Oral illaluktande parametrar och parodontala sjukdomar

Det finns en debatt i litteraturen om huruvida parodontit är kopplat till oral illaluktande lukt och denna studie försöker förstå hur parodontit sjukdom är associerad med oral illaluktande parametrar.

Kliniskt protokoll:

Sjuttioåtta systemiskt friska icke-rökare screenades för oral halitosis vid avdelningen för parodontologi, Aristoteles universitet i Thessaloniki, Grekland. Dessa var icke-halitos-klagande ämnen. Efter inledande screening för lämplighet och erhållande av ett undertecknat informerat samtycke godkänt av den etiska kommittén vid tandläkarhögskolan, Aristoteles universitet i Thessaloniki, registrerades ett parodontalt kartläggning av hela munnen inklusive plackindex (PI), kliniskt sonderingsdjup (CPD), klinisk anknytning nivåer (CAL) och blödning vid sondering (BOP) på sex ställen per tand med hjälp av en manuell parodontal sond (Hu-Friedy XP-23/QW). De försökspersoner som uppfyllde de kliniska inklusionskriterierna klassificerades som kronisk parodontit (N=28), kronisk generaliserad gingivit (N=23) eller friska individer (27) och övervakades vidare kliniskt och mikrobiologiskt.

Bedömning av tungbeläggning:

Winkel Tongue Coating Index (Winkel et al., 2003) bestämdes visuellt genom att dela upp tungans rygg i sextanter. En poäng mellan noll och två gavs till varje sextant enligt mängden avsättningar och dessa poäng lades till vilket gav en total från noll till 12.

Samling av tungprov:

Ett prov togs från baksidan av tungryggen för kvantitativ analys av två förmodade parodontala patogener, Porphyromonas gingivalis och Fusobacterium nucleatum, genom realtids-PCR.

För att undvika störningar av blödning vid sondering och tungprovtagning med de organoleptiska bedömningarna och i första hand med utvärderingen av tunglukten, återkallades försökspersonerna vid ett andra besök vid samma tidpunkt på dagen och inom en period av fyra dagar för oral lukt. bedömning. Inom detta korta tidsintervall ombads deltagarna att inte ändra sina rutinmässiga kost- och munhygienvanor förutom 48 timmar före nästa besök då bedömningarna av halitosis utfördes (Roldán et al., 2003; Donaldson et al., 2007) . Skriftliga instruktioner gavs till varje deltagare angående mat- och dryckkonsumtion och munhygienvanor. Mer detaljerat undvek kryddig mat, lök, vitlök, alkohol och munvatten 48 före undersökningen. På utvärderingsmorgonen undvek man kaffe, mynta, tuggummi, munhygien, doftande kosmetika eller rakvatten. Förbrukning av vatten och orala sköljningar med vatten tilläts minst två timmar före luktbedömningen. På liknande sätt följde domaren som utförde de organoleptiska bedömningarna av oral lukt samma instruktioner som deltagarna i 24 timmar innan de genomförde undersökningarna.

Oral illaluktsbedömning:

• Halimeter® (Halimeter® RH-17, Interscan Corporation, Chatsworth, CA, USA) användes för att mäta koncentrationen av flyktiga sulfidföreningar (VSC) i delar per miljard (p.p.b.) (Rosenberg et al., 1991). Bedömningarna utfördes alltid mellan 10.00-12.00 på samma tandläkarstol på kliniken för att minimera dagliga variationer i rummets temperatur och luftfuktighet (Liu et al., 2006);
• Organoleptiska bedömningar (ORG) från noll till fem (Rosenberg et al., 1991) bedömde lukten av följande parametrar:

Hel munluft (ORG1) - försökspersonerna ombads att andas ut försiktigt in i ett 20 cm långt rör genom en skärm, för att undvika ögonkontakt med luktdomaren, som utvärderade andedräkt i den andra änden av röret (Murata et al., 2002) ; Främre delen av tungryggen (ORG2) - försökspersonerna ombads att slicka sina handleder och vänta ett par sekunder för att låta området torka ut innan lukten bedömdes; Bakre delen av tungan (ORG3) - material skördades från den bakre delen av lingualryggen på ett standardiserat sätt med användning av en plastsked; Näsluft - försökspersonerna ombads att andas ut genom ena näsborren efter att ha täckt den motsatta näsborren med fingret för att utesluta extraorala orsaker som kan vara relaterade till dålig andedräkt.

En kalibrerad singel "granskare" registrerade parodontala mätningar och Halimeter®-avläsningar, medan en kalibrerad "domare" utförde de organoleptiska bedömningarna av halitos. Alla deltagare bedömdes av samma examinator och domare. För att säkerställa en opartisk datainsamling förblindades luktdomaren angående Halimeter®-mätningarna och individens kliniska status. Före och under denna undersökning standardiserades luktdomaren och en ytterligare lukt-"utvärderare" upprepade gånger mot ett brett utbud av n-butanollösningar med intensiteter från 25 till 6075 ppm (Nachnani et al., 2005; Saad et al., 2005) och även om munlukten hos patienter som går på parodontitkliniken. För att bedöma tillförlitligheten av domarens betyg undersökte domaren och utvärderaren munlukten hos ett antal studiedeltagare utan att vara medvetna om varandras poäng. En statistiskt signifikant korrelation hittades mellan poängen (Spearman's rho=0,64 för lukten av helmunsluft, p<0,001) (S.A.C.M.O.T., 2002). Det bör noteras att endast domarens bedömningar användes vid dataanalys.

Försökspersoner betecknades som halitospositiva (+) när antingen den organoleptiska poängen för hela munluften var två eller mer, och/eller avläsningarna av Halimeter® översteg 140 p.p.b.

Realtidspolymeraskedjereaktion:

DNA från P. gingivalis stam W50 och F. nucleatum stam ATCC 10953 framställdes vid Dental School, University of Glasgow enligt standardprotokollet. Kortfattat odlades P. gingivalis och F. nucleatum på kräsen anaerob agar och skördades efter tre till sju dagar. Organismerna från en enda agarplatta skördades med svabbar och dispergerades i PBS innehållande 0,1 mM dinatrium-EDTA (PBSE). Efter en tvättning i PBS återsuspenderades de i 1 ml sterilt avjoniserat vatten och delades upp i två 1,5 ml skruvlocksmikrokapslar. DNA extraherades från organismerna genom att rören placerades i ett kokande vattenbad i tio minuter. Lysatet blandades med en lika stor volym fenol: kloroform: isoamylalkohol (25:24:1; v/v/v) under fem minuter. Efter centrifugering (13000 rpm, 10 min) överfördes den vattenhaltiga övre fasen från varje beredning till ett nytt rör och blandades med en volym kloroform: isoamylalkohol (24:1) under fem minuter. Efter centrifugering (13000 rpm, 10 min) överfördes den vattenhaltiga övre fasen från varje beredning till ett nytt rör och 0,1 volym 4,5 M natriumacetatlösning (pH 5,4) och två volymer etanol tillsattes. DNA fälldes ut över natten vid -20°C. DNA:t pelleterades genom centrifugering (13 000 rpm, 10 min) tvättades sekventiellt i 1 ml 70 % etanol, 95 % etanol och fick nästan torka. DNA:t löstes sedan i 100 ul vatten. Nukleinsyrakoncentrationen och renheten mättes vid en våglängd av 260 nanometer och förhållandet mellan absorbansen vid 260 och 280 nanometer mättes med användning av en steril kvartskyvett i en spektrofotometer.

En realtids-PCR-analys med TaqMan-systemet (Yoshida et al., 2003) användes i den aktuella studien för kvantitativ analys av 16S rRNA från F. nucleatum och P. gingivalis i tungbeläggningar. Lysat av prover framställdes genom att koka alikvoten i 10 minuter efter punktering av locket med en fin steril nål för att förhindra tryckuppbyggnad. PCR utfördes med en total volym av 20 μl med Light CyclerTM Fast Start DNA Master Hybridization Probes-kit (Roche Diagnostics, Manheim, Tyskland), 500 nM vardera av sense- och antisens-primrar, 200 nM sond och 5 μl lyserade celler. De artspecifika primrarna och TaqMan-proberna som används visas i tabell 1. Specificiteten för de amplifierade produkterna och därför för primrarna har bekräftats tidigare (Kato et al., 2005; Yoshida et al., 2003). Amplifiering och detektion utfördes med LightCycler Sequence Detection System (Roche Diagnostics, Manheim, Tyskland) med följande cykelförhållanden, identiska för båda analyserna: 95C i 10 minuter och sedan 45 cykler av 95C i 10 sekunder, 58C i 25 sekunder och en slutlig förlängning vid 40C i 30 sek. En standardkurva ritades upp för varje analys genom att använda serieutspädningar av kända kvantiteter av renat genomiskt DNA från varje testorganism.

Statistiska metoder:

Den statistiska nollhypotesen att det inte finns något samband mellan upptäckt av halitosis (närvaro eller frånvaro) och periodontal status hos icke-rökare testades genom logistisk regression. Eftersom storleken på varje klinisk grupp var över 20 och det lägsta antalet halitospositiva försökspersoner per klinisk grupp översteg tio, med undantag för den friska gruppen (nio halitosispositiva försökspersoner), ansågs provstorleken vara tillräcklig för tillämpningen av denna statistiska modell (Peduzzi et al. 1996).

Sambandet mellan halitosis närvaro eller frånvaro och kliniska index (PI, CPD, CAL, BOP, platser > 5 mm CPD, WTCI) undersöktes med hjälp av logistisk regression. Spearmans rho-korrelationskoefficient uppskattade sambandet mellan skalvariabler och även överensstämmelsen mellan poängen för de två luktbedömarna. Antagandet om normalitet för skalvariabler testades med Shapiro Wilk-testet. Jämförelser mellan grupper utfördes med Kruskal-Wallis-testet, medan parvisa jämförelser utfördes med Mann-Whitney-testet med Bonferronis justering av typ I-fel.

Analysen av data utfördes med programvaran SPSS version 16.0 och nivån för statistisk signifikans sattes till p<0,05.