Helkropsmetabolisme hos børn før og efter behandling af CNS-tumor

Ved at sammenligne børn med nydiagnosticeret CNS-tumor med børn, der er færdigbehandlet for CNS-tumor, ønsker forskerne at beskrive den metaboliske vej i løbet af den cirka to års behandlingsperiode, som disse børn gennemgår. Disse resultater vil også blive sammenlignet med resultater fra raske kontroller.

Prøvedesign og tidsramme:

En prospektiv, ikke-randomiseret, tværsnitsundersøgelse.

Der vil være tre forskellige patientgrupper inkluderet:

• Patientgruppe A: Børn med nydiagnosticeret CNS-tumor
• Patientgruppe B: Børn færdigbehandlet for CNS-tumor
• Sunde kontroller: Børn indlagt på hospitalet på Epilepsimonitoren (EMU)

Forsøget vil blive gennemført over i alt to dage og foregår på Pædiatrisk og Ungdomsmedicinsk Afdeling, Rigshospitalet og Københavns Neuromuskulært Center, Neurologisk Afdeling, Rigshospitalet.

• Studiedag 1: Anslås til at vare cirka 2 timer.
• Studiedag 2: Anslås til at vare cirka 8 timer.

Studiedag 1: Børnene vil blive DXA-scannet og udfylde livskvalitetsspørgeskemaer og smertescore. I nogle tilfælde vil studiedag 1 blive gennemført efter studiedag 2, afhængig af kræftbehandlingsplanen for den enkelte patient.

Undersøgelsesdag 2: For de patienter, der er nyligt diagnosticeret med CNS-tumor: Undersøgerne stræber efter at gennemføre undersøgelsesdag 2 inden for den første uge efter hospitalsindlæggelse på grund af nydiagnosticeret CNS-tumor. Investigatorerne accepterer dog, at undersøgelsesdag 2 gennemføres inden for den første måned efter diagnosetidspunktet. Forsøgspersonerne ankommer omkring kl. 08.00 til Copenhagen Neuromuscular Center (CNMC), Rigshospitalet.

Ved ankomsten påføres EMLA (lokalbedøvelsescreme) på børnenes hud for at minimere det ubehag, der kan opstå under iv-indsættelse. To perifere venekatetre indsættes, et i den mediale cubitale vene til infusion af stabile isotoper og et i en dorsal vene i hånden til blodprøvetagning. Hvis barnet har et centralt venekateter (CVK), vil vi kun indsætte ét perifert venekateter, i den mediale cubitale vene til infusion af de stabile isotoper.

Efter 1 time og 45 minutters basal sporstofinfusion udtages basale blodprøver (tid -15 og 0) til bestemmelse af basal steady state sporstofberigelse og hormonkoncentrationer. Ved tidspunktet = 0 leveres et flydende blandet måltid. Blodprøver udtages hyppigt i 6 timer i forhold til start af testmåltidet (ved 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 og 360 minutter)[24], [25]. Hvis barnet bliver ked af det, eller vi af andre årsager ønsker at stoppe tidligere end 6 timer, vil vi bruge de allerede opnåede resultater.

Sporstofferne: I denne undersøgelse vil efterforskerne intravenøst ​​infundere små mængder af metabolitter mærket med stabile isotoper i primede kontinuerlige intravenøse infusioner af: D8-Phenylalanin, D2-Tyrosin, 13C18-Oleatsyre, D2-Glucose, D5-Glycerol. Denne metode er veletableret på både CIMT og CNMC og er blevet brugt til at undersøge flere af patientkategorier før: Nyfødte (igangværende undersøgelse), gastrisk sleeve, ældre og neuromuskulære patienter.

Sporstofferne fremstilles fra sygehusapoteket. Alle sporstoffer er købt fra Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, USA egnet til menneskelig brug. Stabile isotoper er ikke-radioaktive og forekommer naturligt i fødevarer (f.eks. i majs).

Fødevareintervention: Ved tidspunkt = 0 (120 minutter efter infusion) gives et flydende blandet måltid justeret efter vægt. Måltidet består af: Egenmærket D5-Phenylalanin og D3-Leucin mærket kaseinprotein, 13C16palmitat, 13C6-Glucose i en blanding af glucose, kaseinprotein og rapsolie opløst i vand i en energitæthed på 50% CHO, 35% fedt og 15% protein. Egenmærket kaseinat blev produceret via en infusion af [D5]-phenylalanin og [D3]leucin i en lakterende ko for at opnå beriget mælk Foulumn, Aarhus Universitet, hvorfra kaseinatfraktionen blev isoleret hos Arla Foods i henhold til Good Manufacturing Practice (GMP) og sikkerhedstjekket en butik under passende lovmæssige forhold indtil brug (Nørre Vium, Danmark) efter en tidligere beskrevet procedure.

Analyser af blodprøver: Prøverne vil blive opsamlet i sprøjter indeholdende 10μL EDTA/ml for at forhindre koagulering. Blodet centrifugeres straks ved 4oC for at adskille plasma fra røde blodlegemer. Prøverne vil blive frosset i kodede rør og opbevaret ved -80C indtil analyse.

Rutineblodprøver: Vil straks blive analyseret på Klinisk Biokemisk Afdeling, Rigshospitalet:

- Blodprøver inkluderer: Insulin, HbA1C, Kolesterol, HDL, LDL, triglycerider

Glukose og laktat: vil blive analyseret (ABL 700) med det samme, efterhånden som blodet udtages.

Specifikke blodprøver:

• Frie fedtsyrer: vil blive analyseret ved hjælp af fluorometri.
• Hormoner (katekolaminer, insulin, inkretiner og glukagon): vil blive analyseret ved hjælp af henholdsvis RIA- og Elisa-metoder.
• Stabile isotopberigelser i blod: vil blive analyseret ved hjælp af væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-MS/MS) og gaskromatografi forbrændingsisotopforhold massespektrometri (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, CA, USA og Bremen, Tyskland).

Beregninger: Kvantitativ kinetik for hele kroppens metabolit vil blive beregnet ved hjælp af Steeles ligning for ikke-steady state tilpasset til analyse af stabile isotoper under de post-absorptive forhold.