Profil exprese kináz ERK5 a PKM2 u neurozánětlivých onemocnění. (NEUROKINASE)
NEUROKINÁZA: Profil exprese kináz ERK5 a PKM2 u neurozánětlivých onemocnění.
Demyelinizační onemocnění představují široké spektrum poruch a jsou vyvolána nadměrným zánětem, nejčastěji spouštěným autoimunitním mechanismem. Některé z těchto patologií jsou chronické a ovlivňují centrální nervový systém, jako je roztroušená skleróza (MS), jiné jsou monofázové a zaměřují se na periferní nervový systém, jako je syndrom Guillain Barré (GBS).
U neurozánětlivých patologií způsobuje nadměrná odpověď prozánětlivých linií Th1 a Th17 lymfocytů a nedostatečná odpověď regulačních T lymfocytů (Treg) nadměrný zánět, který je škodlivý pro nervovou tkáň. Regulace těchto signálních drah zahrnuje klíčové proteiny, jako jsou kinázy. Modulace těchto kináz, která by mohla umožnit vývoj nových farmakologických cílů pro neurozánět.
Nedávná práce (nepublikovaná data) ukázala souvislost mezi expresí kináz ERK5 a PMK2 a klinickou závažností experimentální alergické encefalomyelitidy, myšího modelu, který napodobuje roztroušenou sklerózu.
Abychom hledali nové biomarkery a zlepšili naše znalosti o aktérech počáteční zánětlivé fáze neurozánětlivých patologií, navrhujeme studovat rozdíly v expresi kináz ERK5 a PKM2 v krvi a mozkomíšním moku (CSF) pacientů sledovaných pro relabující-remitující RS a GBS pomocí RT-qPCR a proteinové kvantifikace. Chceme také studovat další biologické parametry, které zahrnují charakterizaci pro/protizánětlivé rovnováhy cytokinovým testem a fenotypizací lymfocytů, studii metabolomu a test mírné formy neurofilament (NfL).
Přehled studie
Postavení
Intervence / Léčba
Detailní popis
Bude vyhodnocena studie exprese kináz ERK5 a PKM2 u pacientů sledovaných pro RR MS nebo GBS na počátku patologie.
Provede se obvyklé diagnostické zpracování pro RS a GBS za účelem klasifikace pacientů do 4 skupin:
• Skupina 1 : kontrolní skupina. Pacienti, kteří nesplňují kritéria pro RS nebo GBS a u kterých nebyla provedena diferenciální diagnóza.
Podskupiny 1a a 1b budou vytvořeny příslušným párováním se skupinami 2 a 3.
- Skupina 2: pacienti s RR RS potvrzenou podle Macdonaldových kritérií (2017)
- Skupina 3: pacienti s GBS potvrzeným asociací obvyklých klinických a elektrofyziologických příznaků.
- Skupina 4: pacienti, u kterých byla identifikována diferenciální diagnóza k vysvětlení symptomů. Tito pacienti budou z analýzy vyloučeni.
Všem pacientům bude odebrán další vzorek krve (25 ml) a vzorek mozkomíšního moku (CSF) (2 ml), aby bylo možné studovat laboratorní parametry této studie. Mononukleární buňky periferní krve (PBMC) a neutrofily budou izolovány z krve pomocí Percoll gradientu. Vzorky skupiny 4 nebudou analyzovány.
Analýza se zaměří na srovnání laboratorních parametrů mezi skupinou 2 a 3, mezi skupinou 1a a 2 a mezi 1b a 3.
/ Exprese kináz ERK5 a PKM2
Vyšetřovatelé si přejí analyzovat expresi ERK5 a PKM2 pomocí RT-qPCR pro zkoumání transkriptomu na úrovni RNA a pomocí Western Blot a ELISA pro zkoumání fosforylovaných a celkových forem těchto dvou kináz.
RT-qPCR vyžaduje extrakci RNA, reverzní transkripci do cDNA a poté amplifikaci genů kódujících ERK5 a PKM2 pomocí předem navržených specifických primerů. Výsledky budou porovnány s výsledky získanými s primery genu HPRT.
/ Studium rovnováhy mezi pro a protizánětlivým působením
Výzkumníci chtějí charakterizovat rovnováhu pro a protizánětlivé aktivity studiem fenotypizace lymfocytů a stanovením hladiny cytokinů.
Fenotypizace lymfocytů bude provedena průtokovou cytometrií z PBMC. Studované populace budou zahrnovat populace Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg a TFH.
Panel převážně zánětlivých cytokinů bude studován v plazmě a v CSF pomocí ELISA. Panel obsahuje následující cytokiny: IL17, TNF, IL6, IL 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
/ Metabolomová analýza
Databáze lidských metabolomů zahrnují více než 40 000 metabolitů a umožňují stanovení metabolických profilů v různých patologických kontextech pomocí technik statistické analýzy pod dohledem a bez dozoru. Metabolomové analýzy budou provedeny z plazmy a CSF. Tyto analýzy budou prováděny kapalinovou chromatografií spojenou s hmotnostní spektrometrií (LC-MS) sítí Metabohub (MetaboHUB-Clermont pro analýzy plazmy a MetaboHUB-Saclay pro analýzy CSF).
- / Měření lehkého řetězce neurofilamentů (NfL)
Roste zájem o měření neurofilament v krvi a zejména v CSF. Vysoké hladiny neurofilament jsou důkazem ztráty neuronů bez ohledu na počáteční mechanismus. Neurofilamentní lehký řetězec (NfL) se zdá být nejrelevantnější formou pro měření axonální ztráty. U RS byl během prvních dvou měsíců akutního relapsu pozorován zvýšený NfL. Naopak, existuje jen málo údajů o kinetice hladin NfL u periferních demyelinizačních onemocnění.
Výzkumníci mají v úmyslu studovat hladiny NfL v krvi a mozkomíšním moku, aby zjistili, zda došlo ke zvýšení hladin NfL u pacientů sledovaných pro GBS, a porovnat hladiny NfL u těchto pacientů (skupina 3) s pacienty sledovanými pro RS (skupina 2).
Typ studie
Fáze
- Nelze použít
Kontakty a umístění
Studijní kontakt
- Jméno: Elodie POUGOUE TOUKO
- Telefonní číslo: +33238744086
- E-mail: elodie.pougoue-touko@chr-orleans.fr
Studijní místa
-
-
-
Orléans, Francie, 45067
- CHR Orléans
-
Vrchní vyšetřovatel:
- Pascal AUZOU, Dr
-
-
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Popis
Kritéria pro zařazení:
- Muž a žena
- 18 až 80 let
- Klinické příznaky, které naznačují RS nebo GBS do jednoho měsíce od nástupu příznaku
Kritéria vyloučení:
- Pacient léčený imunosupresivní léčbou, imunomodulátory nebo kortikosteroidy v chronické léčbě
- Pacient léčený kortikosteroidy v posledním měsíci
- bez sociálního zabezpečení
- HIV pozitivní sérologie
- demence
- těhotná nebo kojící žena
- předchozí účast ve studii
- pod soudní ochranou
- nespolupracující pacient
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
- Primární účel: Jiný
- Přidělení: N/A
- Intervenční model: Přiřazení jedné skupiny
- Maskování: Žádné (otevřený štítek)
Zbraně a zásahy
Skupina účastníků / Arm |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Experimentální: Pacienti s klinickými příznaky, které naznačují roztroušenou sklerózu (RS) nebo Guillain Barré syndrom (GBS)
|
Bude odebrán další vzorek krve (25 ml) a vzorek mozkomíšního moku (2 ml).
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Exprese genů kódujících kinázy ERK5 a PKM2 pomocí RT-qPCR
Časové okno: Den 0
|
Exprese ERK5 a PKM2 pomocí RT-qPCR bude analyzována za účelem zkoumání transkriptomu na úrovni RNA. RT-qPCR vyžaduje extrakci RNA, reverzní transkripci do cDNA a poté amplifikaci genů kódujících ERK5 a PKM2 pomocí předem navržených specifických primerů. Výsledky budou porovnány s výsledky získanými s primery genu HPRT. Tyto analýzy se provádějí pomocí lymfocytů a neutrofilů izolovaných ze vzorku krve. |
Den 0
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Fenotypizace lymfocytů
Časové okno: Den 0
|
Fenotypizace lymfocytů bude provedena průtokovou cytometrií z PBMC.
Použijeme protilátky proti populaci Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg a TFH.
|
Den 0
|
|
Hladiny cytokinů
Časové okno: Den 0
|
Panel cytokinů, zejména prozánětlivých, bude studován v plazmě a v CSF pomocí ELISA.
Panel obsahuje následující cytokiny: IL17, TNF, IL6, IL 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
|
Den 0
|
|
Metabolomová analýza
Časové okno: Den 0
|
Metabolomové analýzy budou provedeny z plazmy a CSF.
Tyto analýzy budou prováděny kapalinovou chromatografií spojenou s hmotnostní spektrometrií (LC-MS) sítí Metabohub (MetaboHUB-Clermont pro analýzy plazmy a MetaboHUB-Saclay pro analýzy CSF).
|
Den 0
|
|
Měření lehkého řetězce neurofilamentů (NfL)
Časové okno: Den 0
|
Hladiny NfL v krvi a CSF budou studovány, aby se určilo, zda došlo ke zvýšení hladin NfL u pacientů sledovaných pro GBS, a aby se porovnaly hladiny NfL těchto pacientů s pacienty sledovanými pro RS.
|
Den 0
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Vyšetřovatelé
- Vrchní vyšetřovatel: Pascal AUZOU, Dr, CHR Orléans
Publikace a užitečné odkazy
Obecné publikace
- Thompson AJ, Banwell BL, Barkhof F, Carroll WM, Coetzee T, Comi G, Correale J, Fazekas F, Filippi M, Freedman MS, Fujihara K, Galetta SL, Hartung HP, Kappos L, Lublin FD, Marrie RA, Miller AE, Miller DH, Montalban X, Mowry EM, Sorensen PS, Tintore M, Traboulsee AL, Trojano M, Uitdehaag BMJ, Vukusic S, Waubant E, Weinshenker BG, Reingold SC, Cohen JA. Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria. Lancet Neurol. 2018 Feb;17(2):162-173. doi: 10.1016/S1474-4422(17)30470-2. Epub 2017 Dec 21.
- Gaetani L, Salvadori N, Lisetti V, Eusebi P, Mancini A, Gentili L, Borrelli A, Portaccio E, Sarchielli P, Blennow K, Zetterberg H, Parnetti L, Calabresi P, Di Filippo M. Cerebrospinal fluid neurofilament light chain tracks cognitive impairment in multiple sclerosis. J Neurol. 2019 Sep;266(9):2157-2163. doi: 10.1007/s00415-019-09398-7. Epub 2019 May 25.
- Kuhle J, Plattner K, Bestwick JP, Lindberg RL, Ramagopalan SV, Norgren N, Nissim A, Malaspina A, Leppert D, Giovannoni G, Kappos L. A comparative study of CSF neurofilament light and heavy chain protein in MS. Mult Scler. 2013 Oct;19(12):1597-603. doi: 10.1177/1352458513482374. Epub 2013 Mar 25.
- Kamil K, Yazid MD, Idrus RBH, Das S, Kumar J. Peripheral Demyelinating Diseases: From Biology to Translational Medicine. Front Neurol. 2019 Mar 19;10:87. doi: 10.3389/fneur.2019.00087. eCollection 2019.
- Khalil M, Teunissen CE, Otto M, Piehl F, Sormani MP, Gattringer T, Barro C, Kappos L, Comabella M, Fazekas F, Petzold A, Blennow K, Zetterberg H, Kuhle J. Neurofilaments as biomarkers in neurological disorders. Nat Rev Neurol. 2018 Oct;14(10):577-589. doi: 10.1038/s41582-018-0058-z.
- Rostami A, Ciric B. Role of Th17 cells in the pathogenesis of CNS inflammatory demyelination. J Neurol Sci. 2013 Oct 15;333(1-2):76-87. doi: 10.1016/j.jns.2013.03.002. Epub 2013 Apr 8.
- Venken K, Hellings N, Thewissen M, Somers V, Hensen K, Rummens JL, Medaer R, Hupperts R, Stinissen P. Compromised CD4+ CD25(high) regulatory T-cell function in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis is correlated with a reduced frequency of FOXP3-positive cells and reduced FOXP3 expression at the single-cell level. Immunology. 2008 Jan;123(1):79-89. doi: 10.1111/j.1365-2567.2007.02690.x. Epub 2007 Sep 25.
- Yuan A, Rao MV, Veeranna, Nixon RA. Neurofilaments and Neurofilament Proteins in Health and Disease. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2017 Apr 3;9(4):a018309. doi: 10.1101/cshperspect.a018309.
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia (Očekávaný)
Primární dokončení (Očekávaný)
Dokončení studie (Očekávaný)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (Aktuální)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (Aktuální)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
- Patologické procesy
- Nemoci nervového systému
- Onemocnění imunitního systému
- Demyelinizační autoimunitní onemocnění, CNS
- Autoimunitní onemocnění nervového systému
- Demyelinizační onemocnění
- Autoimunitní onemocnění
- Neuromuskulární onemocnění
- Onemocnění periferního nervového systému
- Polyradikuloneuropatie
- Polyneuropatie
- Roztroušená skleróza
- Zánět
- Guillain-Barre syndrom
Další identifikační čísla studie
- CHRO-2018-07
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .