Anticuerpos asociados al cáncer de mama

Información general

Los anticuerpos son una respuesta específica a cualquier antígeno "extraño" y, por lo general, son detectables en el suero dentro de los 5 a 7 días posteriores a la exposición inicial. Sin embargo, hay algunos casos en los que hay una supresión de la respuesta inmune específica, como en el caso de un tumor. Hasta la fecha, no hay reportes de anticuerpos séricos que estén asociados con el cáncer. Se ha encontrado que algunos tumores, cuando se extirpan quirúrgicamente y se estudian, tienen infiltrados de linfocitos T y anticuerpos unidos a las células tumorales. Se supone que estos anticuerpos (y otras respuestas inmunitarias específicas) se forman en etapas posteriores del crecimiento del tumor; sin embargo, incluso en esos casos, no se han informado anticuerpos séricos (probablemente debido a que la masa tumoral los "absorbe" en su mayoría) .

Dado que las mutaciones de una célula normal que dan lugar a una masa celular maligna implican cambios en la estructura y función de las células, se podría suponer que el sistema inmunitario ha reconocido algunos de estos cambios como determinantes antigénicos contra los que se debe responder; si es así, entonces la supresión causada por el tumor sería la razón de la falta de anticuerpos.

Si esta inmunosupresión pudiera superarse, in vitro, podría dar lugar a la formación de anticuerpos que no son detectables en el suero (a este proceso lo llamamos cinmunología). Identificar las estructuras a las que se unen los anticuerpos y buscar una correlación entre la patología del tumor y la especificidad de los anticuerpos podría proporcionar información adicional sobre el tumor a través de un análisis de sangre.

1.2 Prueba CAAb futura

La prueba basada en Cimmunology se compone de un paso de estimulación in vitro y un paso de detección de anticuerpos.

El ensayo se utilizará para encontrar anticuerpos asociados con el cáncer en pacientes con cáncer de mama.

La identificación de anticuerpos asociados con el cáncer de mama podría proporcionar al médico información inmunológica y antigénica adicional con respecto a la condición o el estado médico del paciente.

El proceso de Cimmunology consta de un paso de recolección y procesamiento de sangre y un período de incubación (en un "tubo" de estimulación especial llamado CimTube) en una incubadora húmeda a 37oC con 5% de CO2.

La prueba para la detección de anticuerpos específicos está basada en ELISA, e incluye diferentes antígenos potencialmente interesantes.

La información médica y patológica relevante, que se recopilará del expediente del paciente, permitirá un análisis más detallado de los resultados de la prueba.

0 OBJETIVOS DE ESTUDIO

2.1 Objetivo principal

Para encontrar anticuerpos asociados al cáncer

2.2 Eficacia

Determinar la capacidad del proceso de Cimmunology para conducir a la producción de anticuerpos in vitro, la capacidad de los ensayos ELISA para detectar cualquiera de esos anticuerpos y establecer la relación entre los resultados de ELISA y el estado clínico/patológico del paciente. Se determinará la importancia estadística de los resultados de la prueba CAAb.

3.0 POBLACIONES DE ESTUDIO Y SELECCIÓN DE PACIENTES

3.1 Población de estudio

3.1.1 Pacientes con cáncer de mama La población del estudio incluirá sujetos que hayan sido diagnosticados con sospecha de cáncer de mama, es decir, biopsia positiva, antes de cualquier procedimiento quirúrgico (o cualquier otro tratamiento contra el cáncer).

3.1.2 Grupo de control

El grupo de control incluirá pacientes, en centros de cáncer de mama o cualquier otra unidad de atención apropiada, con Mamografía negativa en los últimos 3 meses.

3.2 Centros participantes

3.2.1 General - El estudio se basará en la participación multicéntrica.

3.2.2 Ubicaciones: todos los sitios estarán dentro de los hospitales, ya sea en los centros de cáncer de mama o en la unidad específica relevante que sea responsable de brindar atención a los pacientes con CM. El número mínimo de sitios para el estudio es 2 y el máximo es 10.

DISEÑO DEL ESTUDIO

4.1 Descripción general

El estudio actual es un estudio observacional comparativo de dos brazos, en el que participaron todos los pacientes consecutivos con cáncer de mama durante la duración del estudio y sujetos de control de la misma edad. El propósito del estudio es evaluar la eficacia de la prueba CAAb en la detección de anticuerpos asociados al cáncer de mama.

Los sujetos serán seleccionados para su posible participación en el estudio, de acuerdo con los criterios de inclusión y exclusión. A los pacientes reclutados se les pedirá que firmen un formulario de consentimiento informado.

Los datos de los pacientes incluirán parámetros del estado clínico y patológico de los pacientes, resultados del paso de cultivo CimTube y los kits experimentales. La eficacia de la prueba CAAb se evaluará mediante la evaluación de la significación estadística de la prueba CAAb utilizada.

El estudio utilizará un diseño secuencial de grupo de tres pasos con dos análisis intermedios y uno final utilizando los límites de O'Brian-Fleming. La recopilación de datos puede detenerse después del primer o segundo análisis intermedio si se alcanzan los límites. Esto podría disminuir sustancialmente el número de pacientes y el tiempo del estudio, mientras que solo aumenta ligeramente el número máximo de pacientes. (Consulte las Consideraciones sobre el tamaño de la muestra a continuación).

Usaremos una proporción de 1:2 entre los pacientes con cáncer y los de control para disminuir el número necesario de pacientes con cáncer, que es el principal factor limitante.

El patrocinador realizará un análisis intermedio, siguiendo el primer tercio y el segundo tercio de los casos de cáncer de mama y el tamaño de la muestra se recalculará de acuerdo con las estimaciones obtenidas de la media y la varianza de la prueba en los dos grupos.

Por lo tanto, al menos 100 pacientes se inscribirán en el estudio. El grupo control será de 200 pacientes.

4.2 Procedimiento de estudio

En el hospital,

En primer lugar, una paciente del estudio identificada debe firmar un formulario de consentimiento informado y completar su Formulario de elegibilidad (consulte el apéndice B); ambos deben tener un código de barras.

La información demográfica y clínica del paciente obtenida del expediente médico del paciente, incluida la edad, el país de origen, el historial médico y los resultados de las pruebas realizadas que conducen a la evaluación diagnóstica del cáncer de mama (no relevante en el grupo de control) se registrará en la barra correspondiente. -Formularios de informes de casos previos al estudio codificados (consulte el apéndice C, CRF-BC y CRF-BC-Control). Los informes serán electrónicos (un sitio de Internet dedicado y seguro) o mediante una copia impresa. Una copia impresa de los registros se mantendrá en el departamento. El estudio es anónimo y el Departamento conservará el nombre del paciente sin revelarlo a los investigadores ni al patrocinador del estudio.

El patrocinador del estudio proporcionará los tubos y las etiquetas de código de barras para el control. El médico/enfermera/flebotomista recogerá tres tubos de vacío de heparina (20-24 ml), los etiquetará (código de barras) y completará el paso inicial en el "Formulario de seguimiento de muestra" (SFF) (ver apéndice D) . Los tubos con la sangre se envasarán en contenedores de doble sellado (serán proporcionados por el patrocinador). El departamento notificará al transportista designado para recolectar la sangre hasta 1 hora después del momento en que se tomó la muestra.

Para cada muestra de BC, también se reclutarán dos controles emparejados por edad (+/- 3 años).

Transporte del Hospital al Laboratorio de Manipulación

La sangre será transportada a temperatura ambiente (18-250C), de acuerdo con la normativa vigente, al laboratorio. El tiempo de transporte no será mayor a 6 horas. Tiempos a registrar en SFF.

En el laboratorio de manipulación de sangre:

El laboratorio de manejo de sangre (que se ubicará a no más de 200 km del sitio de recolección) aislará PBMC (células mononucleares de sangre periférica) y las pondrá en cultivo de inmunología dentro de las 20 horas posteriores al tiempo de muestreo (tiempo de llenado en SFF).

Lab Discoveries proporcionará el protocolo detallado y los medios de Cimmunology a los laboratorios participantes (cuando corresponda). Todos los hospitales de Israel enviarán las muestras de sangre al laboratorio de Lab Discoveries. Después del paso de cultivo, el líquido de cultivo se recolectará y congelará a -80, en alícuotas debidamente etiquetadas. Las muestras congeladas se enviarán al laboratorio de diagnóstico para las pruebas de anticuerpos.

En el laboratorio de diagnóstico:

Las pruebas de anticuerpos, como ELISA, se prepararán utilizando diferentes antígenos. Las muestras se analizarán para determinar la respuesta a los dos antígenos que se identificaron en el pasado y para otros nuevos. Todos los datos se registrarán permanentemente directamente en una computadora dedicada. Para cada muestra, todos los resultados de anticuerpos se incluirán en el archivo codificado del paciente. Los resultados serán analizados por un estadístico con experiencia en estudios de población con cáncer.

En el Hospital, post cirugía:

2-3 semanas después de la cirugía, el CRO recopilará del archivo del paciente los resultados del laboratorio de patología y cualquier otra información relevante sobre la naturaleza y el estado del tumor que se extirpó durante la cirugía. Estos resultados se registrarán en el sitio de Internet dedicado y seguro y se mantendrán en el Departamento formularios de resultados de resultados (CRF) impresos con código de barras.

9.0 CONSIDERACIONES ESTADÍSTICAS

El presente estudio es un estudio observacional comparativo de dos brazos, en el que participaron todos los pacientes consecutivos con cáncer de mama durante la duración del estudio y sujetos de control de la misma edad. El objetivo principal del estudio es evaluar la eficacia de las pruebas CAAb. Esta efectividad se medirá por la distancia de Fisher (a menudo llamada "tamaño del efecto") d definida como

Donde m1 es el valor medio de la prueba en los controles, m2 es el valor medio en las pacientes con cáncer de mama, |m1-m2| denota el valor absoluto de la diferencia (m1-m2), y s es la estimación común de la desviación estándar de la distribución de la prueba en un grupo (control o cáncer de mama).

9.1 Hipótesis estadística

Hipótesis Nula: No hay relación entre la presencia o ausencia de BC y el CAAb, es decir, d=0

Hipótesis alternativa: La expectativa de CAAb en la población con cáncer difiere de la de la población control…. es decir, m1 no es igual a m2 Dado que el signo de la diferencia no es importante, la prueba será bilateral.

9.2 Consideraciones generales

De acuerdo con nuestros resultados anteriores, suponemos que

1. Las distribuciones de los resultados de las pruebas en cada grupo están cerca de la Normal o pueden transformarse a la Normal mediante transformación logarítmica.
2. La varianza de las distribuciones en los dos grupos son aproximadamente iguales
3. Teniendo en cuenta que este es un estudio piloto, consideraremos que los resultados son significativos si el valor de p bilateral es 0,1 o menos. Se eligió el límite de 0,1 en lugar de 0,05 para disminuir las posibilidades de exclusión aleatoria de algunas pruebas potencialmente informativas.

Al decidir la continuación del estudio no se asume ninguna corrección por comparaciones múltiples. Sin embargo, los resultados se presentarán sin y con la corrección utilizando el enfoque FDR de Benjamini y Hochberg (Benjamini, Hochberg 1995).

Cuando los límites de confianza sean apropiados, el nivel de confianza será del 95 %.

9.3 Tamaño de la muestra El tamaño de la muestra se calculó utilizando información relevante de nuestro estudio anterior sobre los péptidos P3 y P1 y el cáncer de mama. No hay información en la literatura sobre anticuerpos asociados al cáncer.

El tamaño de la muestra se calcula para un diseño de grupo secuencial de tres pasos con significación bilateral de 0,1 y 0,05, potencia de 0,8, para cáncer: relación de control 1:2, para D de 0,5. Los cálculos utilizaron las fórmulas estándar para el tamaño de la muestra necesarias para comparar los valores medios en dos grupos independientes mediante la prueba t. La corrección para un procedimiento secuencial de grupos con la prueba de O'Bien y Fleming aumenta los números en 1,017 y 1,027 para valores de significancia de 0,05 y 0,1, que es insignificante para nuestros tamaños de muestra. (ver C. Jennison, B.W.Turnbill Group Sequential Methods with Applications to Clinical Trials Chapmann&Hall(2000) Boca Raton FL US pp30 tabla 2.4).

Los cálculos se realizaron utilizando el software NCSS-PASS.

9.4 Evaluación de puntos finales

9.4.1 Análisis de efectividad

Una D calculada entre 0,3 y 0,5 marcará una prueba como no efectiva para usarse sola. Sin embargo, puede ser importante en combinación con otras pruebas como parte del procedimiento de prueba multivariable. Las pruebas con d<0,3 se considerarán no efectivas. Una prueba, o una combinación de pruebas, con d>0.5 marcará la prueba CAAb como efectiva.