구강 악취 및 치주 질환 관련 매개변수

문헌에서 치주염이 구강 악취와 관련이 있는지에 대한 논쟁이 존재하며 이 연구는 치주 질환이 구강 악취 관련 매개변수와 관련되는 방식을 이해하려고 시도합니다.

임상 프로토콜:

78명의 전신적으로 건강한 비흡연자가 그리스 테살로니키의 아리스토텔레스 대학교 치주과에서 구강 구취에 대해 검사를 받았습니다. 이들은 구취를 호소하지 않는 피험자였습니다. 적합성에 대한 초기 스크리닝과 테살로니키의 아리스토텔레스 대학교 치과대학 윤리위원회에서 승인한 서명된 정보에 입각한 동의를 얻은 후 플라크 지수(PI), 임상 탐침 깊이(CPD), 임상 부착물을 포함하여 전체 구강 치주 차트를 기록했습니다. 수동 치주 탐침(Hu-Friedy XP-23/QW)을 사용하여 치아당 6개 부위에서 탐침시 출혈(BOP) 수준(CAL) 및 출혈(BOP). 임상적 포함 기준을 충족한 피험자는 만성 치주염(N=28), 만성 전신 치은염(N=23) 또는 건강한 개인(27)으로 분류되었고 추가 임상 및 미생물학적 모니터링을 받았습니다.

혀 코팅 평가:

Winkel 혀 코팅 지수(Winkel et al., 2003)는 혀의 등을 육분의로 나누어 육안으로 결정했습니다. 예금 금액에 따라 각 육분의에 0점에서 2점 사이의 점수를 부여하고 이 점수를 합산하여 0점에서 12점까지의 범위를 제공합니다.

혀 샘플 수집:

실시간 PCR을 통해 추정 치주병균인 Porphyromonas gingivalis와 Fusobacterium nucleatum의 정량 분석을 위해 설후부에서 검체를 채취하였다.

관능 평가 및 주로 혀 냄새 평가와 함께 탐침 및 혀 샘플링에 대한 출혈의 간섭을 피하기 위해 피험자는 구강 악취에 대해 하루 중 같은 시간에 4일 이내에 두 번째 방문으로 소환되었습니다. 평가. 이 짧은 시간 간격 내에서 참가자들은 구취 평가가 수행되는 다음 방문 48시간 전을 제외하고 일상적인 식습관과 구강 위생 습관을 바꾸지 않도록 요청받았습니다(Roldán et al., 2003; Donaldson et al., 2007). . 음식과 음료 소비 및 구강 위생 습관에 관한 서면 지침이 각 참가자에게 제공되었습니다. 구체적으로 매운 음식, 양파, 마늘, 술, 구강청결제는 검사 전에는 피했다. 평가 아침에 커피, 박하, 껌, 구강 위생 관행, 향이 나는 화장품 또는 애프터 쉐이브 로션을 피했습니다. 악취 평가 최소 2시간 전에 물의 소비 및 물로 구강 헹굼이 허용되었습니다. 유사한 방식으로, 구취에 대한 관능 평가를 수행한 판사는 검사를 시작하기 전 24시간 동안 참가자와 동일한 지시를 따랐습니다.

구강 악취 평가:

• Halimeter®(Halimeter® RH-17, Interscan Corporation, Chatsworth, CA, USA)를 사용하여 휘발성 황화물 화합물(VSC)의 농도를 ppb(parts per billion) 단위로 측정했습니다(Rosenberg et al., 1991). 평가는 방의 온도와 습도의 일일 변동성을 최소화하기 위해 클리닉의 동일한 치과용 의자에서 항상 10:00-12:00 사이에 수행되었습니다(Liu et al., 2006).
• 0에서 5까지의 관능 평가(ORG)(Rosenberg et al., 1991)는 다음 매개변수의 냄새를 평가했습니다.

전체 구강 공기(ORG1) - 피험자는 튜브의 다른 쪽 끝에서 호흡 냄새를 평가하는 악취 심사관과 눈을 마주치지 않도록 스크린을 통해 20cm 길이의 튜브로 부드럽게 숨을 내쉬도록 요청받았습니다(Murata et al., 2002). ; 혀의 앞쪽 영역(ORG2) - 피험자들에게 손목을 핥고 냄새를 평가하기 전에 해당 영역이 마를 때까지 몇 초 동안 기다리도록 요청받았습니다. 설후부(ORG3) - 플라스틱 스푼을 사용하여 표준화된 방식으로 설측 후방에서 재료를 채취했습니다. 코 공기 - 구취와 관련이 있을 수 있는 구강 외 원인을 배제하기 위해 손가락으로 반대쪽 콧구멍을 막은 후 한쪽 콧구멍으로 숨을 내쉬도록 하였다.

보정된 단일 "검사자"는 치주 측정 및 Halimeter® 판독값을 기록하는 반면, 보정된 한 명의 "판단자"는 구취의 관능 평가를 수행했습니다. 모든 참가자는 동일한 심사관과 심사관이 평가했습니다. 편향되지 않은 데이터 수집을 보장하기 위해 악취 심사관은 Halimeter® 측정 및 개인의 임상 상태에 대해 눈이 멀었습니다. 이 조사 이전과 조사 중에 악취 심판관과 추가적인 악취 "평가자"가 25에서 6075ppm의 강도를 가진 광범위한 n-부탄올 용액에 대해 반복적으로 표준화되었습니다(Nachnani et al., 2005; Saad et al., 2005), 치주과에 다니는 환자들의 입냄새에 대해서도 연구하였다. 심사위원 평가의 신뢰성을 평가하기 위해 심사위원과 평가자는 서로의 점수를 알지 못한 채 다수의 연구 참여자의 입 냄새를 조사했습니다. 점수 사이에 통계적으로 유의한 상관관계가 발견되었습니다(입 안 전체 냄새에 대한 Spearman's rho=0.64, p<0.001)(S.A.C.M.O.T., 2002). 데이터 분석에는 판사의 평가만 사용되었다는 점에 유의해야 합니다.

입 전체 공기의 관능 점수가 2점 이상이거나 Halimeter® 판독값이 140ppb를 초과하는 경우 피험자를 구취 양성(+)으로 지정했습니다.

실시간 중합효소 연쇄 반응:

P. gingivalis 균주 W50 및 F. nucleatum 균주 ATCC 10953의 DNA는 표준 프로토콜에 따라 Glasgow 대학의 Dental School에서 준비되었습니다. 간단히 말해서, P. gingivalis 및 F. nucleatum은 까다로운 혐기성 한천에서 재배되었으며 3~7일 후에 수확되었습니다. 단일 한천 플레이트의 유기체를 면봉으로 수확하고 0.1mM 이나트륨 EDTA(PBSE)가 포함된 PBS에 분산시켰습니다. PBS로 1회 세척한 후 멸균 탈이온수 1ml에 재현탁하고 1.5ml 스크류 탑 마이크로캡 2개에 분주했습니다. 튜브를 끓는 수조에 10분 동안 두어 유기체에서 DNA를 추출했습니다. 용해물을 동량의 페놀:클로로포름:이소아밀 알코올(25:24:1; v/v/v)과 5분 동안 혼합했습니다. 원심분리(13000rpm, 10분) 후, 각 제제의 상부 수성 상을 새로운 튜브로 옮기고 1부피의 클로로포름:이소아밀 알코올(24:1)과 5분 동안 혼합했습니다. 원심분리(13000rpm, 10분) 후 각 제제의 수성 상부 상을 새로운 튜브로 옮기고 0.1 부피의 4.5M 아세트산나트륨 용액(pH 5.4)과 2 부피의 에탄올을 첨가했습니다. DNA는 -20oC에서 밤새 침전되었습니다. DNA를 원심분리(13000rpm, 10분)에 의해 펠릿화하고 1mL의 70% 에탄올, 95% 에탄올로 순차적으로 세척하고 거의 건조시켰다. 그런 다음 DNA를 100µl 물에 녹였습니다. 핵산 농도 및 순도는 260 nm의 파장에서 측정하였고 260 및 280 nm에서의 흡광도 비율은 분광 광도계에서 멸균 석영 큐벳을 사용하여 측정하였다.

TaqMan 시스템(Yoshida et al., 2003)을 사용한 실시간 PCR 분석은 혀 코팅에서 F. nucleatum 및 P. gingivalis의 16S rRNA의 정량 분석을 위해 현재 연구에서 사용되었습니다. 압력 상승을 방지하기 위해 미세 멸균 바늘로 뚜껑을 뚫은 후 분취량을 10분 동안 끓여 샘플의 용해물을 준비했습니다. PCR은 Light Cycler™ Fast Start DNA Master Hybridization Probes 키트(Roche Diagnostics, Manheim, Germany), 각각 500nM의 센스 및 안티센스 프라이머, 200nM 프로브 및 5μl의 용해된 세포를 사용하여 총 부피 20μl에서 수행되었습니다. 사용된 종 특이적 프라이머 및 TaqMan 프로브는 표 1에 나와 있습니다. 증폭된 산물과 이에 따른 프라이머의 특이성은 이전에 확인되었습니다(Kato et al., 2005; Yoshida et al., 2003). 증폭 및 검출은 LightCycler Sequence Detection System(Roche Diagnostics, Manheim, Germany)을 사용하여 다음 주기 조건을 사용하여 수행되었으며, 두 분석에 대해 동일합니다: 95C에서 10분 동안, 그리고 95C에서 10초 동안, 58C에서 25초 동안 45주기 및 최종 신장 40C에서 30초 동안. 알려진 양의 각 테스트 유기체의 정제된 게놈 DNA의 연속 희석액을 사용하여 각 분석에 대한 표준 곡선을 그렸습니다.

통계적 방법:

비흡연자에서 구취 검출(존재 또는 부재)과 치주 상태 사이에 연관성이 없다는 통계적 귀무 가설을 로지스틱 회귀로 테스트했습니다. 각 임상 집단의 규모가 20명 이상이었고 임상 집단당 최소 구취 양성 대상자 수가 건강한 집단(구취 양성 대상자 9명)을 제외하고 10명을 초과했기 때문에 표본 크기는 이 통계를 적용하기에 적합하다고 판단되었습니다. 모델(Peduzzi et al. 1996).

구취유무와 임상지표(PI, CPD, CAL, BOP, site > 5mm CPD, WTCI)와의 연관성을 로지스틱 회귀분석을 이용하여 조사하였다. Spearman의 rho 상관 계수는 척도 변수 간의 연관성과 두 냄새 평가자의 점수 간의 일치도를 추정했습니다. 척도 변수에 대한 정규성 가정은 Shapiro Wilk 테스트로 테스트되었습니다. 그룹 간 비교는 Kruskal-Wallis 테스트를 사용하여 수행되었으며, 쌍별 비교는 Mann-Whitney 테스트와 Bonferroni의 유형 I 오류 조정으로 수행되었습니다.

데이터 분석은 SPSS 버전 16.0 소프트웨어를 사용하여 수행하였으며, 통계적 유의수준은 p<0.05로 설정하였다.