Effekten af ​​intralesisk injektion af mesenkymale navlestrengsstamceller, dets konditionerede medium og triamcinolonacetonid på type 1:3 kollagenforhold og interleukin-10 niveauer i keloid: et randomiseret kontrolleret forsøg

Screening af patienter blev udført ved at måle keloiddimensioner ved hjælp af en lineal. Patienter, der opfyldte inklusionskriterierne, blev derefter tilfældigt opdelt i 3 grupper. Det samme injektionsvolumen (1 ml) i hvert cm3 keloidvolumen blev givet ved hjælp af en 1 ml sprøjte og 27G nål til forsøgspersonerne. Ultralydsvejledning blev brugt til at administrere injektionen ved hjælp af en in-plane-teknik ind i midten af ​​læsionen, med hældninger på 30-45 grader, hvilket sikrede ensartet tryk i hvert individ. Gruppe 1 fik UC-MSC 2 millioner celler/ml/cm3, gruppe 2 fik UC-CM 1mL/cm3, mens gruppe 3 fik TA 40 mg/ml/cm3. For at opnå UC-MSC og UC-CM blev 10 cm navlestrengsvæv opsamlet i 50 ml transportmedium indeholdende følgende stoffer: amphotericin B (slutkoncentration 7500 ng/ml [JR Scientific 50701]), alfa minimal essentiel medium (MEM [GIBCO 12000-022 1]), penicillin/streptomycin (slutkoncentration 300 U/ml [Gibco 15140-122]). Prøver blev derefter behandlet inden for 8 timer efter indsamling. Navlestrengen blev derefter dissekeret, kortvarigt vasket i 0,5 % povidon-jod (betadin ©) med phosphatbufret saltvand med pH 7,4 (PBS [Sigma P3813]) og derefter vasket i PBS for at fjerne betadin og blod. Navlekarrene blev skåret ud, før navlestrengen blev hakket til et komplet medium. UC-CM blev skabt ved hjælp af Alpha-MEM og Dulbeccos modificerede Eagles-medium (DMEM [GIBCO 31600-034]). Det færdiggjorte komplette medium indeholder 1 % L-glutamin (Lonza 17-605C), 10 % TC (Indonesisk Røde Kors), amphotericin B (slutkoncentration 2500 ng/ml) og penicillin/streptomycin (slutkoncentration 100 U/ml). Supplering af kultur med 10 % autologt eller allogent navlestrengsblodserum og 10 % humant AB-serum (Gibco 34005-100) blev udført for at skabe MEM. Hver brønd i en 12-brønds plade (væksten er 3,8 cm2 [Biolit]) blev fyldt med tre eksplantater (diameter 2-5 mm) og Wharton's Jelly, efterfulgt af tilsætning af flere dråber komplet medium. Triplikation af kultur blev udført på hvert medium. Pladen blev inkuberet ved 37°C og 5 % CO2 og observeret dagligt for kontaminering eller cellulær vækst, hvori de kontaminerede brønde blev fjernet. Efter at eksplantaterne var fastgjort, blev der tilsat 200-500 µL passende medium. Medium ændringer, der involverede fjernelse af halvdelen af ​​mediet og tilsætning af halvdelen af ​​hvert medium, blev udført hver 2.-3. dag. Vækst af cellerne ud over eksplantaterne med 90% konfluens markerer levedygtighed for høst ved hjælp af TrypLE Select (GIBCO 12563-011). Farveeksklusionsmetode blev anvendt til at tælle det levedygtige/ikke-levedygtige celleudbytte. Efter hver høst, med eksplantatet stadig fastgjort til pladen, blev nyt passende medium tilsat, hvor pladen blev re-inkuberet ved 37°C og 5% CO2. Lignende behandling blev gentaget for den anden og efterfølgende kulturer, hvilket muliggjorde flere høst fra en enkelt eksplantat. Biopsier af keloidvævet blev derefter udført to gange, i det første møde og 17 uger efter. Parametre, der skal evalueres i anatomisk patologisk undersøgelse, er Sirius rød farvning for at evaluere kollagenstruktur under en polariserende linse, samt In Vitro kvantitativ undersøgelse ved hjælp af ELISA metoden til at undersøge IL-10. Beregning af ændringer i forholdet mellem type 1 og type 3 kollagenniveauer blev udført ved at dividere forholdet mellem kollagen før behandling fra forholdet mellem kollagen efter hver behandling. Når det visualiseres under en polariserende linse, vil type-3-kollagen fremstå som grøn-dobbeltbrydende og type-1-kollagen vil fremstå som gul-dobbeltbrydende. Kollagenforholdet blev opnået ved at dividere sammensætningen af ​​kollagen type 1 til kollagen type 3 i Sirius rød farvning under polariserende linser.