Orale slechte geur en parodontitis-gerelateerde parameters

Er bestaat in de literatuur discussie over de vraag of parodontitis verband houdt met orale onwelriekende geur en deze studie probeert de manier te begrijpen waarop parodontitis wordt geassocieerd met orale onwelriekende parameters.

Klinisch protocol:

Achtenzeventig systemisch gezonde niet-rokers werden gescreend op orale halitose in de afdeling Parodontologie, Aristoteles Universiteit van Thessaloniki, Griekenland. Dit waren niet-halitose klagende proefpersonen. Na een eerste screening op geschiktheid en het verkrijgen van een ondertekende geïnformeerde toestemming goedgekeurd door de Ethische Commissie van de Tandheelkundige School, Aristoteles Universiteit van Thessaloniki, werd een parodontale kaart van de volledige mond opgenomen, inclusief plaque-index (PI), klinische sondediepte (CPD), klinische hechting niveaus (CAL) en bloeding bij sonderen (BOP) op zes locaties per tand met behulp van een handmatige parodontale sonde (Hu-Friedy XP-23/QW). De proefpersonen die voldeden aan de klinische inclusiecriteria werden geclassificeerd als chronische parodontitis (N=28), chronische gegeneraliseerde gingivitis (N=23) of gezonde individuen (27) en werden verder klinisch en microbiologisch gevolgd.

Beoordeling tongcoating:

De Winkel Tongue Coating Index (Winkel et al., 2003) werd visueel bepaald door het dorsum van de tong te verdelen in sextanten. Aan elke sextant werd een score tussen nul en twee gegeven op basis van het aantal stortingen en deze scores werden opgeteld, wat een totaal opleverde van nul tot 12.

Verzameling van tongmonster:

Er werd een monster genomen van de achterkant van de tongrug voor kwantitatieve analyse van twee vermeende parodontale pathogenen, Porphyromonas gingivalis en Fusobacterium nucleatum, door middel van real-time PCR.

Om interferentie van bloedingen bij sonderen en tongbemonstering met de organoleptische beoordelingen en voornamelijk met de evaluatie van de tonggeur te voorkomen, werden de proefpersonen teruggeroepen voor een tweede bezoek op hetzelfde tijdstip van de dag en binnen een periode van vier dagen voor orale onwelriekende geur. onderzoek. Binnen dit korte tijdsinterval werd de deelnemers gevraagd om hun routinematige eet- en mondhygiënegewoonten niet te veranderen, behalve 48 uur voorafgaand aan het volgende bezoek wanneer de halitosebeoordelingen werden uitgevoerd (Roldán et al., 2003; Donaldson et al., 2007). . Aan elke deelnemer werden schriftelijke instructies gegeven met betrekking tot de consumptie van eten en drinken en gewoonten op het gebied van mondhygiëne. Meer in detail werden gekruid voedsel, ui, knoflook, alcohol en mondwater vermeden 48 voorafgaand aan het onderzoek. Op de ochtend van de evaluatie werden koffie, pepermuntjes, kauwgom, mondhygiënepraktijken, geparfumeerde cosmetica of aftershavelotion vermeden. Consumptie van water en orale spoelingen met water waren toegestaan ​​ten minste twee uur voorafgaand aan de geurbeoordeling. Op een vergelijkbare manier volgde de rechter die de organoleptische beoordelingen van orale slechte geur uitvoerde dezelfde instructies als de deelnemers gedurende 24 uur voordat hij de onderzoeken deed.

Orale slechte geurbeoordeling:

• De Halimeter® (Halimeter® RH-17, Interscan Corporation, Chatsworth, CA, VS) werd gebruikt om de concentratie van vluchtige sulfideverbindingen (VSC) in delen per miljard (p.p.b.) te meten (Rosenberg et al., 1991). De beoordelingen werden altijd uitgevoerd tussen 10.00 en 12.00 uur op dezelfde tandartsstoel in de kliniek om dagelijkse variaties in de temperatuur en vochtigheid van de kamer te minimaliseren (Liu et al., 2006);
• Organoleptische beoordelingen (ORG) variërend van nul tot vijf (Rosenberg et al., 1991) beoordeelden de geur van de volgende parameters:

Hele mondlucht (ORG1) - proefpersonen werd gevraagd om zachtjes uit te ademen in een 20 cm lange buis door een scherm, om oogcontact met de geurrechter te vermijden, die de ademgeur aan het andere uiteinde van de buis evalueerde (Murata et al., 2002) ; Voorste deel van het dorsum van de tong (ORG2) - proefpersonen werd gevraagd hun polsen te likken en een paar seconden te wachten om het gebied te laten drogen voordat de geur werd beoordeeld; Achterste tonggebied (ORG3) - materiaal werd op een gestandaardiseerde manier van de achterkant van de linguale dorsum geoogst met behulp van een plastic lepel; Neuslucht - proefpersonen werd gevraagd door één neusgat uit te ademen nadat ze met hun vinger het andere neusgat hadden afgedekt om extra-orale oorzaken uit te sluiten die mogelijk verband houden met een slechte adem.

Een gekalibreerde enkele "examinator" registreerde de parodontale metingen en Halimeter®-aflezingen, terwijl een gekalibreerde "rechter" de organoleptische beoordelingen van halitose uitvoerde. Alle deelnemers werden beoordeeld door dezelfde examinator en jurylid. Om onbevooroordeelde gegevensverzameling te verzekeren, werd de geurbeoordelaar geblindeerd met betrekking tot de Halimeter®-metingen en de klinische status van het individu. Voorafgaand aan en tijdens dit onderzoek werden de geurbeoordelaar en een aanvullende geurbeoordelaar herhaaldelijk gestandaardiseerd tegen een breed scala aan n-butanoloplossingen met intensiteiten van 25 tot 6075 delen per miljoen (Nachnani et al., 2005; Saad et al., 2005) en ook op de mondgeur van patiënten die de parodontale kliniek bezoeken. Om de betrouwbaarheid van de beoordelingen van de beoordelaar te beoordelen, onderzochten de beoordelaar en de beoordelaar de mondgeur van een aantal deelnemers aan het onderzoek zonder van elkaars score op de hoogte te zijn. Er werd een statistisch significante correlatie gevonden tussen de scores (Spearman's rho=0,64 voor de geur van hele mondlucht, p<0,001) (S.A.C.M.O.T., 2002). Opgemerkt moet worden dat alleen de beoordelingen van de rechter werden gebruikt bij de gegevensanalyse.

Proefpersonen werden aangemerkt als halitose-positief (+) wanneer ofwel de organoleptische score van de gehele mondlucht twee of meer was, en/of de aflezingen van de Halimeter® hoger waren dan 140 p.p.b.

Realtime polymerasekettingreactie:

Het DNA van P. gingivalis stam W50 en F. nucleatum stam ATCC 10953 werd volgens het standaardprotocol bereid op de Dental School, University of Glasgow. In het kort werden P. gingivalis en F. nucleatum gekweekt op kieskeurige anaërobe agar en na drie tot zeven dagen geoogst. De organismen van een enkele agarplaat werden geoogst met wattenstaafjes en gedispergeerd in PBS dat 0,1 mM dinatrium-EDTA (PBSE) bevatte. Na een keer wassen in PBS werden ze opnieuw gesuspendeerd in 1 ml steriel gedeïoniseerd water en verdeeld in twee 1,5 ml microcaps met schroefdop. DNA werd uit de organismen geëxtraheerd door de buisjes tien minuten in een kokendwaterbad te plaatsen. Het lysaat werd gemengd met een gelijk volume fenol:chloroform:isoamylalcohol (25:24:1; v/v/v) gedurende vijf minuten. Na centrifugatie (13000 rpm, 10 min) werd de waterige bovenste fase van elk preparaat overgebracht naar een verse buis en gemengd met één volume chloroform:isoamylalcohol (24:1) gedurende vijf minuten. Na centrifugatie (13000 rpm, 10 min) werd de waterige bovenste fase van elk preparaat overgebracht naar een verse buis en 0,1 volume 4,5 M natriumacetaatoplossing (pH 5,4) en twee volumes ethanol werden toegevoegd. DNA werd een nacht bij -20°C geprecipiteerd. Het DNA werd gepelleteerd door centrifugatie (13.000 rpm, 10 min), achtereenvolgens gewassen in 1 ml 70% ethanol, 95% ethanol en men liet het bijna drogen. Het DNA werd vervolgens opgelost in 100 µl water. De nucleïnezuurconcentratie en zuiverheid werd gemeten bij een golflengte van 260 nanometer en de verhouding van de absorptie bij 260 en 280 nanometer werd gemeten met behulp van een steriele kwartscuvette in een spectrofotometer.

Een real-time PCR-test met behulp van het TaqMan-systeem (Yoshida et al., 2003) werd gebruikt in de huidige studie voor de kwantitatieve analyse van het 16S-rRNA van F. nucleatum en P. gingivalis in tongcoatings. Lysaten van monsters werden bereid door het aliquot gedurende 10 minuten te koken na het doorprikken van de dop met een fijne steriele naald om drukopbouw te voorkomen. PCR werd uitgevoerd met een totaal volume van 20 μl met behulp van de Light CyclerTM Fast Start DNA Master Hybridization Probes-kit (Roche Diagnostics, Manheim, Duitsland), 500 nM sense- en antisense-primers, 200 nM probe en 5 μl gelyseerde cellen. De gebruikte soortspecifieke primers en TaqMan-sondes worden weergegeven in tabel 1. De specificiteit van de geamplificeerde producten en dus van de primers werd eerder bevestigd (Kato et al., 2005; Yoshida et al., 2003). Amplificatie en detectie werden uitgevoerd met het LightCycler Sequence Detection System (Roche Diagnostics, Manheim, Duitsland) met de volgende cyclusomstandigheden, identiek voor beide assays: 95 °C gedurende 10 minuten en vervolgens 45 cycli van 95 °C gedurende 10 seconden, 58 °C gedurende 25 seconden en een uiteindelijke verlenging bij 40C gedurende 30 sec. Voor elke assay werd een standaardkromme uitgezet door gebruik te maken van seriële verdunningen van bekende hoeveelheden gezuiverd genomisch DNA van elk testorganisme.

Statistische methoden:

De statistische nulhypothese dat er geen verband bestaat tussen halitosedetectie (aan- of afwezigheid) en parodontale status bij niet-rokende proefpersonen werd getoetst door middel van logistische regressie. Aangezien de grootte van elke klinische groep groter was dan 20 en het minimum aantal halitose-positieve proefpersonen per klinische groep meer dan tien was, met uitzondering van de gezonde groep (negen halitose-positieve proefpersonen), werd de steekproefomvang voldoende geacht voor de toepassing van deze statistische model (Peduzzi et al. 1996).

De associatie tussen aan- of afwezigheid van halitose en klinische indices (PI, CPD, CAL, BOP, plaatsen > 5 mm CPD, WTCI) werd onderzocht met behulp van logistische regressie. De rho-correlatiecoëfficiënt van Spearman schatte de associatie tussen schaalvariabelen en ook de overeenkomst tussen de scores van de twee geurbeoordelaars. De aanname van normaliteit voor schaalvariabelen werd getest door de Shapiro Wilk-test. Vergelijkingen tussen groepen werden uitgevoerd met behulp van de Kruskal-Wallis-test, terwijl paarsgewijze vergelijkingen werden uitgevoerd met de Mann-Whitney-test met Bonferroni's aanpassing van type I-fout.

De analyse van gegevens werd uitgevoerd met behulp van de software SPSS versie 16.0 en het niveau van statistische significantie werd vastgesteld op p<0,05.