Možné působení resveratrolu při zlepšování výsledků IVF/ICSI u párů s nevysvětlitelnou neplodností (RECOS)

Na základě posledních odhadů je celosvětová celoživotní prevalence neplodnosti 17,5 %, což znamená, že přibližně každý šestý člověk se v určité fázi svého života setkal s neplodností.

Navzdory zlepšení konvenčních diagnostických vyšetření stále ještě dnes zůstává asi 25 % příčin párové neplodnosti nevysvětlených.

Ve skutečnosti několik klíčových momentů lidského reprodukčního procesu nelze studovat, a proto zůstávají specifické reprodukční změny nediagnostikovány. Jen pomyslím na proces ovariální folikulogeneze, vývoj oocytů, embryonální implantaci, to vše jsou skutečné „biologické záhady“.

Mezi těmito různými biologickými aspekty je známo, že kvalita oocytů je hlavním prediktorem klinického těhotenství po IVF/ICSI. Proces zrání oocytů totiž ovlivňuje vývoj embrya a následně životaschopnost embrya. I když mechanismy, které určují kvalitní oocyt, nejsou známy, přesto se předpokládá, že hlavní roli ve vývoji oocytu hrají procesy závislé na energii. Tyto procesy jsou zprostředkovány mitochondriemi, jejichž koncentrace v oocytech je nejvyšší mezi ostatními buňkami lidského těla. Nukleární a cytoplazmatické zrání oocytů je přísně spojeno s růstem granulózních buněk (GC). Tyto buňky obklopují oocyt a vytvářejí funkční obousměrný přeslech se samotným oocytem prostřednictvím mezerových spojů a parakrinních faktorů. Během folikulogeneze GC zvyšují spotřebu glukózy a metabolizují glukózu na pyruvát, který přechází do oocytu. To vše určuje zvýšení dodávky energie do samotného oocytu, což se projevuje zvýšením produkce ATP, což umožňuje buňce připravit se na oplodnění a první fáze embryonálního vývoje, který, jak známo, je zcela závislý na oocytech.

Resveratrol se zdá být schopen zapadnout do této oblasti buněčného fungování. Je to přírodní polyfenol, rozšířený v potravinách, rostlinách, nápojích a zdá se, že indukuje proliferaci GC prostřednictvím antiapoptotického účinku v závislosti na SIRT1. Kromě toho v GC resveratrol snižuje oxidační stres, zvyšuje biogenezi mitochondrií a intracelulární hladiny ATP, což určuje vysokou energetickou dostupnost, která podporuje růst oocytů. Zdá se, že resveratrol snižuje u potkaních granulózních buněk expresi vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF), který se podílí na angiogenezi a vaskulární permeabilitě, a potenciálně vykazuje ochranný účinek na riziko ovariálního hyperstimulačního syndromu (OHSS), život ohrožujícího stavu spojeného s ovariálním onemocněním. stimulace, jejíž VEGF je hlavním mediátorem.

Nedávná klinická randomizovaná studie ukázala, že předléčba resveratrolem po dobu 3 měsíců u žen postižených párovou neplodností a podstupujících ICSI byla spojena s vyšším počtem získaných a zralých oocytů, vyšší mírou oplodnění a vyšším počtem blastocyst na pacienta a vyšší počet nadbytečných kryokonzervovaných embryí na pacienta, i když nebyl pozorován žádný významný účinek na klinická těhotenství a živou porodnost.

Na základě tohoto posledního důkazu a vzhledem k potenciálním příznivým účinkům resveratrolu na folikulogenezi a vývoj oocytů navrhli výzkumníci randomizovanou, kontrolovanou, dvojitě zaslepenou, jednocentrickou studii, jejímž cílem bude srovnání biologických a klinických výsledků resveratrolu. doplněk u žen podstupujících cykly IVF/ICSI pro nevysvětlitelnou neplodnost.

Pokud je vědcům známo, nebyla publikována žádná studie o potenciálním účinku resveratrolu na výsledky IVF/ICSI s ohledem na páry s touto diagnózou neplodnosti, která může být přirozeným cílem této integrativní léčby, protože proces folikulogeneze a zrání oocytů nelze běžně vyšetřován. Změna těchto biologických mechanismů by mohla být nerozpoznanou příčinou části nevysvětlitelné neplodnosti a léčba resveratrolem by mohla u pacientů zařazených do studie vést k významnému klinickému zlepšení.

Podrobněji, hlavním cílem této randomizované, placebem kontrolované, dvojitě zaslepené, jednocentrické studie bude vyhodnocení možného účinku resveratrolu při určování lepšího vývoje folikulů u pacientek s nevysvětlitelnou neplodností podstupujících kontrolovanou stimulaci vaječníků (COS ) pro IVF/ICSI.

Neplodné pacientky s normální ovariální rezervou budou léčeny podle klinické praxe a rozdíl mezi očekávanými (přes AFC) a získanými oocyty bude posouzen ve vztahu k použití resveratrolu.

DESIGN A METODIKA:

Budou zapsány páry postižené nevysvětlitelnou neplodností. Definice nevysvětlitelné neplodnosti je následující: neplodnost u párů se zjevně normální funkcí vaječníků, vejcovodů, dělohy, děložního čípku a pánve, věk ≤ 40 let as přiměřenou koitální frekvencí; a zjevně normální funkce varlat, anatomie genito-močového systému a normální ejakulát.

Všichni pacienti budou randomizováni pro žádnou léčbu (placebo skupina - pouze kyselina listová) a pro léčbu resveratrolem (studijní skupina) v poměru 1:1. Randomizační seznam vygenerovaný softwarem bude řídit sestra, která není přímo zapojena do studie, a bude pacientům podávat léky po celou dobu léčby. Ani lékaři/embryologové, ani pacienti nebudou informováni o obsahu krabiček léků (kyselina listová nebo resveratrol) (Dvojité slepé provedení).

Délka léčby bude minimálně 65 dní před zahájením stimulace (od stadia preantrálních folikulů) a do dne odběru oocytů.

Všechna stanovení AFC budou provedena stejnými dvěma lékaři od 2. do 6. dne cyklu, v jednom z posledních tří měsíců před zahájením stimulace. Zaznamenány budou všechny folikuly v rozmezí od 2 do 10 mm (s rozlišením mezi folikuly v rozmezí 2 až 5 mm a folikuly v rozmezí 6 až 10 mm).

COS bude prováděno denními injekcemi rFSH (Gonal F; Merck Serono, Itálie) a bude zahájeno 2./3. den cyklu a bude pokračovat až do dne indukce zrání oocytů. Hypofyzární suprese bude dosaženo podáváním antagonisty GnRH ganirelix (0,25 mg denně, Fyremadel, Ferring S.p.A.), které bude zahájeno od 6. dne ovariální stimulace do dne indukce zrání oocytů.

Vývoj folikulů bude monitorován po 5 dnech léčby a poté alespoň každé 2 dny. Monitorování se bude skládat z: a) transvaginálního ultrazvukového skenování pro hodnocení počtu a maximálního průměru ovariálních folikulů a tloušťky endometria; b) dávkování 17β-estradiolu, LH a progesteronu pouze v den indukce zrání oocytů. Transvaginální ultrazvuk pro monitorování provedou titíž dva lékaři.

Vysoce purifikovaný močový hCG (Gonasi HP, IBSA Farmaceutici, Itálie) 10 000 IU, subkutánně nebo intramuskulárně, bude použit k indukci konečného zrání oocytů, když budou pozorovány dva nebo více folikulů o průměru ≥16 mm a budou podávány 35,5-36 hodin před plánovaným odběrem oocytů. V případě rizika OHSS bude konečné zrání oocytů dosaženo použitím agonisty GnRH (Triptorelin, Decapeptyl 0,1 mg, Ipsen S.p.A., Itálie) 0,3 mg subkutánně a odběr oocytů bude plánován stejnými způsoby, jak je popsáno výše; v tomto případě budou všechna získaná embrya kryokonzervována.

Nebyl prokázán žádný rozdíl v počtu získaných oocytů ve srovnání těchto dvou různých modalit spuštění konečného zrání oocytů (Haahr et al., 2017).

Spuštění zrání oocytů nebude dosaženo v případě neschopnosti dosáhnout alespoň 2 folikulů ≥16 mm.

Odběr oocytů budou provádět dva lékaři s nejvyšší odborností.

Čerstvý přenos embryí bude proveden druhý, třetí nebo pátý den po odběru oocytů.

V případě rizika OHSS a/nebo v případě vzestupu progesteronu v den podání hCG (≥1,5 ng/ml) budou všechna embrya kryokonzervována. Páry se všemi zmrazenými embryi budou brány v úvahu pro analýzu koncových bodů.

UKÁZKOVÝ VÝPOČET VELIKOSTI:

Aby se dosáhlo cílů tohoto protokolu studie, byl proveden a priori výpočet velikosti vzorku, aby se určil minimální požadovaný počet účastníků. Údaje dostupné v literatuře uvádějí v průměru rozdíl 1,5 v č.p. preovulačních folikulů (≥16 mm) mezi skupinou léčenou resveratrolem a kontrolní skupinou, s průměrným zvýšením o 15 % ve prospěch studijní skupiny. Pokud tedy vezmeme v úvahu konzervativní rozdíl 10 %, což je ekvivalentní velké velikosti účinku d=0,80, sílu (1-β) 95 %, alfa 0,05, dvoustranný t-test a poměr 1:1 mezi dvěma skupinami by bylo zapotřebí celkem 90 subjektů (45 pro každou skupinu) k ověření významného rozdílu v primárním výsledku mezi těmito dvěma skupinami.