Resveratrolin mahdollinen vaikutus IVF/ICSI:n tulosten parantamiseen pariskunnilla, joilla on selittämätön hedelmättömyys (RECOS)

Viimeisimpien arvioiden mukaan maailmanlaajuinen hedelmättömyyden esiintyvyys on 17,5 %, mikä tarkoittaa, että noin joka kuudes ihminen on kokenut lapsettomuuden jossain elämänsä vaiheessa.

Perinteisten diagnostisten tutkimusten parantumisesta huolimatta noin 25 % pariskunnan hedelmättömyyden syistä on edelleen selittämättömiä.

Itse asiassa useita ihmisen lisääntymisprosessin tärkeitä hetkiä ei voida tutkia, ja siksi tietyt lisääntymismuutokset jäävät diagnosoimatta. Ajatellaanpa vain munasarjojen follikulogeneesiä, munasolujen kehitystä, alkion implantaatiota, kaikkia todellisia "biologisia mysteereitä".

Näiden erilaisten biologisten näkökohtien joukossa tiedetään, että munasolujen laatu on tärkein kliinisen raskauden ennustaja IVF/ICSI:n jälkeen. Itse asiassa munasolujen kypsymisprosessi vaikuttaa alkion kehitykseen ja siten alkion elinkelpoisuuteen. Vaikka hyvänlaatuisen munasolun määrääviä mekanismeja ei tunneta, energiariippuvaisilla prosesseilla oletetaan kuitenkin olevan tärkeä rooli munasolun kehityksessä. Näitä prosesseja välittävät mitokondriot, joiden pitoisuus munasoluissa on korkein ihmiskehon muista soluista. Munasolujen tuma- ja sytoplasminen kypsyminen liittyy tiukasti granulosasolujen (GC) kasvuun. Nämä solut ympäröivät munasolua ja muodostavat toiminnallisen kaksisuuntaisen ristipuhelun itse munasolun kanssa aukkoliitosten ja parakriinisten tekijöiden kautta. Follikulogeneesin aikana GC:t lisäävät glukoosin kulutusta ja metaboloivat glukoosia pyruvaaiksi, joka siirtyy munasoluun. Kaikki tämä määrää itse munasolun energiansaannin lisääntymisen, mikä näkyy ATP-tuotannon lisääntymisenä, mikä mahdollistaa jälkimmäisen solun valmistautumisen hedelmöittymiseen ja alkionkehityksen ensimmäisiin vaiheisiin, mikä, kuten tiedetään, on täysin munasolusta riippuvainen.

Resveratroli näyttää pystyvän sopeutumaan tälle solutoiminnan alueelle. Se on luonnollinen polyfenoli, joka on laajalle levinnyt elintarvikkeissa, kasveissa, juomissa ja näyttää indusoivan GC:iden lisääntymistä anti-apoptoottisen vaikutuksen kautta SIRT1-riippuvaisella tavalla. Lisäksi GC:ssä resveratroli vähentää oksidatiivista stressiä, lisää mitokondrioiden biogeneesiä ja solunsisäistä ATP-tasoa, mikä määrittää korkean energian saatavuuden, mikä edistää munasolujen kasvua. Resveratroli näyttää vähentävän rotan granulosasoluissa verisuonten endoteelikasvutekijän (VEGF) ilmentymistä, mikä on osallisena angiogeneesissä ja verisuonten läpäisevyydessä, mikä saattaa osoittaa suojaavan munasarjojen hyperstimulaatio-oireyhtymän (OHSS), munasarjoihin liittyvän hengenvaarallisen tilan, riskiä. stimulaatio, jonka VEGF on tärkein välittäjä.

Äskettäinen kliininen satunnaistettu tutkimus osoitti, että 3 kuukauden esihoito resveratrolilla naisilla, jotka kärsivät pariskunnan hedelmättömyydestä ja joille tehtiin ICSI, liittyi lisääntyneeseen talteenotettujen ja kypsien munasolujen määrään, korkeampaan hedelmöitysasteeseen ja suurempaan määrään blastokystia per potilasta ja enemmän kylmäsäilytettyjen alkioiden ylijäämää potilasta kohden, vaikka kliinisissä raskauksissa ja elävänä syntyvyyden määrässä ei havaittu merkittävää vaikutusta.

Viimeksi mainittujen todisteiden perusteella ja ottaen huomioon resveratrolin mahdolliset hyödylliset vaikutukset follikulogeneesissä ja munasolujen kehityksessä, tutkijat suunnittelivat satunnaistetun, kontrolloidun, kaksoissokkoutetun, yksikeskustutkimuksen, jonka tavoitteena on vertailla resveratrolin biologisia ja kliinisiä tuloksia. lisäravintolisä naisille, jotka käyvät IVF/ICSI-jaksoissa selittämättömän hedelmättömyyden vuoksi.

Tutkijoiden tietojen mukaan resveratrolin mahdollisesta vaikutuksesta IVF/ICSI-tuloksiin ei ole julkaistu tutkimusta, kun otetaan huomioon pariskunnat, joilla on tämä hedelmättömyysdiagnoosi, mikä voi olla tämän integroivan hoidon luonnollinen kohde, koska follikulogeneesi ja munasolujen kypsymistä ei voida estää. rutiininomaisesti tutkittu. Muutos näissä biologisissa mekanismeissa saattaa olla tuntematon syy osaan selittämättömästä hedelmättömyydestä, ja resveratrolihoito voi johtaa merkittävään kliiniseen paranemiseen tutkimukseen osallistuneilla potilailla.

Tarkemmin sanottuna tämän satunnaistetun, lumekontrolloidun, kaksoissokkoutetun, yhden keskuksen tutkimuksen päätavoitteena on arvioida resveratrolin mahdollista vaikutusta paremman munarakkuloiden kehityksen määrittämisessä potilailla, joilla on selittämätön hedelmättömyys ja jotka saavat kontrolloitua munasarjastimulaatiota (COS). ) IVF/ICSI:lle.

Hedelmättömät naispotilaat, joilla on normaali munasarjavarasto, hoidetaan kliinisen käytännön mukaisesti ja odotettujen (AFC:n kautta) ja talteen otettujen munasolujen välinen ero arvioidaan suhteessa resveratrolin käyttöön.

SUUNNITTELU JA MENETELMÄT:

Parit, jotka kärsivät selittämättömästä hedelmättömyydestä, otetaan mukaan. Selittämättömän hedelmättömyyden määritelmä on seuraava: lapsettomuus pariskunnilla, joilla on näennäisesti normaali munasarjojen toiminta, munanjohtimet, kohtu, kohdunkaula ja lantio, ikä ≤ 40 vuotta ja joilla on riittävä yhdystiheys; ja ilmeisesti normaali kivesten toiminta, sukuelinten ja virtsan anatomia ja normaali siemensyöksy.

Kaikki potilaat satunnaistetaan ilman hoitoa (plaseboryhmä – vain foolihappo) ja resveratrolihoitoon (tutkimusryhmä) suhteessa 1:1. Ohjelmiston tuottamaa satunnaistuslistaa hoitaa sairaanhoitaja, joka ei ole suoraan mukana tutkimuksessa, ja se antaa potilaille lääkkeet koko hoidon ajan. Lääkärit/embryologit eivät myöskään potilaat ole tietoisia lääkepakkausten (foolihappo tai resveratroli) sisällöstä (double blind design).

Hoidon kesto on vähintään 65 päivää ennen stimulaation aloittamista (antraalisten munarakkuloiden vaiheesta) ja munasolujen poimimispäivään saakka.

Samat kaksi lääkäriä tekevät kaikki AFC-määritykset syklin 2.–6. päivänä, jonain viimeisen kolmen kuukauden aikana ennen stimulaation aloittamista. Kaikki follikkelit, joiden halkaisija on 2-10 mm, tallennetaan (erottelemalla 2-5 mm:n ja 6-10 mm:n follikkelit).

COS suoritetaan päivittäisillä rFSH-injektioilla (Gonal F; Merck Serono, Italia) ja se aloitetaan syklin 2./3. päivänä ja sitä jatketaan munasolujen kypsymisen induktiopäivään asti. Aivolisäkkeen suppressio saadaan aikaan antamalla GnRH-antagonisti ganireliksia (0,25 mg päivässä, Fyremadel, Ferring S.p.A.), joka aloitetaan munasarjojen stimulaation kuudennesta päivästä munasolujen kypsymisen induktiopäivään asti.

Follikkelien kehitystä seurataan 5 päivän hoidon jälkeen ja sen jälkeen vähintään 2 päivän välein. Seuranta koostuu: a) transvaginaalisesta ultraäänitutkimuksesta munasarjojen follikkelien lukumäärän ja enimmäishalkaisijan sekä endometriumin paksuuden arvioimiseksi; b) 17β-estradiolin, LH:n ja progesteronin annostus vain munasolujen kypsymisen induktiopäivänä. Transvaginaalisen ultraäänitutkimuksen suorittavat samat kaksi lääkäriä.

Erittäin puhdistettua virtsan hCG:tä (Gonasi HP, IBSA Farmaceutici, Italia) 10 000 IU, ihonalaisesti tai lihakseen, käytetään indusoimaan lopullinen munasolun kypsyminen, kun havaitaan kaksi tai useampia follikkelia, joiden halkaisija on ≥ 16 mm, ja sitä annetaan 35,5-36 h. ennen suunniteltua munasolun hakua. OHSS-riskin tapauksessa lopullinen munasolun kypsyminen saadaan käyttämällä GnRH-agonistia (Triptorelin, Decapeptyl 0,1 mg, Ipsen S.p.A., Italia) 0,3 mg ihonalaisesti, ja munasolun talteenotto suunnitellaan samoilla menetelmillä, jotka on kuvattu edellä; tässä tapauksessa kaikki saadut alkiot kylmäsäilytetään.

Haettujen oosyyttien määrässä ei havaittu eroa vertaamalla näitä kahta erilaista tapaa laukaista lopullinen munasolun kypsyminen (Haahr et al., 2017).

Munasolujen kypsymisen laukaisua ei saavuteta, jos ei kyetä saavuttamaan vähintään kahta ≥16 mm:n follikkelia.

Oosyyttipoiminnan suorittavat kaksi korkeimman asiantuntemuksen omaavaa lääkäriä.

Tuoreet alkiot siirretään toisena, kolmantena tai viidentenä päivänä munasolujen talteenoton jälkeen.

OHSS-riskin ja/tai progesteronin nousun tapauksessa hCG:n antopäivänä (≥1,5 ng/ml) kaikki alkiot kylmäsäilytetään. Parit, joilla on kaikki jäädytetyt alkiot, otetaan huomioon päätepisteiden analysoinnissa.

NÄYTTEKOON LASKENTA:

Tämän tutkimusprotokollan tavoitteiden saavuttamiseksi suoritettiin a priori otoskoon laskelma tarvittavan osallistujien vähimmäismäärän määrittämiseksi. Kirjallisuudessa saatavilla olevat tiedot osoittavat keskimäärin 1,5 eron no. ovulaatiota edeltävien follikkelien (≥ 16 mm) määrä resveratrolia hoidetun ryhmän ja kontrolliryhmän välillä, keskimääräinen lisäys 15 % tutkimusryhmän hyväksi. Näin ollen, kun otetaan huomioon konservatiivinen 10 %:n ero, joka vastaa suurta tehon kokoa d=0,80, teho (1-β) 95 %, alfa 0,05, kahden pyrstön t-testi ja suhde 1:1 kahden ryhmän välillä tarvittaisiin yhteensä 90 koehenkilöä (45 kutakin ryhmää kohden), jotta voidaan varmistaa merkittävä ero primäärituloksissa näiden kahden ryhmän välillä.