Brustkrebs-assoziierte Antikörper

Allgemeine Informationen

Antikörper sind eine spezifische Reaktion auf jedes „fremde“ Antigen und sind normalerweise innerhalb von 5-7 Tagen nach der ersten Exposition im Serum nachweisbar. Es gibt jedoch Fälle, in denen die spezifische Immunantwort unterdrückt wird, beispielsweise bei einem Tumor. Bis heute gibt es keine Berichte über Serumantikörper, die mit Krebs assoziiert sind. Bei einigen Tumoren, die chirurgisch entfernt und untersucht wurden, wurde festgestellt, dass sie sowohl Infiltrate von T-Lymphozyten als auch an die Tumorzellen gebundene Antikörper aufweisen. Es wird angenommen, dass diese Antikörper (und andere spezifische Immunantworten) in späteren Stadien des Tumorwachstums gebildet werden, aber selbst in diesen Fällen wurden keine Serumantikörper berichtet (wahrscheinlich, weil sie größtenteils von der Tumormasse „absorbiert“ werden). .

Da die Mutationen einer normalen Zelle, die zu einer bösartigen Zellmasse führen, Veränderungen in der Struktur und Funktion der Zellen beinhalten, könnte angenommen werden, dass das Immunsystem einige dieser Veränderungen als antigene Determinanten erkannt hat, gegen die reagiert werden sollte; wenn ja, dann wäre die durch den Tumor verursachte Unterdrückung der Grund für das Fehlen von Antikörpern.

Wenn diese Immunsuppression überwunden werden könnte, könnte dies in vitro zur Bildung von Antikörpern führen, die im Serum nicht nachweisbar sind (wir nennen diesen Prozess Cimmunologie). Die Identifizierung der Strukturen, an die die Antikörper binden, und die Suche nach einem Zusammenhang zwischen der Tumorpathologie und der Spezifität der Antikörper – über einen Bluttest – könnte zusätzliche Informationen über den Tumor liefern.

1.2 Zukünftiger CAAb-Test

Der auf Immunologie basierende Test besteht aus einem In-vitro-Stimulationsschritt und einem Schritt zum Nachweis von Antikörpern.

Der Assay wird verwendet, um krebsassoziierte Antikörper bei Brustkrebspatientinnen zu finden.

Die Identifizierung von Brustkrebs-assoziierten Antikörpern könnte dem Kliniker zusätzliche immunologische und antigene Informationen über den Zustand oder den medizinischen Status der Patientin liefern.

Der Cimmunology-Prozess besteht aus einem Blutentnahme- und Verarbeitungsschritt und einer Inkubationszeit (in einem speziellen Stimulationsröhrchen namens CimTube) in einem feuchten Inkubator bei 37 °C und 5 % CO2.

Der Test zum Nachweis spezifischer Antikörper basiert auf ELISA und umfasst verschiedene potenziell interessante Antigene.

Die relevanten medizinischen und pathologischen Informationen, die aus der Patientenakte gesammelt werden, ermöglichen eine detailliertere Analyse der Testergebnisse.

0 STUDIENZIELE

2.1 Primäres Ziel

Um krebsassoziierte Antikörper zu finden

2.2 Wirksamkeit

Um die Fähigkeit des Cimmunology-Prozesses zu bestimmen, zu einer In-vitro-Antikörperproduktion zu führen, die Fähigkeit der ELISA-Assays, einen dieser Antikörper nachzuweisen, und um die Beziehung zwischen den ELISA-Ergebnissen und dem klinischen/pathologischen Zustand des Patienten herzustellen. Die statistische Signifikanz der CAAb-Testergebnisse wird bestimmt.

3.0 STUDIENPOPULATIONEN UND PATIENTENAUSWAHL

3.1 Studienpopulation

3.1.1 Brustkrebspatientinnen Die Studienpopulation umfasst Probanden, bei denen vor einem chirurgischen Eingriff (oder einer anderen Krebsbehandlung) ein Verdacht auf Brustkrebs diagnostiziert wurde, d. h. eine positive Biopsie.

3.1.2 Kontrollgruppe

Die Kontrollgruppe umfasst Patienten in Brustkrebszentren oder anderen geeigneten Pflegeeinrichtungen mit negativer Mammographie in den letzten 3 Monaten.

3.2 Teilnehmende Zentren

3.2.1 Allgemeines – Die Studie basiert auf der Beteiligung mehrerer Zentren.

3.2.2 Standorte – Alle Standorte befinden sich innerhalb von Krankenhäusern, entweder in den Brustkrebszentren oder in der entsprechenden spezifischen Abteilung, die für die Versorgung der BC-Patienten verantwortlich ist. Die Mindestanzahl an Standorten für die Studie beträgt 2 und die Höchstzahl 10.

STUDIENDESIGN

4.1 Gesamtbeschreibung

Die aktuelle Studie ist eine vergleichende zweiarmige Beobachtungsstudie, an der alle aufeinanderfolgenden Brustkrebspatientinnen während der Studiendauer und altersentsprechende Kontrollpersonen teilnahmen. Der Zweck der Studie besteht darin, die Wirksamkeit des CAAb-Tests beim Nachweis von Brustkrebs-assoziierten Antikörpern zu bewerten.

Die Probanden werden gemäß den Einschluss- und Ausschlusskriterien auf eine potenzielle Teilnahme an der Studie untersucht. Rekrutierte Patienten werden gebeten, eine Einverständniserklärung zu unterschreiben.

Die Patientendaten umfassen Parameter des klinischen und pathologischen Zustands der Patienten, Ergebnisse des CimTube-Kulturschritts und der Versuchskits. Die Wirksamkeit des CAAb-Tests wird durch Auswertung der statistischen Signifikanz des verwendeten CAAb-Tests bewertet.

Die Studie wird ein dreistufiges gruppensequentielles Design mit zwei Zwischen- und einer Endanalyse unter Verwendung der O'Brian-Fleming'-Grenzen verwenden. Die Datenerhebung kann nach der ersten oder zweiten Zwischenanalyse beendet werden, wenn die Grenzen erreicht sind. Dies könnte die Anzahl der Patienten und den Zeitraum der Studie erheblich verringern, während die maximale Anzahl der Patienten nur geringfügig erhöht wird. (Siehe Überlegungen zur Stichprobengröße unten).

Wir werden ein Verhältnis von 1:2 zwischen Krebs- und Kontrollpatienten verwenden, um die notwendige Anzahl von Krebspatienten zu verringern, die der Hauptbegrenzungsfaktor ist.

Der Sponsor führt nach dem ersten Drittel und dem zweiten Drittel der Brustkrebsfälle eine Zwischenanalyse durch, und die Stichprobengröße wird entsprechend den erhaltenen Schätzungen des Mittelwerts und der Varianz des Tests in den beiden Gruppen neu berechnet.

Daher werden mindestens 100 Patienten in die Studie aufgenommen. Die Kontrollgruppe besteht aus 200 Patienten.

4.2 Studienablauf

Im Krankenhaus,

Zunächst muss eine identifizierte Studienpatientin eine Einverständniserklärung unterzeichnen und ihr Zulassungsformular ausfüllen (siehe Anhang B), beides sollte mit einem Strichcode versehen sein.

Aus der Krankenakte des Patienten stammende demografische und klinische Informationen, einschließlich Alter, Herkunftsland, Krankengeschichte und Ergebnisse von Tests, die zur diagnostischen Bewertung von Brustkrebs führten (nicht relevant in der Kontrollgruppe), werden in der entsprechenden Leiste aufgezeichnet -codierte Fallberichtsformulare vor der Studie (siehe Anhang C, CRF-BC und CRF-BC-Control). Die Berichte werden entweder elektronisch (eine spezielle und gesicherte Internetseite) oder in Papierform erstellt. Eine Kopie der Aufzeichnungen wird in der Abteilung aufbewahrt. Die Studie ist anonym und die Abteilung behält den Namen des Patienten, ohne ihn den Prüfärzten und dem Studiensponsor preiszugeben.

Der Studiensponsor stellt die Röhrchen und die Barcode-Etiketten zur Überwachung zur Verfügung. Der Arzt/die Krankenschwester/der Phlebotomist sammelt drei Heparin-Vakuumröhrchen (20-24 ml), etikettiert (Barcode) und füllt den ersten Schritt im „Muster-Follow-up-Formular“ (SFF) aus (siehe Anhang D). . Die Röhrchen mit dem Blut werden in doppelt versiegelten Behältern verpackt (werden vom Sponsor gestellt). Die Abteilung benachrichtigt den benannten Versender, das Blut innerhalb von 1 Stunde nach der Blutentnahme zu entnehmen.

Für jede BC-Probe werden auch zwei altersangepasste Kontrollen (+/- 3 Jahre) rekrutiert.

Transport vom Krankenhaus zum Handhabungslabor

Das Blut wird bei Raumtemperatur (18-250°C) gemäß den einschlägigen Vorschriften zum Labor transportiert. Die Transportzeit beträgt nicht mehr als 6 Stunden. In SFF zu erfassende Zeiten.

Im Blutverarbeitungslabor:

Das Blutbehandlungslabor (nicht weiter als 200 km von der Entnahmestelle entfernt) isoliert PBMC (Periphere mononukleäre Blutzellen) und bringt sie innerhalb von 20 Stunden nach der Probenahmezeit (Auffüllzeit in SFF) in Cimmunology-Kultur.

Das detaillierte Protokoll und die Cimmunology-Medien werden den teilnehmenden Labors (falls zutreffend) von Lab Discoveries zur Verfügung gestellt. Alle Krankenhäuser in Israel schicken die Blutproben an das Labor von Lab Discoveries. Nach dem Kulturschritt wird die Kulturflüssigkeit gesammelt und bei -80°C in ordnungsgemäß gekennzeichneten Aliquots eingefroren. Die eingefrorenen Proben werden für Antikörpertests an das diagnostische Labor geschickt.

Im diagnostischen Labor:

Antikörpertests, wie ELISA, werden unter Verwendung verschiedener Antigene vorbereitet. Die Proben werden auf die Reaktion auf die beiden Antigene, die in der Vergangenheit identifiziert wurden, und auf zusätzliche neue Antigene getestet. Alle Daten werden permanent direkt in einem dedizierten Computer aufgezeichnet. Für jede Probe werden alle Antikörperergebnisse in die codierte Patientenakte aufgenommen. Die Ergebnisse werden von einem Statistiker mit Erfahrung in Krebspopulationsstudien analysiert.

Im Krankenhaus, nach der Operation:

2-3 Wochen nach der Operation sammelt der CRO aus der Patientenakte die Ergebnisse des Pathologielabors und alle anderen relevanten Informationen über die Art und den Zustand des Tumors, der während der Operation entfernt wurde. Diese Ergebnisse werden auf der dedizierten und gesicherten Internetseite aufgezeichnet und ein gedrucktes CRF mit Strichcode wird in der Abteilung aufbewahrt.

9.0 STATISTISCHE ÜBERLEGUNGEN

Die vorliegende Studie ist eine vergleichende zweiarmige Beobachtungsstudie, an der alle aufeinanderfolgenden Brustkrebspatientinnen während der Studiendauer und altersangepasste Kontrollpersonen teilnahmen. Der Hauptzweck der Studie besteht darin, die Wirksamkeit der CAAb-Tests zu bewerten. Diese Wirksamkeit wird durch die Fisher-Distanz (oft als "Effektgröße" bezeichnet) d definiert als gemessen

Wobei m1 der Mittelwert des Tests bei den Kontrollen ist, m2 der Mittelwert bei den Brustkrebspatientinnen ist, |m1-m2| bezeichnet den absoluten Wert der Differenz (m1-m2) und s ist die gemeinsame Schätzung der Standardabweichung der Verteilung des Tests in einer Gruppe (Kontrolle oder Brustkrebs).

9.1 Statistische Hypothese

Nullhypothese: Es besteht keine Beziehung zwischen dem Vorhandensein oder Fehlen von BC und dem CAAb, d. h. d=0

Alternativhypothese: Die Erwartung des CAAb in der Krebspopulation unterscheidet sich von der der Kontrollpopulation…. d.h. m1 ungleich m2 Da das Vorzeichen der Differenz nicht wichtig ist, wird der Test zweiseitig sein.

9.2 Allgemeine Überlegungen

Nach unseren bisherigen Ergebnissen gehen wir davon aus

1. Die Verteilungen der Testergebnisse in jeder Gruppe sind nahe an Normal oder können durch Log-Transformation in Normal transformiert werden.
2. Die Varianz der Verteilungen in den beiden Gruppen ist ungefähr gleich
3. Da es sich hierbei um eine Pilotstudie handelt, betrachten wir die Ergebnisse als signifikant, wenn der zweiseitige p-Wert 0,1 oder weniger beträgt. Die Grenze 0,1 anstelle von 0,05 wurde gewählt, um die Wahrscheinlichkeit eines zufälligen Ausschlusses einiger potenziell informativer Tests zu verringern.

Bei der Entscheidung über die Fortsetzung der Studie wird keine Korrektur für Mehrfachvergleiche angenommen. Die Ergebnisse werden jedoch ohne und mit der Korrektur unter Verwendung des FDR-Ansatzes von Benjamini & Hochberg (Benjamini, Hochberg 1995) präsentiert.

Wo Konfidenzgrenzen angemessen sind, beträgt das Konfidenzniveau 95 %.

9.3 Probengröße Die Probengröße wurde anhand relevanter Informationen aus unserer vorherigen Studie zu den Peptiden P3 und P1 und Brustkrebs berechnet. In der Literatur gibt es keine Informationen zu krebsassoziierten Antikörpern.

Die Stichprobengröße wird für ein dreistufiges sequentielles Gruppendesign mit zweiseitiger Signifikanz 0,1 und 0,05, Power 0,8, für Krebs : Kontrollverhältnis 1:2, für D von 0,5 berechnet. Die Berechnungen verwendeten die Standardformeln für die Stichprobengröße, die zum Vergleich der Mittelwerte in zwei unabhängigen Gruppen durch den t-Test erforderlich sind. Die Korrektur für ein gruppensequentielles Verfahren mit O'Bien- und Fleming-Test erhöht die Zahlen um 1,017 und 1,027 für die Signifikanzwerte 0,05 und 0,1, was für unsere Fallzahlen vernachlässigbar ist. (siehe C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann&Hall(2000) Boca Raton FL US S.30 Tabelle 2.4).

Die Berechnungen wurden mit der NCSS-PASS-Software durchgeführt.

9.4 Endpunktbewertung

9.4.1 Wirksamkeitsanalyse

Ein errechnetes D zwischen 0,3 und 0,5 markiert einen Test als nicht effektiv, um ihn allein zu verwenden. Es kann jedoch in Kombination mit anderen Tests als Teil des multivariaten Testverfahrens wichtig sein. Tests mit d<0,3 werden als nicht effektiv betrachtet. Ein Test oder eine Kombination von Tests mit d>0,5 markiert den CAAb-Test als effektiv.