Protilátky spojené s rakovinou prsu

Obecná informace

Protilátky jsou specifickou odpovědí na jakýkoli "cizí" antigen a obvykle jsou detekovatelné v séru během 5-7 dnů po počáteční expozici. Existují však některé případy, kdy dochází k potlačení specifické imunitní odpovědi, jako například v případě nádoru. K dnešnímu dni neexistují žádné zprávy o sérových protilátkách, které jsou spojeny s rakovinou. U některých nádorů, když byly chirurgicky odstraněny a studovány, bylo zjištěno, že mají jak infiltráty T lymfocytů, tak protilátky navázané na nádorové buňky. Předpokládá se, že tyto protilátky (a další specifické imunitní reakce) se tvoří v pozdějších fázích růstu nádoru, ale ani v těchto případech nebyly hlášeny sérové ​​protilátky (pravděpodobně kvůli tomu, že jsou většinou "absorbovány" nádorovou hmotou) .

Protože mutace normální buňky, které vedou k maligní buněčné hmotě, zahrnují změny ve struktuře a funkci buněk, dalo by se předpokládat, že imunitní systém rozpoznal některé z těchto změn jako antigenní determinanty, proti kterým by se mělo reagovat; pokud ano, pak by suprese způsobená nádorem byla důvodem nedostatku protilátek.

Pokud by se podařilo tuto imunosupresi překonat in vitro, mohlo by to vést k tvorbě protilátek, které nejsou detekovatelné v séru (tento proces nazýváme imunologie). Identifikace struktur, na které se protilátky vážou, a hledání korelace mezi patologií nádoru a specificitou protilátek – by mohlo poskytnout další informace o nádoru – prostřednictvím krevního testu.

1.2 Budoucí test CAAb

Test založený na imunologii se skládá z kroku stimulace in vitro a kroku detekce protilátek.

Test bude použit k nalezení protilátek souvisejících s rakovinou u pacientů s rakovinou prsu.

Identifikace protilátek souvisejících s rakovinou prsu by mohla poskytnout klinickému lékaři další imunologické a antigenní informace týkající se stavu pacienta nebo zdravotního stavu.

Cimunologický proces se skládá z kroku odběru a zpracování krve a inkubace (ve speciální stimulační "zkumavce" zvané CimTube) ve vlhkém inkubátoru s 37oC s 5% CO2.

Test pro detekci specifických protilátek je založen na ELISA a zahrnuje různé potenciálně zajímavé antigeny.

Relevantní lékařské a patologické informace, které mají být shromážděny ze spisu pacienta, umožní podrobnější analýzu výsledků testů.

0 STUDIJNÍ CÍLE

2.1 Primární cíl

Chcete-li najít protilátky spojené s rakovinou

2.2 Účinnost

Stanovit schopnost imunologického procesu vést k produkci protilátek in vitro, schopnost testů ELISA detekovat kteroukoli z těchto protilátek a stanovit vztah mezi výsledky ELISA a klinickým/patologickým stavem pacienta. Bude stanovena statistická významnost výsledků testu CAAb.

3.0 STUDOVANÉ POPULACE A VÝBĚR PACIENTŮ

3.1 Studijní populace

3.1.1 Pacienti s rakovinou prsu Populace studie bude zahrnovat subjekty, u kterých bylo diagnostikováno podezření na rakovinu prsu, tj. pozitivní biopsie, před jakýmkoli chirurgickým zákrokem (nebo jakoukoli jinou protirakovinnou léčbou).

3.1.2 Kontrolní skupina

Kontrolní skupina bude zahrnovat pacientky v centrech pro rakovinu prsu nebo na jakémkoli jiném vhodném oddělení péče s negativní mamografií v posledních 3 měsících.

3.2 Zúčastněná centra

3.2.1 Obecně - Studie bude založena na účasti více center.

3.2.2 Umístění – Všechna pracoviště budou v rámci nemocnic, buď v centrech pro rakovinu prsu, nebo na příslušném specifickém oddělení, které je zodpovědné za poskytování péče o pacienty s BC. Minimální počet míst pro studii je 2 a maximální je 10.

STUDOVAT DESIGN

4.1 Celkový popis

Současná studie je srovnávací observační dvouramenná studie zahrnující všechny po sobě jdoucí pacientky s rakovinou prsu během trvání studie a věkově odpovídající kontrolní subjekty. Účelem studie je posoudit účinnost testu CAAb při detekci protilátek souvisejících s rakovinou prsu.

Subjekty budou testovány na potenciální účast ve studii podle kritérií pro zařazení a vyloučení. Přijatí pacienti budou požádáni, aby podepsali formulář informovaného souhlasu.

Údaje o pacientech budou zahrnovat parametry klinického a patologického stavu pacientů, výsledky kroku kultivace CimTube a experimentální soupravy. Účinnost testu CAAb bude posouzena vyhodnocením statistické významnosti použitého testu CAAb.

Studie bude využívat třístupňový skupinový sekvenční návrh se dvěma průběžnými a jednou konečnou analýzou s použitím O'Brian-Flemingových hranic. Sběr dat může být zastaven po první nebo druhé průběžné analýze, pokud jsou dosaženy hranice. To by mohlo podstatně snížit počet pacientů a dobu studie, zatímco maximální počet pacientů se jen mírně zvýšil. (Viz úvahy o velikosti vzorku níže).

Použijeme poměr 1:2 mezi onkologickými a kontrolními pacienty, abychom snížili potřebný počet onkologických pacientů, což je hlavní limitující faktor.

Zadavatel provede průběžnou analýzu po první třetině a druhé třetině případů rakoviny prsu a velikost vzorku bude přepočítána podle získaných odhadů průměru a rozptylu testu ve dvou skupinách.

Do studie tedy bude zařazeno alespoň 100 pacientů. Kontrolní skupinu bude tvořit 200 pacientů.

4.2 Postup při studiu

V nemocnici,

Nejprve musí identifikovaný pacient studie podepsat formulář informovaného souhlasu a vyplnit formulář způsobilosti (viz příloha B), oba by měly být označeny čárovým kódem.

Demografické a klinické informace pacienta získané z lékařské dokumentace pacienta, včetně věku, země původu, anamnézy a výsledků testů, které vedly k diagnostickému vyhodnocení rakoviny prsu (v kontrolní skupině nejsou relevantní), budou zaznamenány na příslušné liště -kódované formuláře kazuistiky před zahájením studie (viz příloha C, CRF-BC a CRF-BC-Control). Zprávy budou buď elektronické (specializovaná a zabezpečená internetová stránka), nebo v tištěné podobě. Tištěná kopie záznamů bude uložena na oddělení. Studie je anonymní a oddělení si ponechá jméno pacienta, aniž by je sdělilo zkoušejícím a zadavateli studie.

Sponzor studie poskytne zkumavky a štítky s čárovými kódy pro monitorování. Lékař/sestra/flebotomista odebere tři vakuové zkumavky s heparinem (20–24 ml), označí je (čárovým kódem) a vyplní úvodní krok ve „formuláři pro kontrolu vzorku“ (SFF) (viz příloha D). . Zkumavky s krví budou baleny do dvojitě uzavřených nádob (poskytne sponzor). Oddělení vyrozumí určeného odesílatele o odběru krve do 1 hodiny od doby, kdy byla odebrána.

Pro každý vzorek BC budou také vybrány dvě věkově shodné kontroly (+/- 3 roky).

Převoz z nemocnice do manipulační laboratoře

Krev bude transportována při pokojové teplotě (18-250C) dle příslušných předpisů do laboratoře. Doba přepravy nebude delší než 6 hodin. Časy, které mají být zaznamenány v SFF.

V laboratoři pro manipulaci s krví:

Laboratoř pro manipulaci s krví (nebude umístěna dále než 200 km od místa odběru) izoluje PBMC (mononukleární buňky periferní krve) a umístí je do imunologické kultury do 20 hodin od doby odběru (doba naplnění v SFF).

Podrobný protokol a imunologická média poskytne společnost Lab Discoveries zúčastněným laboratořím (pokud je to možné). Všechny nemocnice v Izraeli zašlou vzorky krve do laboratoře Lab Discoveries. Po kultivačním kroku se kultivační tekutina shromáždí a zmrazí na -80 °C ve správně označených alikvotech. Zmrazené vzorky budou odeslány do diagnostické laboratoře na testy na protilátky.

V diagnostické laboratoři:

Testy na protilátky, jako je ELISA, budou připraveny s použitím různých antigenů. Vzorky budou testovány na reakci na dva antigeny, které byly identifikovány v minulosti, a na další nové. Všechna data budou trvale zaznamenávána přímo do vyhrazeného počítače. Pro každý vzorek budou všechny výsledky protilátek vloženy do kódovaného souboru pacienta. Výsledky budou analyzovány statistikem se zkušenostmi v populačních studiích rakoviny.

V nemocnici po operaci:

2-3 týdny po operaci shromáždí CRO ze souboru pacienta výsledky z patologické laboratoře a jakékoli další relevantní informace o povaze a stavu nádoru, který byl během operace odstraněn. Tyto výsledky budou zaznamenány na vyhrazené a zabezpečené internetové stránce a vytištěné CRF s čárovým kódem budou uloženy na katedře.

9.0 STATISTICKÉ ÚVAHY

Tato studie je srovnávací observační dvouramenná studie, zahrnující všechny po sobě jdoucí pacientky s rakovinou prsu během trvání studie a věkově odpovídající kontrolní subjekty. Hlavním účelem studie je posoudit účinnost testů CAAb. Tato účinnost bude měřena Fisherovou vzdáleností (často nazývanou "velikost účinku") d definovanou jako

Kde m1 je střední hodnota testu u kontrol, m2 je střední hodnota u pacientek s rakovinou prsu, |m1-m2| označuje absolutní hodnotu rozdílu (m1-m2) as je společný odhad směrodatné odchylky distribuce testu v jedné skupině (kontrola nebo karcinom prsu).

9.1 Statistická hypotéza

Nulová hypotéza: Neexistuje žádný vztah mezi přítomností nebo nepřítomností BC a CAAb, tj. d=0

Alternativní hypotéza: Očekávání CAAb u populace s rakovinou se liší od očekávání kontrolní populace…. tj. m1 se nerovná m2 Protože znaménko rozdílu není důležité, bude test oboustranný.

9.2 Obecné úvahy

Podle našich předchozích výsledků to předpokládáme

1. Distribuce výsledků testu v každé skupině jsou blízké normální nebo mohou být transformovány na normální log-transformací.
2. Rozptyl distribucí v obou skupinách je přibližně stejný
3. Vzhledem k tomu, že se jedná o pilotní studii, budeme výsledky považovat za významné, pokud je oboustranná p-hodnota 0,1 nebo méně. Hranice 0,1 místo 0,05 byla zvolena pro snížení pravděpodobnosti náhodného vyloučení některých potenciálně informativních testů.

Při rozhodování o pokračování studie se nepředpokládá žádná korekce pro vícenásobná srovnání. Výsledky však budou prezentovány bez korekce as korekcí pomocí FDR přístupu Benjamini&Hochberg (Benjamini, Hochberg 1995).

Tam, kde jsou vhodné meze spolehlivosti, bude úroveň spolehlivosti 95 %.

9.3 Velikost vzorku Velikost vzorku byla vypočtena s použitím relevantních informací z naší předchozí studie o peptidech P3 a P1 a rakovině prsu. V literatuře nejsou žádné informace týkající se protilátek souvisejících s rakovinou.

Velikost vzorku se vypočítá pro třístupňový sekvenční návrh skupiny s oboustrannou významností 0,1 a 0,05, síla 0,8, pro poměr rakovina : kontrola 1:2, pro D 0,5. Při výpočtech byly použity standardní vzorce pro velikost vzorku nutné pro srovnání středních hodnot ve dvou nezávislých skupinách pomocí t-testu. Korekce pro skupinově sekvenční postup s O'Bienovým a Flemingovým testem zvyšuje čísla o 1,017 a 1,027 pro hodnoty významnosti 0,05 a 0,1, což je pro naši velikost vzorku zanedbatelné. (viz C. Jennison, B.W.Turnbill Group sekvenční metody s aplikacemi na klinické zkoušky Chapmann&Hall(2000) Boca Raton FL US pp30 tabulka 2.4).

Výpočty byly provedeny pomocí softwaru NCSS-PASS.

9.4 Hodnocení koncových bodů

9.4.1 Analýza účinnosti

Vypočtené D mezi 0,3 a 0,5 označí test jako neúčinný pro použití samostatně. Může však být důležitý v kombinaci s jinými testy jako součást vícerozměrného testovacího postupu. Testy s d<0,3 budou považovány za neúčinné. Test nebo kombinace testů s d>0,5 označí test CAAb jako účinný.