Возможное действие ресвератрола на улучшение результатов ЭКО/ИКСИ у пар с необъяснимым бесплодием (RECOS)

По последним оценкам, распространенность бесплодия в течение жизни в мире составляет 17,5%, а это означает, что примерно каждый шестой человек на каком-то этапе своей жизни сталкивался с бесплодием.

Несмотря на улучшение традиционных диагностических исследований, до сих пор около 25% причин парного бесплодия остаются необъяснимыми.

Фактически, некоторые решающие моменты репродуктивного процесса человека не могут быть изучены, и, следовательно, конкретные репродуктивные изменения остаются недиагностированными. Просто подумайте о процессе фолликулогенеза яичников, развитии ооцитов, имплантации эмбриона – все это настоящие «биологические загадки».

Среди этих различных биологических аспектов известно, что качество ооцитов является основным предиктором клинической беременности после ЭКО/ИКСИ. Действительно, процесс созревания ооцита влияет на развитие эмбриона и, следовательно, на его жизнеспособность. Хотя механизмы, определяющие хорошее качество ооцита, неизвестны, тем не менее предполагается, что энергозависимые процессы играют важную роль в развитии ооцита. Эти процессы опосредуются митохондриями, концентрация которых в ооцитах самая высокая среди других клеток организма человека. Ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов строго связано с ростом гранулезных клеток (ГК). Эти клетки окружают ооцит и устанавливают функциональную двунаправленную перекрестную связь с самим ооцитом через щелевые соединения и паракринные факторы. Во время фолликулогенеза ГК увеличивают потребление глюкозы и метаболизируют глюкозу в пируват, который поступает в ооцит. Все это обуславливает увеличение энергетического обеспечения самой яйцеклетки, о чем свидетельствует увеличение продукции АТФ, что позволяет последней клетке подготовиться к оплодотворению и первым стадиям эмбрионального развития, которое, как известно, полностью зависит от ооцита.

Ресвератрол, похоже, способен вписаться в эту область клеточного функционирования. Это природный полифенол, широко распространенный в пищевых продуктах, растениях, напитках и, по-видимому, индуцирующий пролиферацию ГК посредством антиапоптотического эффекта SIRT1-зависимым образом. Кроме того, в ГК ресвератрол снижает окислительный стресс, увеличивает биогенез митохондрий и уровень внутриклеточного АТФ, определяя высокую доступность энергии, которая способствует росту ооцитов. Ресвератрол, по-видимому, снижает в гранулезных клетках крысы экспрессию фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), участвующего в ангиогенезе и проницаемости сосудов, что потенциально оказывает защитное действие на риск синдрома гиперстимуляции яичников (СГЯ), опасного для жизни состояния, связанного с яичниками. стимуляция, основным медиатором которой является VEGF.

Недавнее клиническое рандомизированное исследование показало, что предварительная 3-месячная терапия ресвератролом у женщин, страдающих парным бесплодием и перенесших ИКСИ, была связана с более высоким количеством извлеченных и зрелых ооцитов, более высокой скоростью оплодотворения, большим количеством бластоцист в год. пациента и большее количество избыточных криоконсервированных эмбрионов на одного пациента, даже если не наблюдалось значительного эффекта в отношении клинических беременностей и показателей живорождения.

Основываясь на этих последних доказательствах и учитывая потенциальное положительное влияние ресвератрола на фолликулогенез и развитие ооцитов, исследователи разработали рандомизированное контролируемое двойное слепое одноцентровое исследование, целью которого будет сравнение биологических и клинических результатов применения ресвератрола. добавка для женщин, проходящих циклы ЭКО/ИКСИ по поводу необъяснимого бесплодия.

Насколько известно исследователям, не было опубликовано ни одного исследования о потенциальном влиянии ресвератрола на результаты ЭКО/ИКСИ с учетом пар с этим диагнозом бесплодия, которое может быть естественной целью этого интегративного лечения, поскольку процесс фолликулогенеза и созревания яйцеклеток невозможно контролировать. регулярно расследуется. Изменение этих биологических механизмов может быть нераспознанной причиной части необъяснимого бесплодия, а лечение ресвератролом может привести к значительному клиническому улучшению у пациентов, включенных в исследование.

Более подробно, основной целью этого рандомизированного плацебо-контролируемого двойного слепого одноцентрового исследования будет оценка возможного влияния ресвератрола на улучшение развития фолликулов у пациенток с необъяснимым бесплодием, подвергающихся контролируемой стимуляции яичников (COS). ) для ЭКО/ИКСИ.

Бесплодные пациентки с нормальным овариальным резервом будут лечиться в соответствии с клинической практикой, а разница между ожидаемыми (через AFC) и полученными ооцитами будет оцениваться в зависимости от использования ресвератрола.

ДИЗАЙН И МЕТОДОЛОГИЯ:

В исследование будут включены пары, страдающие необъяснимым бесплодием. Определение необъяснимого бесплодия следующее: бесплодие у пар с внешне нормальной функцией яичников, маточных труб, матки, шейки матки и таза, возрастом ≤ 40 лет и с адекватной частотой половых актов; и очевидно нормальная функция яичек, анатомия мочеполовой системы и нормальный эякулят.

Все пациенты будут рандомизированы для отсутствия лечения (группа плацебо - только фолиевая кислота) и для лечения ресвератролом (исследовательская группа) в соотношении 1:1. Список рандомизации, созданный с помощью программного обеспечения, будет управляться медсестрой, не участвующей непосредственно в исследовании, и будет выдавать пациентам лекарства на протяжении всего периода лечения. Ни врачи/эмбриологи, ни пациенты не будут знать о содержимом коробок с лекарствами (фолиевой кислотой или ресвератролом) (двойной слепой дизайн).

Продолжительность лечения составит не менее 65 дней до начала стимуляции (со стадии преантральных фолликулов) и до дня забора ооцитов.

Все определения АФК будут выполняться одними и теми же двумя врачами со 2-го по 6-й день цикла, в один из последних трех месяцев перед началом стимуляции. Будут записаны все фолликулы размером от 2 до 10 мм (различаются фолликулы размером от 2 до 5 мм и фолликулы размером от 6 до 10 мм).

COS будет проводиться путем ежедневных инъекций рФСГ (Гонал F; Merck Serono, Италия) и будет начинаться на 2-й/3-й день цикла и продолжаться до дня индукции созревания ооцитов. Подавление гипофиза будет достигнуто введением антагониста GnRH ганиреликса (0,25 мг в день, Fyremadel, Ferring SpA), которое будет начинаться с 6-го дня стимуляции яичников до дня индукции созревания ооцитов.

Развитие фолликулов будет контролироваться через 5 дней лечения и в дальнейшем не реже одного раза в 2 дня. Мониторинг будет состоять из: а) трансвагинального ультразвукового исследования для оценки количества и максимального диаметра фолликулов яичников и толщины эндометрия; б) дозировка 17β-эстрадиола, ЛГ и прогестерона только в день индукции созревания ооцита. Трансвагинальное УЗИ для мониторинга будут выполнять одни и те же два врача.

Высокоочищенный ХГЧ мочи (Gonasi HP, IBSA Farmaceutici, Италия) 10 000 МЕ подкожно или внутримышечно будет использоваться для индукции окончательного созревания ооцита, когда будут наблюдаться два или более фолликула диаметром ≥16 мм, и будет вводиться через 35,5-36 часов. перед запланированным забором яйцеклеток. В случае риска СГЯ окончательное созревание ооцитов будет достигнуто с использованием агониста ГнРГ (Трипторелин, Декапептил 0,1 мг, Ipsen SpA, Италия) 0,3 мг подкожно, а извлечение ооцитов будет планироваться с использованием тех же методов, описанных выше; в этом случае все полученные эмбрионы будут криоконсервированы.

При сравнении этих двух разных способов запуска окончательного созревания ооцитов не было выявлено никакой разницы в количестве полученных ооцитов (Haahr et al., 2017).

Триггер созревания ооцита не будет достигнут в случае невозможности достижения хотя бы 2 фолликулов ≥16 мм.

Забор яйцеклеток будут проводить два врача с самым высоким уровнем квалификации.

Свежий перенос эмбрионов будет выполнен на второй, третий или пятый день после получения ооцитов.

В случае риска СГЯ и/или в случае повышения прогестерона в день введения ХГЧ (≥1,5 нг/мл) все эмбрионы будут криоконсервированы. Пары со всеми замороженными эмбрионами будут рассматриваться для анализа конечных точек.

РАСЧЕТ РАЗМЕРА ВЫБОРКИ:

Для достижения целей настоящего протокола исследования был проведен априорный расчет размера выборки, чтобы определить минимальное необходимое количество участников. Имеющиеся в литературе данные указывают на разницу в среднем в 1,5 раза. преовуляторных фолликулов (≥16 мм) между группой, получавшей ресвератрол, и контрольной группой, со средним увеличением на 15% в пользу исследуемой группы. Таким образом, учитывая консервативную разницу в 10%, что эквивалентно большому размеру эффекта d=0,80, мощности (1-β) 95%, альфа 0,05, двустороннему t-критерию и отношению При соотношении 1:1 между двумя группами потребуется в общей сложности 90 субъектов (45 в каждой группе) для проверки значимой разницы в первичных результатах между двумя группами.