Mogelijke actie van resveratrol bij het verbeteren van de resultaten van IVF/ICSI bij paren met onverklaarde onvruchtbaarheid (RECOS)

Op basis van de laatste schattingen bedraagt ​​de mondiale prevalentie van onvruchtbaarheid 17,5%, wat betekent dat ongeveer één op de zes mensen op een bepaald moment in hun leven onvruchtbaarheid heeft ervaren.

Ondanks een verbetering in conventioneel diagnostisch onderzoek blijft nog steeds ongeveer 25% van de oorzaken van onvruchtbaarheid bij paren onverklaard.

In feite kunnen verschillende cruciale momenten van het menselijke voortplantingsproces niet worden bestudeerd en daarom blijven specifieke reproductieve veranderingen niet gediagnosticeerd. Denk maar aan het proces van folliculogenese in de eierstokken, de ontwikkeling van eicellen, de implantatie van embryo's, allemaal echte "biologische mysteries".

Van deze verschillende biologische aspecten is het bekend dat de kwaliteit van de eicellen de belangrijkste voorspeller is van een klinische zwangerschap na IVF/ICSI. Het rijpingsproces van de eicellen beïnvloedt inderdaad de embryo-ontwikkeling en bijgevolg de levensvatbaarheid van het embryo. Hoewel de mechanismen die een goede kwaliteit eicel bepalen niet bekend zijn, wordt er toch van uitgegaan dat energie-afhankelijke processen een grote rol spelen in de ontwikkeling van de eicel. Deze processen worden gemedieerd door mitochondriën, waarvan de concentratie in eicellen de hoogste is van de andere cellen van het menselijk lichaam. De nucleaire en cytoplasmatische rijping van de eicel is strikt verbonden met de groei van granulosacellen (GC's). Deze cellen omringen de eicel en zorgen voor een functionele bidirectionele overspraak met de eicel zelf via gap-junctions en paracriene factoren. Tijdens folliculogenese verhogen GC's de consumptie van glucose en metaboliseren glucose tot pyruvaat dat naar de eicel gaat. Dit alles bepaalt een toename van de energietoevoer naar de eicel zelf, wat blijkt uit de toename van de ATP-productie, waardoor deze laatste cel zich kan voorbereiden op de bevruchting en de eerste stadia van de embryonale ontwikkeling die, zoals bekend, volledig afhankelijk is van de eicel.

Resveratrol lijkt in dit gebied van cellulair functioneren te kunnen passen. Het is een natuurlijk polyfenol, wijdverspreid in voedingsmiddelen, planten en dranken, en het lijkt de proliferatie van GC’s te induceren via een anti-apoptotisch effect op een SIRT1-afhankelijke manier. Bovendien vermindert resveratrol in GC's de oxidatieve stress, verhoogt het de biogenese van de mitochondriën en de intracellulaire ATP-niveaus, waardoor een hoge energiebeschikbaarheid wordt bepaald die de groei van de eicellen bevordert. Resveratrol lijkt in granulosacellen van ratten de expressie van vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), betrokken bij angiogenese en vasculaire permeabiliteit, te verminderen, wat mogelijk een beschermend effect vertoont op het risico op ovarieel hyperstimulatiesyndroom (OHSS), een levensbedreigende aandoening geassocieerd met ovariële hyperstimulatie. stimulatie, waarvan de VEGF de belangrijkste mediator is.

Uit een recent klinisch gerandomiseerd onderzoek is gebleken dat een voorbehandeling van drie maanden met resveratrol bij vrouwen die getroffen zijn door onvruchtbaarheid van het paar en die ICSI ondergaan, geassocieerd is met een hoger aantal teruggevonden en rijpe eicellen, een hoger bevruchtingspercentage, een hoger aantal blastocysten per dag. patiënt en een groter aantal overtollige gecryopreserveerde embryo's per patiënt, zelfs als er geen significant effect werd waargenomen op de klinische zwangerschappen en het aantal levendgeborenen.

Gebaseerd op dit laatste bewijsmateriaal en gegeven de potentiële gunstige effecten van resveratrol op de folliculogenese en de ontwikkeling van eicellen, hebben de onderzoekers een gerandomiseerde, gecontroleerde, dubbelblinde, single-center studie ontworpen, waarvan het doel de vergelijking zal zijn van de biologische en klinische uitkomsten van resveratrol. supplement bij vrouwen die een IVF/ICSI-cyclus ondergaan vanwege onverklaarde onvruchtbaarheid.

Voor zover de onderzoekers weten, is er geen onderzoek gepubliceerd over het potentiële effect van resveratrol op IVF/ICSI-resultaten bij paren met deze diagnose van onvruchtbaarheid, wat het natuurlijke doelwit kan zijn van deze integratieve behandeling omdat het proces van folliculogenese en eicelrijping niet kan worden vermeden. routinematig onderzocht. Een wijziging van deze biologische mechanismen zou de niet-herkende oorzaak kunnen zijn van een deel van de onverklaarde onvruchtbaarheid, en behandeling met resveratrol zou kunnen resulteren in een significante klinische verbetering voor de patiënten die aan het onderzoek deelnamen.

Meer gedetailleerd zal het hoofddoel van deze gerandomiseerde, placebogecontroleerde, dubbelblinde, single-center studie de evaluatie zijn van het mogelijke effect van resveratrol bij het bepalen van een betere follikelontwikkeling bij patiënten met onverklaarde onvruchtbaarheid die gecontroleerde ovariële stimulatie (COS) ondergaan. ) voor IVF/ICSI.

Onvruchtbare vrouwelijke patiënten met een normale ovariële reserve zullen worden behandeld volgens de klinische praktijk en het verschil tussen verwachte (via AFC) en teruggevonden eicellen zal worden beoordeeld in relatie tot het gebruik van resveratrol.

ONTWERP EN METHODOLOGIE:

Paren die getroffen zijn door onverklaarde onvruchtbaarheid zullen worden ingeschreven. De definitie van onverklaarde onvruchtbaarheid is als volgt: onvruchtbaarheid bij paren met ogenschijnlijk normale ovariumfunctie, eileiders, baarmoeder, baarmoederhals en bekken, leeftijd ≤ 40 jaar en met voldoende coïtusfrequentie; en schijnbaar normale testiculaire functie, urogenitale anatomie en een normaal ejaculaat.

Alle patiënten zullen worden gerandomiseerd voor geen behandeling (placebogroep - alleen foliumzuur) en voor behandeling met resveratrol (studiegroep) met een verhouding van 1:1. De door software gegenereerde randomisatielijst zal worden beheerd door een verpleegkundige die niet direct bij het onderzoek betrokken is en zal de patiënten gedurende de gehele behandeling de medicijnen geven. Noch de artsen/embryologen, noch de patiënten zullen op de hoogte zijn van de inhoud van de dozen met medicijnen (foliumzuur of resveratrol) (dubbelblind ontwerp).

De behandelingsduur bedraagt ​​minimaal 65 dagen vóór aanvang van de stimulatie (vanaf het stadium van de pre-antrale follikels) tot de dag waarop de eicel wordt opgehaald.

Alle AFC-bepalingen zullen worden uitgevoerd door dezelfde twee artsen van de tweede tot de zesde dag van de cyclus, in een van de laatste drie maanden vóór het begin van de stimulatie. Alle follikels van 2 tot 10 mm worden geregistreerd (er wordt onderscheid gemaakt tussen de follikels van 2 tot 5 mm en de follikels van 6 tot 10 mm).

COS zal worden uitgevoerd door dagelijkse injecties van rFSH (Gonal F; Merck Serono, Italië) en zal worden gestart op de tweede/derde dag van de cyclus en worden voortgezet tot de dag van inductie van de eicelrijping. De onderdrukking van de hypofyse zal worden verkregen door de toediening van de GnRH-antagonist ganirelix (0,25 mg per dag, Fyremadel, Ferring S.p.A.), die zal worden gestart vanaf de zesde dag van de ovariële stimulatie tot de dag van inductie van de rijping van de eicellen.

De follikelontwikkeling wordt na 5 dagen behandeling gevolgd en daarna minstens elke 2 dagen. De monitoring zal bestaan ​​uit: a) transvaginale echografie om het aantal en de maximale diameter van de follikels in de eierstokken en de dikte van het endometrium te beoordelen; b) de dosering van 17β-oestradiol, LH en progesteron alleen op de dag van inductie van de eicelrijping. De transvaginale echografie ter controle zal door dezelfde twee artsen worden uitgevoerd.

Sterk gezuiverd urinair hCG (Gonasi HP, IBSA Farmaceutici, Italië) 10.000 IE, subcutaan of intramusculair, zal worden gebruikt om de uiteindelijke rijping van de eicellen te induceren wanneer twee of meer follikels met een diameter ≥16 mm worden waargenomen en zullen 35,5-36 uur worden toegediend. vóór de geplande eicelwinning. In geval van OHSS-risico zal de uiteindelijke rijping van de eicellen worden verkregen door subcutaan gebruik van een GnRH-agonist (Triptorelin, Decapeptyl 0,1 mg, Ipsen S.p.A., Italië) 0,3 mg, en het ophalen van de eicellen zal worden gepland met dezelfde modaliteiten als hierboven beschreven; in dit geval worden alle verkregen embryo's gecryopreserveerd.

Er werd geen verschil in het aantal teruggevonden eicellen aangetoond bij het vergelijken van deze twee verschillende modaliteiten voor het teweegbrengen van de uiteindelijke rijping van de eicellen (Haahr et al., 2017).

De trigger voor eicelrijping zal niet worden bereikt als het niet mogelijk is om ten minste 2 follikels ≥16 mm te bereiken.

Het ophalen van de eicellen wordt uitgevoerd door de twee artsen met het hoogste expertiseniveau.

Op de tweede, derde of vijfde dag na het ophalen van de eicellen vindt een nieuwe terugplaatsing van de embryo's plaats.

In geval van OHSS-risico en/of in geval van progesteronstijging op de dag van hCG-toediening (≥1,5 ng/ml), zullen alle embryo's worden gecryopreserveerd. Voor de analyse van de eindpunten zullen de paren met alle ingevroren embryo’s in aanmerking worden genomen.

BEREKENING VAN DE STEEKPROEFGROOTTE:

Om de doelstellingen van het huidige onderzoeksprotocol na te streven, werd a priori een berekening van de steekproefomvang uitgevoerd om het minimaal vereiste aantal deelnemers te bepalen. Uit de literatuur beschikbare gegevens duiden gemiddeld op een verschil van 1,5 in de nr. van pre-ovulatoire follikels (≥16 mm) tussen de groep behandeld met resveratrol en de controlegroep, met een gemiddelde toename van 15% in het voordeel van de onderzoeksgroep. Rekening houdend met een conservatief verschil van 10%, wat overeenkomt met een grote effectgrootte van d=0,80, een power (1-β) van 95%, een alfa van 0,05, een tweezijdige t-test en een ratio Als de verhouding tussen de twee groepen 1:1 is, zouden er in totaal 90 proefpersonen (45 voor elke groep) nodig zijn om een ​​significant verschil in de primaire uitkomst tussen de twee groepen te verifiëren.