Możliwe działanie resweratrolu w poprawie wyników IVF/ICSI u par z niewyjaśnioną niepłodnością (RECOS)

Z ostatnich szacunków wynika, że ​​na świecie częstość występowania niepłodności w ciągu całego życia wynosi 17,5%, co oznacza, że ​​około jedna na sześć osób doświadczyła niepłodności na którymś etapie swojego życia.

Pomimo poprawy konwencjonalnych badań diagnostycznych, nadal około 25% przyczyn niepłodności par pozostaje niewyjaśnionych.

W rzeczywistości nie można zbadać kilku kluczowych momentów procesu reprodukcji człowieka, w związku z czym określone zmiany w zakresie reprodukcji pozostają niezdiagnozowane. Na samą myśl o procesie folikulogenezy jajników, rozwoju oocytów, implantacji zarodka, to wszystko są prawdziwe „biologiczne tajemnice”.

Wiadomo, że spośród tych różnych aspektów biologicznych jakość oocytów jest głównym czynnikiem predykcyjnym ciąży klinicznej po zapłodnieniu in vitro/ICSI. Rzeczywiście, proces dojrzewania oocytów wpływa na rozwój zarodka, a co za tym idzie, na jego żywotność. Choć mechanizmy warunkujące dobrą jakość oocytu nie są znane, to jednak przypuszcza się, że w rozwoju oocytu główną rolę odgrywają procesy zależne od energii. W procesach tych pośredniczą mitochondria, których stężenie w oocytach jest najwyższe spośród pozostałych komórek organizmu człowieka. Dojrzewanie jądrowe i cytoplazmatyczne oocytów jest ściśle powiązane ze wzrostem komórek ziarnistych (GC). Komórki te otaczają oocyt i ustanawiają funkcjonalną dwukierunkową komunikację z samym oocytem poprzez połączenia szczelinowe i czynniki parakrynne. Podczas folikulogenezy GC zwiększają zużycie glukozy i metabolizują glukozę do pirogronianu, który przechodzi do oocytu. Wszystko to determinuje wzrost dostaw energii do samego oocytu, objawiający się wzrostem produkcji ATP, która pozwala tej ostatniej komórce przygotować się do zapłodnienia i pierwszych etapów rozwoju embrionalnego, który, jak wiadomo, jest całkowicie zależny od oocytu.

Wydaje się, że resweratrol potrafi wpasować się w ten obszar funkcjonowania komórek. Jest to naturalny polifenol, szeroko rozpowszechniony w żywności, roślinach, napojach i wydaje się, że indukuje proliferację GC poprzez działanie antyapoptotyczne w sposób zależny od SIRT1. Ponadto w GC resweratrol zmniejsza stres oksydacyjny, zwiększa biogenezę mitochondriów i wewnątrzkomórkowy poziom ATP, warunkując wysoką dostępność energii, która sprzyja wzrostowi oocytów. Wydaje się, że resweratrol zmniejsza w komórkach ziarnistych szczura ekspresję czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), biorącego udział w angiogenezie i przepuszczalności naczyń, potencjalnie wykazując działanie ochronne w stosunku do ryzyka zespołu nadmiernej stymulacji jajników (OHSS), stanu zagrażającego życiu związanego z jajnikami. stymulacji, której głównym mediatorem jest VEGF.

Niedawne randomizowane badanie kliniczne wykazało, że wstępne leczenie resweratrolem przez 3 miesiące u kobiet dotkniętych niepłodnością małżeńską i poddawanych ICSI wiązało się z większą liczbą pobranych i dojrzałych oocytów, wyższym współczynnikiem zapłodnień, większą liczbą blastocyst na na pacjenta i większą liczbę nadwyżki kriokonserwowanych zarodków na pacjenta, nawet jeśli nie zaobserwowano istotnego wpływu na liczbę ciąż klinicznych i współczynnik urodzeń żywych.

W oparciu o ten ostatni dowód i biorąc pod uwagę potencjalny korzystny wpływ resweratrolu na folikulogenezę i rozwój oocytów, badacze zaprojektowali randomizowane, kontrolowane, podwójnie ślepe, jednoośrodkowe badanie, którego celem będzie porównanie biologicznych i klinicznych wyników resweratrolu suplement u kobiet poddawanych cyklom IVF/ICSI z powodu niewyjaśnionej niepłodności.

Według wiedzy badaczy nie opublikowano żadnego badania dotyczącego potencjalnego wpływu resweratrolu na wyniki IVF/ICSI u par z rozpoznaną niepłodnością, która może być naturalnym celem tego zintegrowanego leczenia, ponieważ nie można zatrzymać procesu folikulogenezy i dojrzewania oocytów. rutynowo badane. Zmiana tych mechanizmów biologicznych może być nierozpoznaną przyczyną części niewyjaśnionej niepłodności, a leczenie resweratrolem może skutkować znaczną poprawą kliniczną pacjentów włączonych do badania.

Mówiąc bardziej szczegółowo, głównym celem tego randomizowanego, kontrolowanego placebo, podwójnie ślepego, jednoośrodkowego badania będzie ocena możliwego wpływu resweratrolu na lepszy rozwój pęcherzyków u pacjentek z niewyjaśnioną niepłodnością poddawanych kontrolowanej stymulacji jajników (COS ) dla IVF/ICSI.

Niepłodne pacjentki z prawidłową rezerwą jajnikową będą leczone zgodnie z praktyką kliniczną, a różnica między oczekiwanymi (poprzez AFC) a uzyskanymi oocytami zostanie oceniona w odniesieniu do stosowania resweratrolu.

PROJEKT I METODOLOGIA:

Do badania zostaną włączone pary dotknięte niewyjaśnioną niepłodnością. Definicja niewyjaśnionej niepłodności jest następująca: niepłodność u par z pozornie prawidłową czynnością jajników, jajowodami, macicą, szyjką macicy i miednicą, w wieku ≤ 40 lat i z odpowiednią częstotliwością współżycia; i najwyraźniej normalna funkcja jąder, anatomia układu moczowo-płciowego i normalny wytrysk.

Wszyscy pacjenci zostaną losowo przydzieleni do grupy nieleczonej (grupa placebo – tylko kwas foliowy) i do leczenia resweratrolem (grupa badana) w stosunku 1:1. Wygenerowana przez oprogramowanie lista randomizacyjna będzie zarządzana przez pielęgniarkę niezaangażowaną bezpośrednio w badanie i zapewni pacjentom leki na cały okres leczenia. Ani lekarze/embriolodzy, ani pacjenci nie będą świadomi zawartości pudełek z lekami (kwasem foliowym lub resweratrolem) (projekt z podwójną ślepą próbą).

Czas trwania leczenia wynosić będzie co najmniej 65 dni przed rozpoczęciem stymulacji (od fazy pęcherzyków przedantralnych) do dnia pobrania oocytów.

Wszystkie oznaczenia AFC będą wykonywane przez tych samych dwóch lekarzy od 2. do 6. dnia cyklu, w jednym z trzech ostatnich miesięcy przed rozpoczęciem stymulacji. Rejestrowane będą wszystkie pęcherzyki o średnicy od 2 do 10 mm (z rozróżnieniem na pęcherzyki o średnicy od 2 do 5 mm i mieszki o średnicy od 6 do 10 mm).

COS będzie przeprowadzana poprzez codzienne wstrzyknięcia rFSH (Gonal F; Merck Serono, Włochy) i będzie rozpoczynana w 2./3. dniu cyklu i kontynuowana do dnia indukcji dojrzewania oocytów. Supresję przysadki uzyskamy poprzez podawanie ganireliksu, antagonisty GnRH (0,25 mg dziennie, Fyremadel, Ferring S.p.A.), które rozpoczynamy od 6 dnia stymulacji jajników do dnia indukcji dojrzewania oocytów.

Rozwój pęcherzyków będzie monitorowany po 5 dniach leczenia, a następnie co najmniej co 2 dni. Monitoring będzie polegał na: a) badaniu USG przezpochwowym w celu oceny liczby i maksymalnej średnicy pęcherzyków jajnikowych oraz grubości endometrium; b) dawkowanie 17β-estradiolu, LH i progesteronu wyłącznie w dniu indukcji dojrzewania oocytów. Przezpochwowe USG w celu monitorowania będzie wykonywane przez tych samych dwóch lekarzy.

Wysoko oczyszczona hCG z moczu (Gonasi HP, IBSA Farmaceutici, Włochy) 10 000 jm, podskórnie lub domięśniowo, zostanie zastosowana w celu wywołania końcowego dojrzewania oocytów, gdy zostaną zaobserwowane dwa lub więcej pęcherzyków o średnicy ≥16 mm i zostanie podana w ciągu 35,5–36 godzin przed planowanym pobraniem oocytów. W przypadku ryzyka OHSS ostateczne dojrzewanie oocytów zostanie osiągnięte poprzez podanie agonisty GnRH (Triptorelin, Decapeptyl 0,1 mg, Ipsen S.p.A., Włochy) w dawce 0,3 mg podskórnie, a pobranie oocytów zostanie zaplanowane w taki sam sposób, jak opisano powyżej; w tym przypadku wszystkie uzyskane zarodki zostaną poddane kriokonserwacji.

Nie wykazano żadnej różnicy w liczbie pobranych oocytów, porównując te dwa różne sposoby wywoływania ostatecznego dojrzewania oocytów (Haahr i in., 2017).

Czynnik wyzwalający dojrzewanie oocytów nie zostanie osiągnięty w przypadku niemożności dotarcia do co najmniej 2 pęcherzyków ≥16 mm.

Pobieranie oocytów będzie wykonywane przez dwóch lekarzy o najwyższym poziomie wiedzy specjalistycznej.

Świeży transfer zarodków zostanie wykonany w drugiej, trzeciej lub piątej dobie po pobraniu oocytów.

W przypadku ryzyka OHSS i/lub wzrostu progesteronu w dniu podania hCG (≥1,5 ng/ml) wszystkie zarodki zostaną poddane kriokonserwacji. Pary posiadające wszystkie zamrożone zarodki zostaną uwzględnione w analizie punktów końcowych.

PRZYKŁADOWE OBLICZENIE ROZMIARU:

Aby osiągnąć cele niniejszego protokołu badania, przeprowadzono a priori obliczenia wielkości próby w celu określenia minimalnej wymaganej liczby uczestników. Dane dostępne w literaturze wskazują na różnicę średnio 1,5 w nr. przedowulacyjnych (≥16 mm) pomiędzy grupą leczoną resweratrolem a grupą kontrolną, przy średnim wzroście o 15% na korzyść grupy badanej. Zatem, biorąc pod uwagę konserwatywną różnicę 10%, co jest równoważne dużej wielkości efektu d=0,80, mocy (1-β) 95%, alfa 0,05, dwustronnemu testowi t i stosunkowi 1:1 pomiędzy obiema grupami, potrzeba łącznie 90 pacjentów (45 w każdej grupie), aby zweryfikować znaczącą różnicę w pierwotnym wyniku pomiędzy obiema grupami.