Metabolismo dell'intero corpo nei bambini prima e dopo il trattamento del tumore del sistema nervoso centrale

Confrontando i bambini con tumore al SNC di nuova diagnosi con i bambini che hanno terminato il trattamento per il tumore al SNC, i ricercatori desiderano descrivere il percorso metabolico durante il periodo di trattamento di circa due anni che questi bambini seguono. Questi risultati verranno anche confrontati con i risultati dei controlli sani.

Progettazione e tempistica dello studio:

Uno studio prospettico, non randomizzato e trasversale.

Saranno inclusi tre diversi gruppi di pazienti:

• Gruppo di pazienti A: bambini con tumore al sistema nervoso centrale di nuova diagnosi
• Gruppo di pazienti B: bambini che hanno terminato il trattamento per tumore al sistema nervoso centrale
• Controlli sanitari: bambini ricoverati in ospedale presso l'Unità di monitoraggio dell'epilessia (EMU)

Lo studio sarà condotto per un totale di due giorni e si svolgerà presso il Dipartimento di Pediatria e Medicina dell’Adolescenza, Rigshospitalet e il Centro Neuromuscolare di Copenaghen, Dipartimento di Neurologia, Rigshospitalet.

• Giorno di studio 1: la durata prevista è di circa 2 ore.
• Giorno di studio 2: la durata prevista è di circa 8 ore.

Giorno di studio 1: i bambini verranno sottoposti a scansione DXA e completeranno questionari sulla qualità della vita e punteggi del dolore. In alcuni casi, il giorno 1 dello studio verrà effettuato dopo il giorno 2 dello studio, a seconda del piano di trattamento del cancro per ciascun paziente.

Giorno di studio 2: Per i pazienti con nuova diagnosi di tumore al SNC: i ricercatori si impegnano a condurre il giorno di studio 2 entro la prima settimana dal ricovero ospedaliero a causa di un tumore al SNC di nuova diagnosi. Tuttavia, i ricercatori accettano che il giorno 2 dello studio venga condotto entro il primo mese dalla diagnosi. I soggetti arriveranno intorno alle 08:00, al Centro neuromuscolare di Copenaghen (CNMC), Rigshospitalet.

All'arrivo, sulla pelle dei bambini verrà applicata EMLA (crema anestetica locale) per ridurre al minimo qualsiasi disagio che potrebbe verificarsi durante l'inserimento della flebo. Vengono inseriti due cateteri venosi periferici, uno nella vena cubitale mediale per l'infusione di isotopi stabili e uno nella vena dorsale della mano per il prelievo di sangue. Se il bambino è portatore di catetere venoso centrale (CVK), inseriremo solo un catetere venoso periferico, nella vena cubitale mediale, per l'infusione degli isotopi stabili.

Dopo 1 ora e 45 minuti di infusione del tracciante basale, vengono prelevati campioni di sangue basale (tempo -15 e 0) per la determinazione degli arricchimenti del tracciante basale allo stato stazionario e delle concentrazioni ormonali. Al tempo = 0 viene fornito un pasto liquido misto. I campioni di sangue vengono prelevati frequentemente per 6 ore rispetto all'inizio del pasto di prova (a 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 e 360 ​​minuti)[24], [25]. Se il bambino si arrabbia o se per altri motivi vogliamo fermarlo prima delle 6 ore, utilizzeremo i risultati già ottenuti.

I traccianti: in questo studio, i ricercatori infonderanno per via endovenosa piccole quantità di metaboliti marcati con isotopi stabili in infusioni endovenose continue innescate di: D8-fenilalanina, D2-tirosina, acido 13C18-oleato, D2-glucosio, D5-glicerolo. Questo metodo è ben consolidato sia al CIMT che al CNMC ed è stato utilizzato in precedenza per indagare diverse categorie di pazienti: neonati (studio in corso), manica gastrica, anziani e pazienti neuromuscolari.

I traccianti vengono preparati dalla farmacia ospedaliera. Tutti i traccianti vengono acquistati dai Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, USA e sono idonei all'uso umano. Gli isotopi stabili non sono radioattivi e si trovano naturalmente negli alimenti (ad esempio nel mais).

Intervento alimentare: Al tempo = 0 (120 minuti dopo l'infusione), viene somministrato un pasto liquido misto aggiustato in base al peso. Il pasto è composto da: Proteine ​​della caseina marcate intrinsecamente D5-Fenilalanina e D3-Leucina, 13C16palmitato, 13C6-Glucosio in una miscela di glucosio, proteine ​​della caseina e olio di colza disciolti in acqua con una densità energetica di 50% CHO, 35% grassi e il 15% di proteine. Il caseinato intrinsecamente marcato è stato prodotto tramite un'infusione di [D5]-fenilalanina e [D3]leucina in una mucca in lattazione per ottenere latte arricchito Foulumn, Università di Arhus, da cui la frazione caseinato è stata isolata presso Arla Foods secondo le buone pratiche di fabbricazione (GMP) e la sicurezza ha controllato un negozio in condizioni normative adeguate fino all'uso (Nørre Vium, Danimarca) seguendo una procedura precedentemente descritta.

Analisi dei campioni di sangue: i campioni verranno raccolti in siringhe contenenti 10μL EDTA/mL per prevenire la coagulazione. Il sangue viene immediatamente centrifugato a 4°C per separare il plasma dai globuli rossi. I campioni verranno congelati in provette codificate e conservati a -80°C fino al momento dell'analisi.

Campioni di sangue di routine: verranno analizzati immediatamente presso il Dipartimento di Biochimica Clinica, Rigshospitalet:

- I campioni di sangue includono: insulina, HbA1C, colesterolo, HDL, LDL, trigliceridi

Glucosio e lattato: verranno analizzati (ABL 700) immediatamente dopo il prelievo di sangue.

Campioni di sangue specifici:

• Acidi grassi liberi: verranno analizzati mediante fluorimetria.
• Ormoni (catecolamine, insulina, incretine e glucagone): verranno analizzati rispettivamente utilizzando il metodo RIA ed Elisa.
• Arricchimenti di isotopi stabili nel sangue: saranno analizzati utilizzando la cromatografia liquida-spettrometria di massa tandem (LC-MS/MS) e la spettrometria di massa del rapporto isotopico di combustione della gascromatografia (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, CA, USA e Brema, Germania).

Calcoli: La cinetica quantitativa dei metaboliti del corpo intero sarà calcolata utilizzando l'equazione di Steele per lo stato non stazionario adattata per l'analisi degli isotopi stabili in condizioni post-assorbimento.