ilościowa metabolitów całego ciała zostanie obliczona przy użyciu równania Steele'a dla stanu nieustalonego, przystosowanego do analizy stabilnych izotopów w warunkach poabsorpcyjnych.