Helkroppsmetabolisme hos barn før og etter behandling av CNS-svulst

Ved å sammenligne barn med nydiagnostisert CNS-svulst med barn ferdigbehandlet for CNS-svulst, ønsker forskerne å beskrive den metabolske banen i løpet av den cirka to år lange behandlingsperioden disse barna går gjennom. Disse resultatene vil også bli sammenlignet med resultater fra friske kontroller.

Prøvedesign og tidsramme:

En prospektiv, ikke-randomisert, tverrsnittsstudie.

Det vil være tre ulike pasientgrupper inkludert:

• Pasientgruppe A: Barn med nydiagnostisert CNS-svulst
• Pasientgruppe B: Barn ferdigbehandlet for CNS-svulst
• Friske kontroller: Barn innlagt på sykehus ved epilepsimonitoren (EMU)

Forsøket skal gjennomføres over til sammen to dager og foregår ved Barne- og ungdomsmedisinsk avdeling, Rigshospitalet og Copenhagen Neuromuscular Center, Nevrologisk avdeling, Rigshospitalet.

• Studiedag 1: Anslås å vare i ca. 2 timer.
• Studiedag 2: Anslås å vare i ca. 8 timer.

Studiedag 1: Barna vil bli DXA-skannet og fylle ut livskvalitetsspørreskjemaer og smertescore. I noen tilfeller vil studiedag 1 gjøres etter studiedag 2, avhengig av kreftbehandlingsplanen for hver pasient.

Studiedag 2: For pasientene som nylig er diagnostisert med CNS-svulst: Undersøkerne streber etter å gjennomføre studiedag 2 innen den første uken etter sykehusinnleggelse på grunn av nylig diagnostisert CNS-svulst. Etterforskerne aksepterer imidlertid at studiedag 2 gjennomføres innen den første måneden etter diagnosetidspunktet. Forsøkspersonene vil ankomme rundt kl. 08.00 til Copenhagen Neuromuscular Center (CNMC), Rigshospitalet.

Ved ankomst vil EMLA (lokalbedøvelseskrem) påføres huden til barna for å minimere ubehag som kan oppstå under iv-innsetting. To perifere venekatetre settes inn, ett i den mediale cubitale vene for infusjon av stabile isotoper, og ett i en dorsal vene i hånden for blodprøvetaking. Dersom barnet har sentralt venekateter (CVK), vil vi kun legge inn ett perifert venekateter, i medial cubitalvenen for infusjon av de stabile isotopene.

Etter 1 time og 45 minutter med basal tracerinfusjon, tas basale blodprøver (tid -15 og 0) for bestemmelse av basal steady state sporstoffanrikelser og hormonkonsentrasjoner. Ved tid = 0 gis et flytende blandet måltid. Blodprøver tas ofte i 6 timer i forhold til start av testmåltidet (ved 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 og 360 minutter) [24], [25]. Dersom barnet blir lei seg eller vi av andre grunner ønsker å stoppe tidligere enn 6 timer, vil vi bruke de allerede oppnådde resultatene.

Sporstoffene: I denne studien vil etterforskerne intravenøst ​​infundere små mengder metabolitter merket med stabile isotoper i primede kontinuerlige intravenøse infusjoner av: D8-Fenylalanin, D2-Tyrosin, 13C18-Oleatsyre, D2-Glukose, D5-Glyserol. Denne metoden er veletablert både ved CIMT og CNMC og har blitt brukt til å undersøke flere av pasientkategoriene tidligere: Nyfødte (pågående studie), gastrisk erme, eldre og nevromuskulære pasienter.

Sporstoffene tilberedes fra sykehusapoteket. Alle sporstoffer er kjøpt fra Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, USA egnet for menneskelig bruk. Stabile isotoper er ikke-radioaktive og forekommer naturlig i mat (f.eks. i mais).

Matintervensjon: Ved tid = 0 (120 minutter etter infusjon) gis et flytende blandet måltid justert etter vekt. Måltidet består av: Egenmerket D5-Fenylalanin og D3-Leucinmerket kaseinprotein, 13C16palmitat, 13C6-Glukose i en blanding av glukose, kaseinprotein og rapsolje oppløst i vann i en energitetthet på 50 % CHO, 35 % fett og 15 % protein. Egenmerket kaseinat ble produsert via en infusjon av [D5]-fenylalanin og [D3]leucin i en lakterende ku for å oppnå beriket melk Foulumn, Århus Universitet, hvorfra kaseinatfraksjonen ble isolert hos Arla Foods i henhold til Good Manufacturing Practice (GMP) og sikkerhetssjekket en butikk under passende regulatoriske forhold frem til bruk (Nørre Vium, Danmark) etter en tidligere beskrevet prosedyre.

Analyser av blodprøver: Prøvene vil bli samlet i sprøyter som inneholder 10μL EDTA/ml for å forhindre koagulasjon. Blodet sentrifugeres umiddelbart ved 4oC for å skille plasma fra røde blodceller. Prøvene vil bli frosset i kodede rør og lagret ved -80C frem til analyse.

Rutinemessige blodprøver: Analyseres umiddelbart ved Institutt for klinisk biokjemi, Rigshospitalet:

- Blodprøver inkluderer: Insulin, HbA1C, Kolesterol, HDL, LDL, triglyserider

Glukose og laktat: analyseres (ABL 700) umiddelbart etter hvert som blodet tappes.

Spesifikke blodprøver:

• Frie fettsyrer: vil bli analysert ved hjelp av fluorometri.
• Hormoner (katekolaminer, insulin, inkretiner og glukagon): vil bli analysert ved hjelp av henholdsvis RIA- og Elisa-metoder.
• Stabile isotopanrikninger i blod: vil bli analysert ved bruk av væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-MS/MS) og gasskromatografi forbrenningsisotopforhold massespektrometri (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, CA, USA og Bremen, Tyskland).

Beregninger: Helkroppsmetabolittens kvantitative kinetikk vil bli beregnet ved å bruke Steeles ligning for ikke-steady state tilpasset analyse av stabile isotoper under de post-absorptive forhold.