Oral ildelugt og paradentose-relaterede parametre

Der eksisterer en debat i litteraturen om hvorvidt paradentose er forbundet med oral ildelugt, og denne undersøgelse forsøger at forstå den måde, hvorpå paradentose er forbundet med oral ildelugt-relaterede parametre.

Klinisk protokol:

78 systemisk sunde ikke-rygere blev screenet for oral halitosis i afdelingen for parodontologi, Aristoteles Universitet i Thessaloniki, Grækenland. Disse var ikke-halitosis klagende emner. Efter indledende screening for egnethed og opnåelse af et underskrevet informeret samtykke godkendt af den etiske komité for tandlægeskolen, Aristoteles University of Thessaloniki, blev der registreret en fuldmundsparodontal kortlægning inklusive plakindeks (PI), klinisk sonderingsdybde (CPD), klinisk tilknytning niveauer (CAL) og blødning ved sondering (BOP) på seks steder pr. tand ved hjælp af en manuel parodontalsonde (Hu-Friedy XP-23/QW). De forsøgspersoner, der opfyldte de kliniske inklusionskriterier, blev klassificeret som kronisk parodontitis (N=28), kronisk generaliseret gingivitis (N=23) eller raske personer (27) og blev yderligere klinisk og mikrobiologisk monitoreret.

Vurdering af tungebelægning:

Winkel Tongue Coating Index (Winkel et al., 2003) blev visuelt bestemt ved at opdele tungens ryg i sekstanter. En score mellem nul og to blev givet til hver sekstant i henhold til mængden af ​​aflejringer, og disse scores blev tilføjet, hvilket gav en total i området fra nul til 12.

Indsamling af tungeprøve:

En prøve blev indsamlet fra bagsiden af ​​tungeryggen til kvantitativ analyse af to formodede parodontale patogener, Porphyromonas gingivalis og Fusobacterium nucleatum, ved real-time PCR.

For at undgå interferens af blødning ved sondering og tungeprøvetagning med de organoleptiske vurderinger og primært med evalueringen af ​​tungelugten, blev forsøgspersonerne tilbagekaldt på et andet besøg på samme tidspunkt på dagen og inden for en periode på fire dage for oral ildelugt vurdering. Inden for dette korte tidsinterval blev deltagerne bedt om ikke at ændre deres rutinemæssige kost- og mundhygiejnevaner undtagen 48 timer før det næste besøg, hvor halitosevurderingerne blev udført (Roldán et al., 2003; Donaldson et al., 2007) . Der blev givet skriftlige instruktioner til hver deltager om mad- og drikkeforbrug og mundhygiejnevaner. Mere detaljeret blev krydret mad, løg, hvidløg, alkohol og mundskyllevand undgået 48 forud for undersøgelsen. Om morgenen til evaluering blev kaffe, mynte, tyggegummi, mundhygiejne, duftende kosmetik eller aftershave-lotion undgået. Indtagelse af vand og orale skylninger med vand var tilladt mindst to timer før lugtvurderingen. På lignende måde fulgte dommeren, der udførte de organoleptiske vurderinger af oral ildelugt, de samme instruktioner som deltagerne i 24 timer, før de foretog undersøgelserne.

Vurdering af ildelugtende i munden:

• Halimeter® (Halimeter® RH-17, Interscan Corporation, Chatsworth, CA, USA) blev brugt til at måle koncentrationen af ​​flygtige sulfidforbindelser (VSC) i dele pr. milliard (p.p.b.) (Rosenberg et al., 1991). Vurderingerne blev altid udført mellem 10.00-12.00 ved den samme tandlægestol i klinikken for at minimere daglige variationer i rummets temperatur og luftfugtighed (Liu et al., 2006);
• Organoleptiske vurderinger (ORG) fra nul til fem (Rosenberg et al., 1991) vurderede lugten af ​​følgende parametre:

Hel mundluft (ORG1) - forsøgspersoner blev bedt om at ånde blidt ud i et 20 cm langt rør gennem en skærm for at undgå øjenkontakt med lugtdommeren, som vurderede åndelugt i den anden ende af røret (Murata et al., 2002) ; Forreste region af tungeryggen (ORG2) - forsøgspersonerne blev bedt om at slikke deres håndled og vente et par sekunder for at lade området tørre ud, før lugten blev vurderet; Bageste tungeregion (ORG3) - materiale blev høstet fra bagsiden af ​​den linguale ryg på en standardiseret måde ved hjælp af en plastikske; Næseluft - forsøgspersoner blev bedt om at ånde ud gennem det ene næsebor efter at have lukket det modsatte næsebor med deres finger for at udelukke ekstraorale årsager, der kan være relateret til dårlig ånde.

En kalibreret enkelt "eksaminator" registrerede parodontale målinger og Halimeter®-aflæsninger, hvorimod en kalibreret "dommer" udførte de organoleptiske vurderinger af halitose. Alle deltagere blev bedømt af samme eksaminator og dommer. For at sikre en objektiv dataindsamling blev lugtdommeren blindet med hensyn til Halimeter®-målingerne og individets kliniske status. Før og under denne undersøgelse blev lugtdommeren og en yderligere lugt-"evaluator" gentagne gange standardiseret mod en lang række n-butanolopløsninger med intensiteter fra 25 til 6075 ppm (Nachnani et al., 2005; Saad et al., 2005) og også om mundlugten hos patienter, der går på paradentoseklinikken. For at vurdere pålideligheden af ​​dommerens vurderinger undersøgte dommeren og evaluatoren mundlugten hos et antal undersøgelsesdeltagere uden at være opmærksomme på hinandens score. Der blev fundet en statistisk signifikant sammenhæng mellem scorerne (Spearman's rho=0,64 for lugten af ​​luft i hele munden, p<0,001) (S.A.C.M.O.T., 2002). Det skal bemærkes, at kun dommerens vurderinger blev brugt i dataanalysen.

Forsøgspersoner blev udpeget som halitosis positive (+), når enten den organoleptiske score for hele mundluften var to eller mere, og/eller aflæsningerne af Halimeter® oversteg 140 p.p.b.

Realtids polymerase kædereaktion:

DNA'et fra P. gingivalis stamme W50 og F. nucleatum stamme ATCC 10953 blev fremstillet ved Dental School, University of Glasgow ved at følge standardprotokollen. Kort fortalt blev P. gingivalis og F. nucleatum dyrket på kræsen anaerob agar og høstet efter tre til syv dage. Organismerne fra en enkelt agarplade blev høstet med podninger og dispergeret i PBS indeholdende 0,1 mM dinatrium-EDTA (PBSE). Efter én vask i PBS blev de resuspenderet i 1 ml sterilt deioniseret vand og fordelt i to 1,5 ml skruetops mikrohætter. DNA blev ekstraheret fra organismerne ved at placere rørene i et kogende vandbad i ti minutter. Lysatet blev blandet med et lige så stort volumen phenol:chloroform:isoamylalkohol (25:24:1; v/v/v) i fem minutter. Efter centrifugering (13000 rpm, 10 min) blev den vandige øvre fase fra hvert præparat overført til et frisk rør og blandet med et volumen chloroform: isoamylalkohol (24:1) i fem minutter. Efter centrifugering (13000 rpm, 10 min) blev den vandige øvre fase fra hvert præparat overført til et frisk rør, og 0,1 volumen 4,5 M natriumacetatopløsning (pH 5,4) og to volumener ethanol blev tilsat. DNA blev præcipiteret natten over ved -20°C. DNA'et blev pelleteret ved centrifugering (13000 rpm, 10 min) vasket sekventielt i 1 ml 70% ethanol, 95% ethanol og fik lov til at næsten tørre. DNA'et blev derefter opløst i 100 µl vand. Nukleinsyrekoncentrationen og renheden blev målt ved en bølgelængde på 260 nanometer, og forholdet mellem absorbansen ved 260 og 280 nanometer blev målt under anvendelse af en steril kvartskuvette i et spektrofotometer.

Et realtids-PCR-assay ved hjælp af TaqMan-systemet (Yoshida et al., 2003) blev brugt i den aktuelle undersøgelse til den kvantitative analyse af 16S rRNA fra F. nucleatum og P. gingivalis i tungebelægninger. Lysater af prøver blev fremstillet ved at koge aliquoten i 10 minutter efter punktering af hætten med en fin steril nål for at forhindre trykopbygning. PCR blev udført ved et samlet volumen på 20 μl ved hjælp af Light CyclerTM Fast Start DNA Master Hybridization Probes kit (Roche Diagnostics, Manheim, Tyskland), 500 nM hver af sense- og antisense-primere, 200 nM probe og 5 μl lyserede celler. De anvendte artsspecifikke primere og TaqMan-prober er vist i tabel 1. Specificiteten af ​​de amplificerede produkter og derfor af primerne blev bekræftet tidligere (Kato et al., 2005; Yoshida et al., 2003). Amplifikation og detektion blev udført med LightCycler Sequence Detection System (Roche Diagnostics, Manheim, Tyskland) med følgende cyklusbetingelser, identiske for begge assays: 95C i 10 minutter og derefter 45 cyklusser af 95C i 10 sekunder, 58C i 25 sekunder og en endelig forlængelse ved 40C i 30 sek. En standardkurve blev plottet for hvert assay ved at anvende serielle fortyndinger af kendte mængder af oprenset genomisk DNA fra hver testorganisme.

Statistiske metoder:

Den statistiske nulhypotese om, at der ikke er nogen sammenhæng mellem påvisning af halitose (tilstedeværelse eller fravær) og periodontal status hos ikke-rygere blev testet ved logistisk regression. Da størrelsen af ​​hver klinisk gruppe var over 20 og minimumsantallet af halitose-positive forsøgspersoner pr. klinisk gruppe oversteg ti, med undtagelse af den raske gruppe (ni halitosis-positive forsøgspersoner), blev prøvestørrelsen anset for tilstrækkelig til anvendelsen af ​​denne statistiske model (Peduzzi et al. 1996).

Sammenhængen mellem halitosis tilstedeværelse eller fravær og kliniske indekser (PI, CPD, CAL, BOP, steder > 5 mm CPD, WTCI) blev undersøgt ved hjælp af logistisk regression. Spearmans rho-korrelationskoefficient estimerede sammenhængen mellem skalavariabler og også overensstemmelsen mellem scorerne fra de to lugtbedømmere. Antagelsen om normalitet for skalavariabler blev testet ved Shapiro Wilk-testen. Sammenligninger mellem grupper blev udført ved hjælp af Kruskal-Wallis testen, mens parvise sammenligninger blev udført ved Mann-Whitney testen med Bonferronis justering af type I fejl.

Analysen af ​​data blev udført ved hjælp af SPSS version 16.0-softwaren, og niveauet af statistisk signifikans blev sat til p<0,05.