Ekspressionsprofil af ERK5- og PKM2-kinaser i neuroinflammatoriske sygdomme. (NEUROKINASE)

Undersøgelsen af ​​ekspressionen af ​​ERK5- og PKM2-kinaser hos patienter fulgt for RR MS eller GBS, i begyndelsen af ​​patologien, vil blive evalueret.

Den sædvanlige diagnostiske undersøgelse for MS og GBS vil blive udført for at klassificere patienter i 4 grupper:

• Gruppe 1: kontrolgruppe. Patienter, der ikke opfylder kriterierne for MS eller GBS, og hvor der ikke er stillet en differentialdiagnose.

Undergruppe 1a og 1b vil blive dannet ved respektive parring med gruppe 2 og 3.

• Gruppe 2: patienter med RR MS bekræftet af Macdonald-kriterier (2017)
• Gruppe 3 : patienter med GBS bekræftet ved at forbinde de sædvanlige kliniske og elektrofysiologiske tegn.
• Gruppe 4: patienter, hvor der er identificeret en differentialdiagnose for at forklare symptomerne. Disse patienter vil blive udelukket fra analysen.

En ekstra blodprøve (25 ml) og cerebrospinalvæske (CSF) prøve (2 ml) vil blive taget fra alle patienter for at studere laboratorieparametrene for denne undersøgelse. Perifere blodmononukleære celler (PBMC'er) og neutrofiler vil blive isoleret fra blodet ved hjælp af en Percoll-gradient. Gruppe 4 prøver vil ikke blive analyseret.

Analysen vil fokusere på sammenligning af laboratorieparametre mellem gruppe 2 og 3, mellem gruppe 1a og 2 og mellem 1b og 3.

1. / Ekspression af ERK5- og PKM2-kinaser

   Efterforskerne ønsker at analysere ekspressionen af ​​ERK5 og PKM2 ved RT-qPCR for at undersøge transkriptomet på RNA-niveau og ved Western Blot og ELISA for at undersøge de phosphorylerede og totale former af de to kinaser.

   RT-qPCR kræver RNA-ekstraktion, revers transkription til cDNA og derefter amplifikation af generne, der koder for ERK5 og PKM2 ved hjælp af specifikke primere designet på forhånd. Resultaterne vil blive sammenlignet med dem opnået med primere af HPRT-genet.

2. / Undersøgelse af balancen mellem pro og anti-inflammatorisk virkning

   Forskerne ønsker at karakterisere balancen mellem pro- og anti-inflammatorisk aktivitet ved at studere lymfocytfænotypning og bestemme niveauet af cytokiner.

   Lymfocytfænotypning vil blive udført ved flowcytometri fra PBMC'er. De undersøgte populationer vil omfatte Th1-, Th2-, Th9-, Th17-, Th22-, Treg- og TFH-populationerne.

   Panelet af hovedsageligt inflammatoriske cytokiner vil blive undersøgt i plasma og i CSF ved ELISA. Panelet omfatter følgende cytokiner: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23

3. / Metabolomanalyse

   Databaserne om humane metabolomer omfatter mere end 40.000 metabolitter og tillader etablering af metaboliske profiler i forskellige patologiske sammenhænge ved overvågede og uovervågede statistiske analyseteknikker. Metabolomanalyser vil blive udført fra plasma og CSF. Disse analyser vil blive udført ved væskekromatografi koblet med massespektrometri (LC-MS) af Metabohub-netværket (MetaboHUB-Clermont til plasmaanalyser og MetaboHUB-Saclay til CSF-analyser).

4. / Måling af neurofilamentets lette kæde (NfL)

Der er stigende interesse for neurofilaments mål i blodet og især i CSF. Høje niveauer af neurofilamenter er tegn på neuronalt tab, uanset den oprindelige mekanisme. Neurofilament let kæde (NfL) synes at være den mest relevante form til at måle aksonalt tab. Ved MS blev øget NfL observeret i de første to måneder af akut tilbagefald. Omvendt er der få data om kinetikken af ​​NfL's niveauer i perifere demyeliniserende sygdomme.

Efterforskerne har til hensigt at undersøge NfL-niveauer i blod og CSF for at afgøre, om der er en stigning i NfL-niveauer hos patienter, der følges for GBS, og at sammenligne NfL-niveauer for disse patienter (gruppe 3) med patienter fulgt for MS (gruppe 2).