Kandidatgenscreening för Attention Deficit/Hyperactive Disorder (ADHD)

Källa: Samplebank för Xijing Hospital and Children's Hospital ansluten till Soochow University; Provform: Helblod; Uppskattat antal prover: 100 patienter med ADHD och ålder, könsmatchade friska kontroller; Uteslutningskriterier för fall: alla typer av neuropsykiatriska störningar, IQ-värde på mindre än 70;

Studieprotokoll:

1. Använder Qiagen kit för att extrahera genomiskt DNA från 200 mikroliter blod. (1) smält fruset blod vid rumstemperatur; (2) ta blodet på 0,2 ml i ett sterilt antikoagulationscentrifugrör, tillsätt en lika stor volym PBS-fosfatbuffert, efter fullständig blandning av 12000 rpm centrifugering 5 min, kassera supernatanten; (3) 66,7 L STE 2,4 L, 20% SDS, 37°C vattenbad 1 timme; (4) proteas K plus 1 20 mg/ml blandning, 55°C vattenbadsmältning över natten (10 ~ 14 timmar); (5) de digererade proverna behandlade med Tris mättad fenol, skaka väl, 12000 rpm centrifugal 10 min; (6) den övre vattenfasen till ett sterilt centrifugrör; tillsätt volym Tris mättad fenol, skaka väl, 12000 rpm centrifugal 10 min; (7) den övre vattenfasen överfördes till ett annat sterilt centrifugrör och en lika stor volym fenol tillsattes: kloroform: isoamylalkohol (25:24:1). Vortexens oscillation blandades fullständigt och 12000 rpm centrifugerades till 10 min; (8) den övre vattenfasen överfördes till ett annat sterilt centrifugrör och en lika stor volym kloroform tillsattes: iso-amylalkohol (24:1), som vibrerades fullständigt och blandades med 12000 rpm centrifugering 10 min; (9) överför supernatanten till ett annat sterilt centrifugrör; tillsats av 2 gånger volymen etanol, volymnivån av natriumacetat 1/10 skaka, tills den flockiga utfällningen av DNA är synlig; (10) provet placeras vid -20°C kyl och frys 30 min eller isbad i 15 ~ 20 min, efter avlägsnande av 12000 rpm centrifugal 10 min igen, så att DNA-utfällning; (11) pistolhuvudet kommer att plocka DNA till ett annat sterilt centrifugalrör, med mängden 70 % etanol, tvättning och skakning, för att tvätta bort orenheters DNA; (12) ur etanol, DNA genom vakuumtorkning eller torka naturligt, TE-buffert tillsätter upplösning, -20 lagras i standby.
2. UV-spektrofotometertest DNA-renhet på 260/280 nära 1,8 (1,8 ± 0,05), koncentrationen på 100 ng/μL eller mer före nästa sekvensering.
3. Det extraherade genomiska DNA:t kommer att skickas till Sangon Biology Engineering Limited Company (Shanghai) och sekvenseras för att hitta kandidatmutationer relaterade till ADHD-risksekvens. Enligt NIH-gendatabasen, det längsta transkriptet av NDRG2 (ID: 57447-genen, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/NC_000014.9? Report=genbank&from=21016763&to=21070872&strand=true) ( av 17 exoner och 16 introner och gen 5 'UTR och 3' UTR-regionen) kommer att anpassas sekvenser för att hitta potentiella mutationer.
4. Med hjälp av chi-kvadratanalys och andra statistiska metoder för att bestämma sambandet mellan mutationerna och känsligheten för ADHD.