Expressionsprofil von ERK5- und PKM2-Kinasen bei neuroinflammatorischen Erkrankungen. (NEUROKINASE)
NEUROKINASE: Expressionsprofil von ERK5- und PKM2-Kinasen bei neuroinflammatorischen Erkrankungen.
Demyelinisierende Erkrankungen stellen ein breites Spektrum von Erkrankungen dar und werden durch übermäßige Entzündungen hervorgerufen, die meistens durch einen Autoimmunmechanismus ausgelöst werden. Einige dieser Pathologien sind chronisch und betreffen das Zentralnervensystem wie Multiple Sklerose (MS), andere sind monophasisch und zielen auf das periphere Nervensystem ab, wie das Guillain-Barré-Syndrom (GBS).
Bei neuroinflammatorischen Pathologien verursachen die übermäßige Reaktion der entzündungsfördernden Th1- und Th17-Lymphozytenlinien und die unzureichende Reaktion der regulatorischen T-Lymphozyten (Treg) eine übermäßige Entzündung, die für das Nervengewebe schädlich ist. An der Regulation dieser Signalwege sind Schlüsselproteine wie Kinasen beteiligt. Modulation dieser Kinasen, die die Entwicklung neuer pharmakologischer Ziele für Neuroinflammation ermöglichen könnte.
Jüngste Arbeiten (unveröffentlichte Daten) haben einen Zusammenhang zwischen der Expression von ERK5- und PMK2-Kinasen und dem klinischen Schweregrad der experimentellen allergischen Enzephalomyelitis gezeigt, einem Mausmodell, das Multiple Sklerose nachahmt.
Um nach neuen Biomarkern zu suchen und unser Wissen über die Akteure der anfänglichen Entzündungsphase neuroinflammatorischer Pathologien zu verbessern, schlagen wir vor, die Unterschiede in der Expression von ERK5- und PKM2-Kinasen im Blut und in der Rückenmarksflüssigkeit (CSF) von Patienten zu untersuchen schubförmig remittierender MS und GBS sowohl durch RT-qPCR als auch durch Proteinquantifizierung. Wir wollen auch andere biologische Parameter untersuchen, darunter die Charakterisierung des entzündungsfördernden / entzündungshemmenden Gleichgewichts durch Zytokin-Assay und Lymphozyten-Phänotypisierung, Metabolom-Studie und Mild-Form-Neurofilament (NfL)-Assay.
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Die Untersuchung der Expression von ERK5- und PKM2-Kinasen bei Patienten, die wegen RR-MS oder GBS zu Beginn der Pathologie nachverfolgt wurden, wird ausgewertet.
Die übliche diagnostische Aufarbeitung für MS und GBS wird durchgeführt, um die Patienten in 4 Gruppen einzuteilen:
• Gruppe 1: Kontrollgruppe. Patienten, die die Kriterien für MS oder GBS nicht erfüllen und bei denen keine Differenzialdiagnose gestellt wurde.
Die Untergruppen 1a und 1b werden durch entsprechende Paarung mit den Gruppen 2 und 3 gebildet.
- Gruppe 2: Patienten mit RR-MS, bestätigt durch Macdonald-Kriterien (2017)
- Gruppe 3: Patienten mit GBS, bestätigt durch die Assoziation der üblichen klinischen und elektrophysiologischen Anzeichen.
- Gruppe 4: Patienten, bei denen eine Differentialdiagnose identifiziert wurde, um die Symptome zu erklären. Diese Patienten werden von der Analyse ausgeschlossen.
Allen Patienten wird eine zusätzliche Blutprobe (25 ml) und eine Probe der Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) (2 ml) entnommen, um die Laborparameter dieser Studie zu untersuchen. Mononukleäre Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) und Neutrophile werden unter Verwendung eines Percoll-Gradienten aus dem Blut isoliert. Proben der Gruppe 4 werden nicht analysiert.
Die Analyse konzentriert sich auf den Vergleich von Laborparametern zwischen Gruppe 2 und 3, zwischen Gruppe 1a und 2 und zwischen 1b und 3.
/ Expression von ERK5- und PKM2-Kinasen
Die Forscher wollen die Expression von ERK5 und PKM2 durch RT-qPCR analysieren, um das Transkriptom auf RNA-Ebene zu untersuchen, und durch Western Blot und ELISA, um die phosphorylierten und Gesamtformen der beiden Kinasen zu untersuchen.
RT-qPCR erfordert RNA-Extraktion, reverse Transkription in cDNA und dann Amplifikation der Gene, die ERK5 und PKM2 codieren, unter Verwendung von zuvor entworfenen spezifischen Primern. Die Ergebnisse werden mit denen verglichen, die mit Primern des HPRT-Gens erhalten wurden.
/ Untersuchung des Gleichgewichts zwischen entzündungsfördernder und entzündungshemmender Wirkung
Die Forscher möchten das Gleichgewicht zwischen entzündungsfördernder und entzündungshemmender Aktivität charakterisieren, indem sie die Lymphozyten-Phänotypisierung untersuchen und den Gehalt an Zytokinen bestimmen.
Die Lymphozyten-Phänotypisierung wird durch Durchflusszytometrie von PBMCs durchgeführt. Die untersuchten Populationen umfassen die Th1-, Th2-, Th9-, Th17-, Th22-, Treg- und TFH-Populationen.
Das Panel von hauptsächlich entzündlichen Zytokinen wird im Plasma und im Liquor durch ELISA untersucht. Das Panel umfasst die folgenden Zytokine: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
/ Stoffwechselanalyse
Die Datenbanken zu menschlichen Metabolomen umfassen mehr als 40.000 Metaboliten und ermöglichen die Erstellung von Stoffwechselprofilen in verschiedenen pathologischen Kontexten durch überwachte und unüberwachte statistische Analysetechniken. Metabolomanalysen werden aus Plasma und Liquor durchgeführt. Diese Analysen werden durch Flüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Massenspektrometrie (LC-MS) durch das Metabohub-Netzwerk (MetaboHUB-Clermont für Plasmaanalysen und MetaboHUB-Saclay für Liquoranalysen) durchgeführt.
- / Messung der Neurofilament-Leichtkette (NfL)
Es besteht wachsendes Interesse an der Messung von Neurofilamenten im Blut und insbesondere im Liquor. Hohe Konzentrationen an Neurofilamenten sind ein Beweis für neuronalen Verlust, unabhängig vom ursprünglichen Mechanismus. Die Neurofilament-Leichtkette (NfL) scheint die relevanteste Form zu sein, um den Axonverlust zu messen. Bei MS wurde während der ersten zwei Monate des akuten Rückfalls eine erhöhte NfL beobachtet. Umgekehrt gibt es nur wenige Daten zur Kinetik der NfL-Spiegel bei peripheren demyelinisierenden Erkrankungen.
Die Forscher beabsichtigen, die NfL-Spiegel im Blut und im Liquor zu untersuchen, um festzustellen, ob es einen Anstieg der NfL-Spiegel bei Patienten gibt, die wegen GBS nachbeobachtet wurden, und um die NfL-Spiegel dieser Patienten (Gruppe 3) mit Patienten zu vergleichen, die wegen MS (Gruppe 2) nachbeobachtet wurden.
Studientyp
Phase
- Unzutreffend
Kontakte und Standorte
Studienkontakt
- Name: Elodie POUGOUE TOUKO
- Telefonnummer: +33238744086
- E-Mail: elodie.pougoue-touko@chr-orleans.fr
Studienorte
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Orléans, Frankreich, 45067
- CHR Orléans
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Hauptermittler:
- Pascal AUZOU, Dr
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Mann und Frau
- 18 bis 80 Jahre alt
- Klinische Anzeichen, die innerhalb eines Monats nach Auftreten der Symptome auf MS oder GBS hindeuten
Ausschlusskriterien:
- Patient, der mit einer immunsuppressiven Therapie, einem Immunmodulator oder Kortikosteroiden in chronischer Behandlung behandelt wird
- Patient wurde im letzten Monat mit Kortikosteroiden behandelt
- ohne Sozialversicherung
- HIV-positive Serologie
- Demenz
- schwangere oder stillende Frau
- vorherige Teilnahme an der Studie
- unter gerichtlichem Schutz
- nicht kooperierender Patient
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
- Hauptzweck: Sonstiges
- Zuteilung: N / A
- Interventionsmodell: Einzelgruppenzuweisung
- Maskierung: Keine (Offenes Etikett)
Waffen und Interventionen
Teilnehmergruppe / Arm |
Intervention / Behandlung |
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Experimental: Patienten mit klinischen Anzeichen, die auf Multiple Sklerose (MS) oder Guillain-Barré-Syndrom (GBS) hindeuten
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Eine zusätzliche Blutprobe (25 ml) und eine Liquorprobe (2 ml) werden entnommen.
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Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Expression von Genen, die ERK5- und PKM2-Kinasen codieren, durch RT-qPCR
Zeitfenster: Tag 0
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Die Expression von ERK5 und PKM2 mittels RT-qPCR wird analysiert, um das Transkriptom auf RNA-Ebene zu untersuchen. RT-qPCR erfordert RNA-Extraktion, reverse Transkription in cDNA und dann Amplifikation der Gene, die ERK5 und PKM2 codieren, unter Verwendung von zuvor entworfenen spezifischen Primern. Die Ergebnisse werden mit denen verglichen, die mit Primern des HPRT-Gens erhalten wurden. Diese Analysen werden unter Verwendung von aus der Blutprobe isolierten Lymphozyten und Neutrophilen durchgeführt. |
Tag 0
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Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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Lymphozyten-Phänotypisierung
Zeitfenster: Tag 0
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Die Lymphozyten-Phänotypisierung wird durch Durchflusszytometrie von PBMCs durchgeführt.
Wir werden Antikörper gegen Th1-, Th2-, Th9-, Th17-, Th22-, Treg- und TFH-Populationen verwenden.
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Tag 0
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Zytokinspiegel
Zeitfenster: Tag 0
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Eine Gruppe von Zytokinen, hauptsächlich entzündungsfördernde, wird im Plasma und im Liquor mittels ELISA untersucht.
Das Panel umfasst die folgenden Zytokine: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
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Tag 0
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Metabolomanalyse
Zeitfenster: Tag 0
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Metabolomanalysen werden aus Plasma und Liquor durchgeführt.
Diese Analysen werden durch Flüssigkeitschromatographie gekoppelt mit Massenspektrometrie (LC-MS) durch das Metabohub-Netzwerk (MetaboHUB-Clermont für Plasmaanalysen und MetaboHUB-Saclay für Liquoranalysen) durchgeführt.
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Tag 0
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Messung der Neurofilament-Leichtkette (NfL)
Zeitfenster: Tag 0
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Die NfL-Spiegel im Blut und im Liquor werden untersucht, um festzustellen, ob es einen Anstieg der NfL-Spiegel bei Patienten gibt, die wegen GBS nachbeobachtet werden, und um die NfL-Spiegel dieser Patienten mit Patienten zu vergleichen, die wegen MS nachbeobachtet werden.
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Tag 0
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Mitarbeiter und Ermittler
Ermittler
- Hauptermittler: Pascal AUZOU, Dr, CHR Orléans
Publikationen und hilfreiche Links
Allgemeine Veröffentlichungen
- Thompson AJ, Banwell BL, Barkhof F, Carroll WM, Coetzee T, Comi G, Correale J, Fazekas F, Filippi M, Freedman MS, Fujihara K, Galetta SL, Hartung HP, Kappos L, Lublin FD, Marrie RA, Miller AE, Miller DH, Montalban X, Mowry EM, Sorensen PS, Tintore M, Traboulsee AL, Trojano M, Uitdehaag BMJ, Vukusic S, Waubant E, Weinshenker BG, Reingold SC, Cohen JA. Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria. Lancet Neurol. 2018 Feb;17(2):162-173. doi: 10.1016/S1474-4422(17)30470-2. Epub 2017 Dec 21.
- Gaetani L, Salvadori N, Lisetti V, Eusebi P, Mancini A, Gentili L, Borrelli A, Portaccio E, Sarchielli P, Blennow K, Zetterberg H, Parnetti L, Calabresi P, Di Filippo M. Cerebrospinal fluid neurofilament light chain tracks cognitive impairment in multiple sclerosis. J Neurol. 2019 Sep;266(9):2157-2163. doi: 10.1007/s00415-019-09398-7. Epub 2019 May 25.
- Kuhle J, Plattner K, Bestwick JP, Lindberg RL, Ramagopalan SV, Norgren N, Nissim A, Malaspina A, Leppert D, Giovannoni G, Kappos L. A comparative study of CSF neurofilament light and heavy chain protein in MS. Mult Scler. 2013 Oct;19(12):1597-603. doi: 10.1177/1352458513482374. Epub 2013 Mar 25.
- Kamil K, Yazid MD, Idrus RBH, Das S, Kumar J. Peripheral Demyelinating Diseases: From Biology to Translational Medicine. Front Neurol. 2019 Mar 19;10:87. doi: 10.3389/fneur.2019.00087. eCollection 2019.
- Khalil M, Teunissen CE, Otto M, Piehl F, Sormani MP, Gattringer T, Barro C, Kappos L, Comabella M, Fazekas F, Petzold A, Blennow K, Zetterberg H, Kuhle J. Neurofilaments as biomarkers in neurological disorders. Nat Rev Neurol. 2018 Oct;14(10):577-589. doi: 10.1038/s41582-018-0058-z.
- Rostami A, Ciric B. Role of Th17 cells in the pathogenesis of CNS inflammatory demyelination. J Neurol Sci. 2013 Oct 15;333(1-2):76-87. doi: 10.1016/j.jns.2013.03.002. Epub 2013 Apr 8.
- Venken K, Hellings N, Thewissen M, Somers V, Hensen K, Rummens JL, Medaer R, Hupperts R, Stinissen P. Compromised CD4+ CD25(high) regulatory T-cell function in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis is correlated with a reduced frequency of FOXP3-positive cells and reduced FOXP3 expression at the single-cell level. Immunology. 2008 Jan;123(1):79-89. doi: 10.1111/j.1365-2567.2007.02690.x. Epub 2007 Sep 25.
- Yuan A, Rao MV, Veeranna, Nixon RA. Neurofilaments and Neurofilament Proteins in Health and Disease. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2017 Apr 3;9(4):a018309. doi: 10.1101/cshperspect.a018309.
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Voraussichtlich)
Primärer Abschluss (Voraussichtlich)
Studienabschluss (Voraussichtlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
- Pathologische Prozesse
- Erkrankungen des Nervensystems
- Erkrankungen des Immunsystems
- Demyelinisierende Autoimmunerkrankungen, ZNS
- Autoimmunerkrankungen des Nervensystems
- Demyelinisierende Krankheiten
- Autoimmunerkrankungen
- Neuromuskuläre Erkrankungen
- Erkrankungen des peripheren Nervensystems
- Polyradikuloneuropathie
- Polyneuropathien
- Multiple Sklerose
- Entzündung
- Guillain Barre-Syndrom
Andere Studien-ID-Nummern
- CHRO-2018-07
Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
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