Kandidatgenscreening for opmærksomhedsunderskud/hyperaktiv lidelse (ADHD)

Kilde: Eksempelbank fra Xijing Hospital og Børnehospital tilknyttet Soochow University; Prøveform: Fuldblod; Estimeret antal prøver: 100 patienter med ADHD og alder, kønsmatchede raske kontroller; Kriterier for udelukkelse af tilfælde: alle former for neuropsykiatriske lidelser, IQ-værdi på mindre end 70;

Undersøgelsesprotokol:

1. Brug af Qiagen kit til at ekstrahere det genomiske DNA fra 200 mikroliter blod. (1) smelt frosset blod ved stuetemperatur; (2) tag blodet på 0,2 ml ind i et sterilt antikoagulationscentrifugerør, tilsæt et lige så stort volumen PBS-phosphatbuffer, efter fuldstændig blanding af 12000 rpm centrifugering i 5 minutter, kassér supernatanten; (3) 66,7 L STE 2,4 L, 20% SDS, 37°C vandbad 1 time; (4) protease K plus 1 20 mg/ml blanding, 55°C vandbad-fordøjelse natten over (10 ~ 14 timer); (5) de fordøjede prøver behandlet med Tris mættet phenol, ryst godt, 12000 rpm centrifugal 10 min; (6) den øvre vandige fase til et sterilt centrifugerør; tilsætning af volumen Tris mættet phenol, ryst godt, 12000 rpm centrifugal 10 min; (7) den øvre vandige fase blev overført til et andet sterilt centrifugerør, og et lige så stort volumen phenol blev tilsat: chloroform: isoamylalkohol (25:24:1). Oscillationen af ​​hvirvelen blev fuldstændig blandet, og 12000 rpm blev centrifugeret til 10 min; (8) den øvre vandige fase blev overført til et andet sterilt centrifugerør, og et lige så stort volumen chloroform blev tilsat: iso-amylalkohol (24:1), som blev fuldstændig vibreret og blandet med 12000 rpm centrifugering 10 min; (9) overfør supernatanten til et andet sterilt centrifugerør; tilsætning af 2 gange volumen ethanol, volumenniveauet af natriumacetat 1/10 ryst, indtil den flokkulente udfældning af DNA er synlig; (10) prøven placeres ved -20°C køleskab fryser 30 min eller isbad i 15 ~ 20 min, efter fjernelse af 12000 rpm centrifugal 10 min igen, således at DNA udfældning; (11) pistolhovedet vil plukke DNA til et andet sterilt centrifugalrør, med mængden af ​​70% ethanol vask og rystning, for at udvaske urenheder DNA; (12) ud af ethanol, DNA ved vakuumtørring eller tør naturligt, TE-buffer tilsat opløsning, -20 opbevaret i standby.
2. UV-spektrofotometertest DNA-renhed på 260/280 tæt på 1,8 (1,8 ± 0,05), koncentrationen på 100 ng/μL eller mere før næste sekventering.
3. Det ekstraherede genomiske DNA vil blive sendt til Sangon Biology Engineering Limited Company (Shanghai) og sekventeret for at finde kandidatmutationer relateret til ADHD-risikosekvens. Ifølge NIH-gendatabasen er det længste transkript af NDRG2 (ID: 57447-genet, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_000014.9? Report=genbank&from=21016763&to=21070872&strand=true) ( af 17 exoner og 16 introner og gen 5 'UTR og 3' UTR-regionen) vil blive justeret sekvenser for at finde potentielle mutationer.
4. Brug af chi-kvadratanalysen og andre statistiske metoder til at bestemme forholdet mellem mutationerne og modtageligheden for ADHD.