Kandidatgenscreening for oppmerksomhetssvikt/hyperaktiv lidelse (ADHD)

Kilde: Sample bank of Xijing Hospital and Children's Hospital tilknyttet Soochow University; Prøveform: Fullblod; Estimert antall prøver: 100 pasienter med ADHD og alder, kjønnstilpasset friske kontroller; Eksklusjonskriterier for tilfeller: alle typer nevropsykiatriske lidelser, IQ-verdi på mindre enn 70;

Studieprotokoll:

1. Bruker Qiagen kit for å trekke ut det genomiske DNA fra 200 mikroliter blod. (1) smelt frosset blod ved romtemperatur; (2) ta blodet på 0,2 ml inn i et sterilt anti-koagulasjonssentrifugerør, tilsett et likt volum PBS-fosfatbuffer, etter fullstendig blanding av 12000rpm sentrifugering i 5 minutter, kast supernatanten; (3) 66,7 L STE 2,4 L, 20% SDS, 37°C vannbad 1 time; (4) protease K pluss 1 20 mg/ml blanding, 55°C vannbad fordøyelse over natten (10 ~ 14 timer); (5) de fordøyde prøvene behandlet med Tris-mettet fenol, rist godt, 12000 rpm sentrifugal 10 min; (6) den øvre vandige fase til et sterilt sentrifugerør; tilsett volum av Tris-mettet fenol, rist godt, 12000rpm sentrifugal 10min; (7) den øvre vandige fasen ble overført til et annet sterilt sentrifugerør, og et likt volum fenol ble tilsatt: kloroform: isoamylalkohol (25:24:1). Oscillasjonen av virvelen ble fullstendig blandet, og 12000 rpm ble sentrifugert til 10 minutter; (8) den øvre vandige fasen ble overført til et annet sterilt sentrifugerør, og et likt volum kloroform ble tilsatt: iso-amylalkohol (24:1), som ble fullstendig vibrert og blandet med 12000 rpm sentrifugering i 10 minutter; (9) overføre supernatanten til et annet sterilt sentrifugerør; tilsetning av 2 ganger volum etanol, volumnivået av natriumacetat 1/10 riste, til den flokkulente utfellingen av DNA er synlig; (10) prøven plasseres ved -20°C kjøleskap fryser 30min eller isbad i 15 ~ 20min, etter fjerning av 12000rpm sentrifugal 10min igjen, slik at DNA utfelling; (11) pistolhodet vil plukke DNA til et annet sterilt sentrifugalrør, med mengden 70 % etanol vask og risting, for å vaske ut urenheter DNA; (12) ut av etanol, DNA ved vakuumtørking eller tørk naturlig, TE-buffer som tilsetter oppløsning, -20 lagret i standby.
2. UV-spektrofotometertest DNA-renhet på 260/280 nær 1,8 (1,8 ± 0,05), konsentrasjonen på 100 ng/μL eller mer før neste sekvensering.
3. Det ekstraherte genomiske DNAet vil bli sendt til Sangon Biology Engineering Limited Company (Shanghai) og sekvensert for å finne kandidatmutasjoner relatert til ADHD-risikosekvens. I følge NIH-gendatabasen, det lengste transkripsjonen av NDRG2 (ID: 57447-genet, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_000014.9? Report=genbank&from=21016763&to=21070872&strand=true) ( av 17 eksoner og 16 introner og gen 5 'UTR og 3' UTR-regionen) vil bli justert sekvenser for å finne potensielle mutasjoner.
4. Bruke chi square-analysen og andre statistiske metoder for å bestemme forholdet mellom mutasjonene og mottakelighet for ADHD.