Metabolismo de todo el cuerpo en niños antes y después del tratamiento de un tumor del SNC

Al comparar niños con tumor del SNC recién diagnosticado con niños que terminaron de recibir tratamiento por tumor del SNC, los investigadores desean describir la ruta metabólica durante los aproximadamente dos años de tratamiento por los que pasan estos niños. Estos resultados también se compararán con los resultados de controles sanos.

Diseño del ensayo y plazo:

Estudio transversal, prospectivo, no aleatorizado.

Se incluirán tres grupos de pacientes diferentes:

• Grupo de pacientes A: niños con tumor del SNC recién diagnosticado
• Grupo de pacientes B: niños que terminaron el tratamiento por tumor del SNC
• Controles saludables: Niños ingresados ​​en el hospital en la Unidad de Monitoreo de Epilepsia (UME)

El ensayo se llevará a cabo durante un total de dos días y se llevará a cabo en el Departamento de Pediatría y Medicina del Adolescente de Rigshospitalet y en el Centro Neuromuscular de Copenhague, Departamento de Neurología de Rigshospitalet.

• Día de estudio 1: Se estima que durará aproximadamente 2 horas.
• Día de estudio 2: Se estima que tendrá una duración aproximada de 8 horas.

Día de estudio 1: Los niños serán escaneados con DXA y completarán cuestionarios de calidad de vida y puntuaciones de dolor. En algunos casos, el día 1 del estudio se realizará después del día 2 del estudio, según el plan de tratamiento del cáncer de cada paciente.

Día de estudio 2: para los pacientes con diagnóstico reciente de tumor del SNC: los investigadores se esfuerzan por realizar el día 2 del estudio dentro de la primera semana de ingreso hospitalario debido a un tumor del SNC recién diagnosticado. Sin embargo, los investigadores aceptan que el día 2 del estudio se lleve a cabo dentro del primer mes después del momento del diagnóstico. Los sujetos llegarán alrededor de las 08.00 horas al Centro Neuromuscular de Copenhague (CNMC), Rigshospitalet.

A su llegada, se aplicará EMLA (crema anestésica local) sobre la piel de los niños para minimizar cualquier molestia que pueda ocurrir durante la inserción intravenosa. Se insertan dos catéteres venosos periféricos, uno en la vena cubital medial para la infusión de isótopos estables y otro en la vena dorsal de la mano para tomar muestras de sangre. Si el niño tiene un catéter venoso central (CVK), solo insertaremos un catéter venoso periférico, en la vena cubital medial para la infusión de los isótopos estables.

Después de 1 hora y 45 minutos de infusión de trazador basal, se extraen muestras de sangre basal (tiempo -15 y 0) para la determinación de los enriquecimientos basales del trazador en estado estacionario y las concentraciones hormonales. En el momento = 0, se proporciona una comida mixta líquida. Se extraen muestras de sangre con frecuencia durante 6 horas en relación con el inicio de la comida de prueba (a los 0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 90, 120, 150, 180, 240, 300 y 360 minutos)[24]. [25]. Si el niño se molesta o por otros motivos queremos parar antes de las 6 horas, utilizaremos los resultados ya obtenidos.

Los trazadores: en este estudio, los investigadores infundirán por vía intravenosa pequeñas cantidades de metabolitos marcados con isótopos estables en infusiones intravenosas continuas cebadas de: D8-fenilalanina, D2-tirosina, ácido oleato 13C18, D2-glucosa, D5-glicerol. Este método está bien establecido tanto en CIMT como en CNMC y se ha utilizado anteriormente en la investigación de varias categorías de pacientes: recién nacidos (estudio en curso), manga gástrica, pacientes ancianos y neuromusculares.

Los trazadores se preparan en la farmacia del hospital. Todos los trazadores se adquieren en Cambridge Isotope Laboratories, Andover, MA, EE. UU., y son aptos para uso humano. Los isótopos estables no son radiactivos y se encuentran naturalmente en los alimentos (por ejemplo, en el maíz).

Intervención alimentaria: En el tiempo = 0 (120 minutos después de la infusión), se administra una comida mixta líquida ajustada por peso. La comida consta de: proteína de caseína marcada con D5-fenilalanina y D3-leucina intrínsecamente marcada, palmitato de 13C16, glucosa 13C6 en una mezcla de glucosa, proteína de caseína y aceite de semilla de colza disueltos en agua en una densidad energética de 50% CHO, 35% grasa. y 15% de proteína. El caseinato intrínsecamente marcado se produjo mediante una infusión de [D5]-fenilalanina y [D3]leucina en una vaca lactante para obtener leche enriquecida Foulumn, Universidad de Arhus, de la cual se aisló la fracción de caseinato en Arla Foods de acuerdo con las Buenas Prácticas de Fabricación (GMP). y la seguridad se verificó en un almacén bajo condiciones regulatorias apropiadas hasta su uso (Nørre Vium, Dinamarca) siguiendo un procedimiento descrito previamente.

Análisis de muestras de sangre: Las muestras se recogerán en jeringas que contienen 10 μL de EDTA/mL para evitar la coagulación. La sangre se centrifuga inmediatamente a 4oC para separar el plasma de los glóbulos rojos. Las muestras se congelarán en tubos codificados y se almacenarán a -80 ° C hasta el análisis.

Muestras de sangre de rutina: Se analizarán inmediatamente en el Departamento de Bioquímica Clínica del Rigshospitalet:

- Las muestras de sangre incluyen: insulina, HbA1C, colesterol, HDL, LDL, triglicéridos.

Glucosa y lactato: se analizarán (ABL 700) inmediatamente cuando se extraiga la sangre.

Muestras de sangre específicas:

• Ácidos grasos libres: se analizarán mediante fluorometría.
• Hormonas (catecolaminas, insulina, incretinas y glucagón): se analizarán mediante los métodos RIA y Elisa respectivamente.
• Enriquecimientos de isótopos estables en sangre: se analizarán mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem (LC-MS/MS) y espectrometría de masas con relación de isótopos de combustión por cromatografía de gases (GC-C-IRMS) (Thermo Scientific, Palo Alto, CA, EE. UU. y Bremen, Alemania).

Cálculos: La cinética cuantitativa de los metabolitos de todo el cuerpo se calculará utilizando la ecuación de Steele para el estado no estacionario adaptada para el análisis de isótopos estables en condiciones post-absortivas.