Mauvaise odeur buccale et paramètres liés aux maladies parodontales

Un débat dans la littérature existe quant à savoir si la parodontite est liée à la mauvaise haleine et cette étude tente de comprendre la manière dont la maladie parodontale est associée aux paramètres liés à la mauvaise haleine.

Protocole clinique :

Soixante-dix-huit non-fumeurs en bonne santé systémique ont été dépistés pour l'halitose buccale au Département de parodontologie de l'Université Aristote de Thessalonique, en Grèce. Il s'agissait de sujets ne se plaignant pas d'halitose. Après le dépistage initial de l'adéquation et l'obtention d'un consentement éclairé signé approuvé par le comité d'éthique de l'école dentaire de l'Université Aristote de Thessalonique, une cartographie parodontale de la bouche complète a été enregistrée, y compris l'indice de plaque (PI), la profondeur de sondage clinique (CPD), l'attachement clinique (CAL) et saignement au sondage (BOP) sur six sites par dent à l'aide d'une sonde parodontale manuelle (Hu-Friedy XP-23/QW). Les sujets remplissant les critères d'inclusion cliniques ont été classés en parodontite chronique (N = 28), gingivite généralisée chronique (N = 23) ou individus sains (27) et ont fait l'objet d'un suivi clinique et microbiologique supplémentaire.

Évaluation de l'enduit lingual :

L'indice de revêtement de la langue de Winkel (Winkel et al., 2003) a été déterminé visuellement en divisant le dos de la langue en sextants. Une note entre zéro et deux a été attribuée à chaque sextant en fonction du montant des dépôts et ces notes ont été additionnées donnant un total allant de zéro à 12.

Prélèvement d'échantillon de langue :

Un échantillon a été prélevé à l'arrière du dos de la langue pour une analyse quantitative de deux pathogènes parodontaux putatifs, Porphyromonas gingivalis et Fusobacterium nucleatum, par PCR en temps réel.

Afin d'éviter l'interférence des saignements au sondage et du prélèvement de la langue avec les évaluations organoleptiques et principalement avec l'évaluation de l'odeur de la langue, les sujets ont été rappelés lors d'une deuxième visite à la même heure de la journée et dans un délai de quatre jours pour mauvaise haleine. évaluation. Dans ce court intervalle de temps, les participants ont été invités à ne pas modifier leurs habitudes alimentaires et d'hygiène bucco-dentaire sauf 48 heures avant la prochaine visite lorsque les évaluations de l'halitose ont été effectuées (Roldán et al., 2003; Donaldson et al., 2007) . Des instructions écrites ont été données à chaque participant concernant la consommation d'aliments et de boissons et les habitudes d'hygiène bucco-dentaire. Plus en détail, les aliments épicés, l'oignon, l'ail, l'alcool et les bains de bouche ont été évités 48 avant l'examen. Le matin de l'évaluation, le café, les bonbons à la menthe, le chewing-gum, les pratiques d'hygiène bucco-dentaire, les cosmétiques parfumés ou la lotion après-rasage ont été évités. La consommation d'eau et les rinçages buccaux avec de l'eau étaient autorisés au moins deux heures avant l'évaluation de l'odeur. De la même manière, le juge qui a procédé aux évaluations organoleptiques de la mauvaise haleine a suivi les mêmes consignes que les participants pendant 24 heures avant d'entreprendre les examens.

Évaluation de la mauvaise haleine :

• Le Halimeter® (Halimeter® RH-17, Interscan Corporation, Chatsworth, CA, USA) a été utilisé pour mesurer la concentration de composés sulfurés volatils (VSC) en parties par milliard (p.p.b.) (Rosenberg et al., 1991). Les évaluations ont toujours été effectuées entre 10h00 et 12h00 dans le même fauteuil dentaire de la clinique afin de minimiser la variabilité quotidienne de la température et de l'humidité de la pièce (Liu et al., 2006) ;
• Des évaluations organoleptiques (ORG) allant de zéro à cinq (Rosenberg et al., 1991) ont évalué l'odeur des paramètres suivants :

Air de toute la bouche (ORG1) - les sujets ont été invités à expirer doucement dans un tube de 20 cm de long à travers un écran, pour éviter tout contact visuel avec le juge des odeurs, qui a évalué l'odeur de l'haleine à l'autre extrémité du tube (Murata et al., 2002) ; Région antérieure du dos de la langue (ORG2) - on a demandé aux sujets de se lécher les poignets et d'attendre quelques secondes pour permettre à la zone de sécher avant que l'odeur ne soit évaluée ; Région postérieure de la langue (ORG3) - le matériel a été récolté à l'arrière du dos lingual de manière standardisée à l'aide d'une cuillère en plastique ; Air du nez - les sujets ont été invités à expirer par une narine après avoir bouché la narine opposée avec leur doigt afin d'exclure les causes extra-orales pouvant être liées à la mauvaise haleine.

Un « examinateur » unique calibré enregistrait les mesures parodontales et les lectures de l'Halimeter®, tandis qu'un « juge » calibré effectuait les évaluations organoleptiques de l'halitose. Tous les participants ont été évalués par le même examinateur et juge. Pour assurer une collecte de données impartiale, le juge des odeurs a été aveuglé en ce qui concerne les mesures Halimeter® et l'état clinique de l'individu. Avant et pendant cette enquête, le juge d'odeur et un « évaluateur » d'odeur supplémentaire ont été standardisés à plusieurs reprises par rapport à une large gamme de solutions de n-butanol avec des intensités de 25 à 6075 parties par million (Nachnani et al., 2005 ; Saad et al., 2005) et aussi sur l'odeur buccale des patients fréquentant la clinique parodontale. Afin d'évaluer la fiabilité des notes du juge, le juge et l'évaluateur ont examiné l'odeur de la bouche d'un certain nombre de participants à l'étude sans connaître le score de l'autre. Une corrélation statistiquement significative a été trouvée entre les scores (rho de Spearman = 0,64 pour l'odeur de l'air de toute la bouche, p < 0,001) (S.A.C.M.O.T., 2002). Il convient de noter que seules les évaluations du juge ont été utilisées dans l'analyse des données.

Les sujets ont été désignés comme halitose positifs (+) lorsque soit le score organoleptique de l'air buccal entier était de deux ou plus, et/ou les lectures du Halimeter® dépassaient 140 p.p.b.

Réaction en chaîne par polymérase en temps réel :

L'ADN de la souche W50 de P. gingivalis et de la souche ATCC 10953 de F. nucleatum a été préparé à la Dental School de l'Université de Glasgow en suivant le protocole standard. En bref, P. gingivalis et F. nucleatum ont été cultivés sur une gélose anaérobie exigeante et récoltés après trois à sept jours. Les organismes d'une seule plaque de gélose ont été récoltés avec des écouvillons et dispersés dans du PBS contenant 0,1 mM d'EDTA disodique (PBSE). Après un lavage dans du PBS, ils ont été remis en suspension dans 1 ml d'eau déminéralisée stérile et aliquotés dans deux microcapsules à vis de 1,5 ml. L'ADN a été extrait des organismes en plaçant les tubes dans un bain d'eau bouillante pendant dix minutes. Le lysat a été mélangé avec un volume égal de phénol : chloroforme : alcool isoamylique (25:24:1 ; v/v/v) pendant cinq minutes. Après centrifugation (13 000 tr/min, 10 min), la phase supérieure aqueuse de chaque préparation a été transférée dans un nouveau tube et mélangée avec un volume de chloroforme : alcool isoamylique (24 : 1) pendant cinq minutes. Après centrifugation (13 000 tr/min, 10 min), la phase supérieure aqueuse de chaque préparation a été transférée dans un nouveau tube et 0,1 volume de solution d'acétate de sodium 4,5 M (pH 5,4) et deux volumes d'éthanol ont été ajoutés. L'ADN a été précipité pendant une nuit à -20°C. L'ADN a été culotté par centrifugation (13 000 tr/min, 10 min) lavé séquentiellement dans 1 ml d'éthanol à 70 %, d'éthanol à 95 % et laissé presque sécher. L'ADN a ensuite été dissous dans 100 ul d'eau. La concentration et la pureté de l'acide nucléique ont été mesurées à une longueur d'onde de 260 nanomètres et le rapport de l'absorbance à 260 et 280 nanomètres a été mesuré à l'aide d'une cuvette en quartz stérile dans un spectrophotomètre.

Un test PCR en temps réel utilisant le système TaqMan (Yoshida et al., 2003) a été utilisé dans la présente étude pour l'analyse quantitative de l'ARNr 16S de F. nucleatum et P. gingivalis dans les revêtements de la langue. Des lysats d'échantillons ont été préparés en faisant bouillir l'aliquote pendant 10 minutes après avoir percé le capuchon avec une fine aiguille stérile pour empêcher l'accumulation de pression. La PCR a été réalisée à un volume total de 20 μl à l'aide du kit Light CyclerTM Fast Start DNA Master Hybridization Probes (Roche Diagnostics, Manheim, Allemagne), 500 nM d'amorces sens et antisens, 200 nM de sonde et 5 μl de cellules lysées. Les amorces spécifiques à l'espèce et les sondes TaqMan utilisées sont présentées dans le tableau 1. La spécificité des produits amplifiés et donc des amorces a été confirmée précédemment (Kato et al., 2005 ; Yoshida et al., 2003). L'amplification et la détection ont été réalisées avec le système de détection de séquence LightCycler (Roche Diagnostics, Manheim, Allemagne) avec les conditions de cycle suivantes, identiques pour les deux tests : 95 C pendant 10 min, puis 45 cycles de 95 C pendant 10 sec, 58 C pendant 25 sec et une élongation finale. à 40C pendant 30sec. Une courbe standard a été tracée pour chaque test en utilisant des dilutions en série de quantités connues d'ADN génomique purifié de chaque organisme test.

Méthodes statistiques:

L'hypothèse statistique nulle selon laquelle il n'y a pas d'association entre la détection de l'halitose (présence ou absence) et l'état parodontal chez les sujets non-fumeurs a été testée par régression logistique. Étant donné que la taille de chaque groupe clinique était supérieure à 20 et que le nombre minimum de sujets halitose positifs par groupe clinique dépassait dix, à l'exception du groupe sain (neuf sujets halitose positifs), la taille de l'échantillon a été jugée adéquate pour l'application de cette statistique. modèle (Peduzzi et al. 1996).

L'association entre la présence ou l'absence d'halitose et les indices cliniques (PI, CPD, CAL, BOP, sites > 5 mm CPD, WTCI) a été examinée à l'aide d'une régression logistique. Le coefficient de corrélation rho de Spearman a estimé l'association entre les variables d'échelle ainsi que la concordance entre les scores des deux évaluateurs d'odeurs. L'hypothèse de normalité des variables d'échelle a été testée par le test de Shapiro Wilk. Les comparaisons entre les groupes ont été effectuées à l'aide du test de Kruskal-Wallis, tandis que les comparaisons par paires ont été effectuées par le test de Mann-Whitney avec l'ajustement de Bonferroni de l'erreur de type I.

L'analyse des données a été réalisée à l'aide du logiciel SPSS version 16.0 et le niveau de signification statistique a été fixé à p<0,05.